發(fā)布時(shí)間：2021-01-14 03:23

　　急性T淋巴白血�。═-ALL）是一類侵襲性強(qiáng)、預(yù)后較差的血液系統(tǒng)的惡性疾病,發(fā)病機(jī)制尚不明確,研究表明有55%以上的T-ALL患者存在Notch1激活性突變�，F(xiàn)有的化療藥物普遍存在毒副作用大、易產(chǎn)生耐藥性等缺點(diǎn),因此尋找新的能夠克服耐藥性且針對(duì)Notch1通路的低毒高效藥物是治療T-ALL的關(guān)鍵�？辜纳x(chóng)藥物甲苯達(dá)唑（MBZ）安全性高,已證實(shí)對(duì)多種腫瘤細(xì)胞有不同程度的抑制作用。本文中,我們首次通過(guò)MTS實(shí)驗(yàn)和Annexin V-FITC/PI流式細(xì)胞術(shù)發(fā)現(xiàn)MBZ對(duì)T-ALL細(xì)胞（CCRF-CEM）及耐藥株（CEM/C1）具有很好的抑制活性和促凋亡作用。通過(guò)流式DAPI染色檢測(cè)細(xì)胞周期以及熒光顯微鏡觀察MBZ對(duì)T-ALL細(xì)胞的微管破壞,證實(shí)MBZ能通過(guò)靶向微管,使細(xì)胞周期停滯在G2/M期,并激活Caspase凋亡通路。之后經(jīng)RT q-PCR實(shí)驗(yàn)證明耐藥株CEM/C1細(xì)胞中的ABCB1 mRNA表達(dá)量是CCRF-CEM細(xì)胞的17倍,同時(shí)實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)MBZ給藥24 h和48 h對(duì)T-ALL細(xì)胞中P-糖蛋白（P-gp）mRNA相對(duì)表達(dá)具有不同的作用效果。除此之外,Western Blot和RT ... 

【文章來(lái)源】：華東理工大學(xué)上海市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．３靶向微管的抗腫瘤藥物作用機(jī)制Ｍ??Ｆｉｇ．?１．３?Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ?ｏｆ?ｔａｒｇｅｔｉｎｇ?ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅｓ?ａｎｔｉｔｕｍｏｒ?ｄｒｕｇ［３８１??１．６微管靶向藥物的挑戰(zhàn)??

?ＣＥＭ／Ｃ１?Ｂ?ＣＣＲＦ－ＣＥＭ??１＇５＇?ＦＬＵ?１＇５１?ＦＬＵ??ｈｋ?ＭＢＺ?＋?ＭＢＺ??Ｉ１０－?Ｖ?＾?！１＇０＇?Ｖ?Ｔ?讀??＞?°－５－?＾?＞?°－５－??０．０?￣Ｉ?１?１?１?１?１—?〇．〇－Ｉ￣Ｉ?１?１?１?１?１—??Ｃｏｎｔ?０．１０?０．２０?０．５?１．０?２．０?Ｃｏｎｔ?０．１０?０．２０?０．５?１．０?２．０??Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ?丨ｆｉＭ］?Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ?［ｊｉＭ］??圖２．１?５００?ｎＭ濃度的ＭＢＺ、ＡＢＺ、ＦＬＵ處理耐藥株ＣＥＭ／Ｃ１細(xì)胞和ＣＣＲＦ－ＣＥＭ細(xì)胞２４?ｈ后的??抑制作用柱狀圖。??Ｆｉｇ．２．１?ＣＣＲＦ－ＣＥＭ?（ｎｏｎ－ｃｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｔ）?ａｎｄ?ＣＥＭ／Ｃ１?（ｃｈｅｍｏｒｅｓｉｓｔａｎｔ）?ｃｅｌｌｓ?ｗｅｒｅ?ｔｒｅａｔｅｄ?ｗｉｔｈ?５００?ｎＭ??ＭＢＺ，?５００?ｎＭ?ＦＬＵ，?ａｎｄ?５００?ｎＭ?ＡＢＺ?ｆｏｒ?２４?ｈ．??２．５．２?ＭＢＺ克服ＣＥＭ／Ｃ１細(xì)胞的耐藥性??作為一種抗寄生蟲(chóng)藥物，ＭＢＺ的主要作用機(jī)制是破壞微管的聚合，這一作用機(jī)制??與多種抗腫瘤藥物類似，但耐藥性問(wèn)題始終是化療藥物所面臨的主要問(wèn)題，為了研宄??ＭＢＺ是否能克服普遍化療藥物存在的耐藥性問(wèn)題，本文選用耐藥株ＣＥＭ／Ｃ１和??ＣＣＲＦ－ＣＥＭ進(jìn)行對(duì)比研究，用ＭＴＳ細(xì)胞毒性檢測(cè)方法檢測(cè)ＭＢＺ對(duì)這兩種細(xì)胞的活力??和增殖抑制作用。實(shí)驗(yàn)用１０?ｎＭ的ＶＣＲ，１００?ｎＭ的ＣＰＴ，２００?ｎＭ的ＭＢＺ以及５００?ｎＭ??的ＭＢＺ分別來(lái)處理ＣＥＭ／Ｃ１細(xì)胞和ＣＣＲＦ－ＣＥＭ細(xì)胞的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖２

＇?Ｖｍｓｃｒｉｓｔｉｎｅ?ｏｎｌｙ??ｒ?－ａ－?１０?ｎＭ?Ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ?Ｗｉｔｈ?１?Ｍｅｂｅｎｄａｚｏｌｅ??＂—４—?１?Ｍｅｂｅｍｌａｚｏｔｅ?ｊｋ?１２?－?＊??＾?１?ｎＭ?Ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ?＋?１?Ｍｅｂｅｎｄａｚｏｌｅ?ｙ?一??１?８＇?／?ｔ＊?ｔ?１〇－??丨：ｊ丨：義??０??１?１?１?１??０?－＊?１?１?１???Ｏｈ?２４?ｈ?４８?ｈ?７２?ｈ?２４?ｈ?４８ｈ?７２ｈ??圖２．３長(zhǎng)春新堿與ＭＢＺ聯(lián)用抑制Ｊｕｒｋａｔ細(xì)胞。??Ｆｉｇ．２．３?Ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ?ｃｏｍｂｉｎｅｄ?ｗｉｔｈ?ＭＢＺ?ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ?Ｊｕｒｋａｔ?ｃｅｌｌｓ．??２．５．４?ＭＢＺ誘導(dǎo)ＣＣＲＦ－ＣＥＭ和耐藥株ＣＥＭ／Ｃ１的凋亡??通過(guò)上述的ＭＴＳ細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)，我們己經(jīng)明確ＭＢＺ對(duì)兩種Ｔ－ＡＬＬ細(xì)胞具有明顯??的毒性作用，為了進(jìn)一步證實(shí)ＭＢＺ對(duì)Ｔ－ＡＬＬ細(xì)胞的的促凋亡作用，采用ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ??流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果如圖２．４所示，ＡｎｎｅｘｉｎＶ和ＰＩ雙陽(yáng)性代表的晚期凋亡細(xì)胞??隨著ＭＢＺ濃度的升高而增加，到０．５?ｊｉＭ濃度時(shí)細(xì)胞凋亡數(shù)就達(dá)到了?９０％以上，凋亡劑??量依賴現(xiàn)象明顯，在流式凋亡圖中可以非常直觀的觀察到細(xì)胞凋亡的分布。??圖２．４?（Ｂ）是對(duì)凋亡早期和凋亡晚期的細(xì)胞進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)所得到的統(tǒng)計(jì)圖，從流式??凋亡統(tǒng)計(jì)圖中可以看出耐藥株ＣＥＭ／Ｃ１細(xì)胞在０．１?ｐＭ濃度ＭＢＺ作用下凋亡率就己經(jīng)達(dá)??到５０％，比ＣＣＲＦ－ＣＥＭ細(xì)胞的促凋亡作用更明顯，因此ＭＢＺ能夠促進(jìn)細(xì)胞凋亡的實(shí)??驗(yàn)結(jié)果與ＭＢＺ引起細(xì)胞活力


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