小分子抗菌肽參與宿主內(nèi)在免疫系統(tǒng)的構(gòu)成,有獨特的作用機制,難以誘導藥物耐藥性產(chǎn)生,受到了越來越多的關(guān)注。但是天然抗菌肽存在酶解穩(wěn)定性差、生物利用度低、有一定細胞毒性等缺陷,限制了抗菌肽的發(fā)展應(yīng)用。本研究的第一部分工作是采用非天然D型氨基酸（D-Leu,D-Lys,D-Arg）對天然抗菌肽Anoplin的親水面和疏水面分別進行進行氨基酸替換結(jié)構(gòu)改造,共得到10條含部分D型氨基酸替換的Anoplin類似物。通過系列結(jié)構(gòu)改造和構(gòu)效關(guān)系研究探討Anoplin最敏感的酶切位點。本構(gòu)效研究結(jié)果顯示,在不同部位進行D型氨基酸替換會對其抗菌活性、穩(wěn)定性和二級結(jié)構(gòu)產(chǎn)生不同影響。其中疏水面替換類似物Anoplin-D9,10和Anoplin-D9,10,3保留了抗菌活性,并且在對抗大腸桿菌（ATCC 25922）時Anoplin-D9,10,3的抗菌活性相比母肽Anoplin提高了1倍;但其余D型替換類似物抗菌活性喪失。通過對所有D型氨基酸類似物進行穩(wěn)定性考察結(jié)果顯示,相比于母肽Anoplin,疏水面替換類似物Anoplin-D9,10,3耐受糜蛋白酶降解的能力提高10倍,耐受胰蛋白酶降解的能力改善不明顯... 

【文章來源】：蘭州大學甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：125 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
第一章 綜述
    1.1 抗菌肽的背景介紹
        1.1.1 抗菌肽的概念及類別
        1.1.2 抗菌肽的構(gòu)象
        1.1.3 抗菌肽的作用機制
        1.1.4 抗菌肽的發(fā)展前景與實際問題
    1.2 影響抗菌肽生物活性的相關(guān)參數(shù)
        1.2.1 電荷數(shù)
        1.2.2 螺旋度
        1.2.3 疏水性
    1.3 提高抗菌肽穩(wěn)定性的改造方法
    1.4 天然抗菌肽Anoplin的研究背景
    1.5 “點擊化學”反應(yīng)在肽類藥物結(jié)構(gòu)改造中的應(yīng)用
    1.6 中藥單體熊果酸的背景介紹
第二章 新型Anoplin的D型氨基酸結(jié)構(gòu)改造類似物的設(shè)計、合成與活性研究
    2.1 設(shè)計思路
    2.2 實驗材料與方法
        2.2.1 實驗用品
        2.2.2 溶劑預(yù)處理
        2.2.3 新型Anoplin的D型氨基酸替換類似物的合成
        2.2.4 細菌菌株
        2.2.5 體外抗菌活性的考察
        2.2.6 酶解穩(wěn)定性考察
        2.2.7 RP-HPLC降解率-時間分析
        2.2.8 安全性評價
        2.2.9 二級結(jié)構(gòu)的考察
        2.2.10 數(shù)據(jù)處理
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 新型Anoplin的D型氨基酸替換類似物的合成
        2.3.2 抗菌活性評價
        2.3.3 酶解穩(wěn)定性考察
        2.3.4 RP-HPLC降解率-時間分析結(jié)果
        2.3.5 安全性評估
        2.3.6 二級結(jié)構(gòu)考察
    2.4 討論
第三章 新型Anoplin含D型氨基酸的二聚體類似物的設(shè)計、合成及相關(guān)研究
    3.1 設(shè)計思路
    3.2 實驗材料與方法
        3.2.1 試劑藥品與實驗儀器
2N₃）">        3.2.2 自制疊氮試劑（Tf₂N₃）
        3.2.3 同源二聚體類似物J-AA-（D4,7）2的合成方法
        3.2.4 含D型氨基酸的同源二聚體類似物J-AA-（D5,7）2的合成方法
        3.2.5 含D型氨基酸的雜聚化二聚體類似物J-AA-（D4,7+D5,7）的合成方法
        3.2.6 含D型氨基酸的雜聚化二聚體類似物J-AA-（D9,10,3+D5,7）的合成方法
        3.2.7 細菌菌株與實驗動物
        3.2.8 最低抑菌濃度（MIC）和最低殺菌濃度（MBC）的測定
        3.2.9 殺菌動力學試驗
        3.2.10 徑向擴散試驗
        3.2.11 聯(lián)合用藥效果的評價
        3.2.12 聯(lián)合用藥殺菌動力學
        3.2.13 抑制生物膜形成率
        3.2.14 穩(wěn)定性考察
        3.2.15 RP-HPLC降解率-時間分析
        3.2.16 溶血活性
        3.2.17 細胞Mtt試驗
        3.2.18 體內(nèi)有效性考察
        3.2.19 作用機制的考察
        3.2.20 二級結(jié)構(gòu)的考察
        3.2.21 統(tǒng)計學分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 新型Anoplin含D型氨基酸的二聚體類似物的合成
        3.3.2 最低抑菌濃度（MIC）和最低殺菌濃度（MBC）的測定結(jié)果
        3.3.3 抗菌肽二聚體類似物的殺菌動力學
        3.3.4 徑向擴散
        3.3.5 聯(lián)合用藥抗菌活性
        3.3.6 聯(lián)合用藥動力學
        3.3.7 抑制生物膜
        3.3.8 穩(wěn)定性考察
        3.3.9 RP-HPLC降解率-時間分析曲線
        3.3.10 溶血作用
        3.3.11 細胞Mtt試驗
        3.3.12 抗菌肽對小鼠急性大腸桿菌腹膜炎模型的治療
        3.3.13 聯(lián)合用藥對小鼠急性腹膜炎模型的治療
        3.3.14 抗菌肽對環(huán)磷酰胺預(yù)處理小鼠預(yù)防保護性作用評估
        3.3.15 抗菌肽二聚體類似物對細菌外膜、內(nèi)膜的破壞性作用
        3.3.16 掃描電鏡
        3.3.17 PI攝取
        3.3.18 PI流式結(jié)果
        3.3.19 活性氧的檢測
        3.3.20 抗菌肽二聚體類似物的二級結(jié)構(gòu)
    3.4 討論
第四章 中藥單體熊果酸聯(lián)合抗菌肽二聚體類似物聯(lián)合抗菌作用及機制探討
    4.1 實驗材料
    4.2 實驗方法
        4.2.1 熊果酸抗菌作用的評估
        4.2.2 熊果酸抗菌機制的研究方法
        4.2.3 熊果酸聯(lián)合抗菌肽J-AA-（D9,10,3+D5,7）的抗菌作用考察
        4.2.4 聯(lián)合用藥動力學考察
        4.2.5 熊果酸聯(lián)合抗菌肽J-AA-（D9,10,3+D5,7）抑制生物膜形成能力的評估
        4.2.6 聯(lián)合用藥組PI流式的定量分析方法
        4.2.7 數(shù)據(jù)處理
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 熊果酸的抗菌活性
        4.3.2 中藥單體熊果酸的抗菌機制
        4.3.3 中藥單體熊果酸聯(lián)合抗菌肽J-AA-（D9,10,3+D5,7）的抗菌作用
        4.3.4 聯(lián)合用藥的殺菌動力學試驗
        4.3.5 聯(lián)合用藥的PI流式
        4.3.6 聯(lián)合用藥共同抑制金黃色葡萄球菌生物膜的形成
    4.4 討論
論文研究總結(jié)
參考文獻
縮略詞中英文對照表
在學期間研究成果
致謝
附錄



本文編號：2994768