發(fā)布時(shí)間：2021-03-03 11:22

　　抗血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF）抗體可抑制新生血管的形成和生長,在年齡相關(guān)性黃斑變性眼科疾病的臨床治療中具有重要應(yīng)用價(jià)值,特別是已上市的商品名為雷珠單抗的VEGF抗體Fab片段,在市場上取得巨大成功。本研究探索了雷珠單抗在大腸埃希菌中的胞外分泌表達(dá)技術(shù),所表達(dá)的產(chǎn)品利用SDS-PAGE、Western Blot、肽譜圖全序列分析和納米差示掃描量熱法（Nano DSC）等手段進(jìn)行了初步的結(jié)構(gòu)表征。結(jié)果顯示,本研究成功實(shí)現(xiàn)了雷珠單抗的大腸埃希菌胞外分泌表達(dá),經(jīng)過進(jìn)一步的Capto L親和色譜獲得了有正確氨基酸序列的Fab產(chǎn)品,經(jīng)質(zhì)譜分析具有正確的二硫鍵配對(duì),且具有與標(biāo)準(zhǔn)品相似的熱穩(wěn)定性,為其進(jìn)一步的工業(yè)生產(chǎn)奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來源】：中國醫(yī)藥工業(yè)雜志. 2020,51(02)北大核心

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

A：誘導(dǎo)條件為16℃、轉(zhuǎn)速180r/min的表達(dá)結(jié)果，B：誘導(dǎo)條件為20℃、轉(zhuǎn)速200r/min的表達(dá)結(jié)果，C：不同組分中目的蛋白的分布(WesternBlot)，D：不同組分中目的蛋白的分布

?票?雷珠單抗具有正確的二級(jí)結(jié)構(gòu)。2.6雷珠單抗的熱穩(wěn)定性分析取濃度為1mg/ml的純化樣品或雷珠單抗標(biāo)準(zhǔn)品200μl，加入到納米差示掃描量熱儀(nanodifferentialscanningcalorimetry，NanoDSC)自帶的微量毛細(xì)管中。同法取PBS作為空白對(duì)照，設(shè)置溫度梯度為10～95℃，升溫速度為1℃/min。根據(jù)<4040~5050~8080~200≥200180160240320400ABQuery140120100806040200-20500-50-100-150-200ExoTm=74.55℃Tm=74.02℃圖5融化焓變/kJ.mo-l1融化焓變/kJ.mo-l1100A：所有肽段與理論序列的比對(duì)結(jié)果，B：二級(jí)質(zhì)譜覆蓋度及二硫鍵配對(duì)分析圖5雷珠單抗肽譜覆蓋率Fig.5MassPeptideMappingCoverageofRanibizumab

融化

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]抗VEGF抗體Fab片段在大腸埃希菌中的可溶性表達(dá)策略[J]. 郎曉薇,李亮助,丁凱,陳俊升,朱建偉.  中國醫(yī)藥工業(yè)雜志. 2017(11)
[2]抗VEGF單克隆抗體Fab片段在E.coli中的分泌表達(dá)[J]. 王志龍,王英明,劉崢兆,盧大儒,朱化星.  中國生物工程雜志. 2014(07)
[3]原核系統(tǒng)可溶性表達(dá)策略[J]. 劉爽,胡寶成.  生物技術(shù)通訊. 2005(02)

博士論文
[1]活性多肽的分泌表達(dá)研究[D]. 聞崇煒.中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院） 2003



本文編號(hào)：3061176