拓撲異構酶I（Topol）抑制劑具有良好的抗癌活性,已有不少作為抗癌藥物應用于臨床治療。但該類藥物存在代謝快、副作用強等缺點,故尋找更高效低毒的藥物十分重要。四氫狹花馬錢堿（THA）是植物來源的生物堿,經(jīng)驗證有抗腫瘤活性。本論文第一部分模擬THA的生物合成途徑,利用異胡豆苷合成酶（STR1）獲得其前體物質(zhì),通過酶化學法合成一系列以THA結(jié)構為母核的化合物,并對其R、S構型進行初步活性評價,證實該類化合物是結(jié)構新穎的Topol抑制劑,且對HepG 2腫瘤細胞有殺傷作用。植物來源的Pictet-Spengler酶（P-S酶）是自然界中幾千種生物堿合成的門控酶,其催化產(chǎn)物是多種藥物的重要前體。目前為止共發(fā)現(xiàn)四種植物來源的P-S酶,其中 deacetylipecoside 合成酶（DIS）和 deacetylisoipecoside 合成酶（DIIS）的研究尚處于起步階段,至今未明確這兩個酶的DNA序列。論文第二部分對經(jīng)轉(zhuǎn)錄組分析所得的7個DIS/DIIS候選DNA序列進行表達。經(jīng)過Rosetta、GS115、M15三個表達系統(tǒng)的嘗試,最終成功獲得7個候選蛋白,并檢測其催化活性。遺憾的是,經(jīng)過... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：130 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞表
1 緒論
    1.1 拓撲異構酶Ⅰ抑制劑研究背景
        1.1.1 喜樹堿類Topo Ⅰ抑制劑
        1.1.2 非喜樹堿類Topo Ⅰ抑制劑
        1.1.3 小結(jié)與展望
    1.2 植物來源的Pictet-Spengler反應催化酶的研究
        1.2.1 Pictet-Spengler反應
        1.2.2 異胡豆苷合成酶
        1.2.3 去甲烏藥堿合成酶
        1.2.4 Deacetylipecoside合成酶和deacetylisoipecoside合成酶
        1.2.5 小結(jié)與展望
2 新四氫狹花馬錢堿Topo Ⅰ抑制劑的設計、合成與初步活性評價
    2.1 立項依據(jù)
    2.2 實驗材料
        2.2.1 化學試劑
        2.2.2 生物試劑
        2.2.3 實驗設備
    2.3 實驗方法
        2.3.1 THA類化合物的合成
        2.3.2 THA類化合物對Topo Ⅰ抑制作用的初步鑒定
        2.3.3 THA類化合物對HepG2腫瘤細胞抑制作用的初步鑒定
    2.4 實驗結(jié)果
        2.4.1 化合物鑒定數(shù)據(jù)與圖譜
        2.4.2 THA類化合物對Topo Ⅰ抑制作用的檢測結(jié)果
        2.4.3 THA類化合物對HepG2抑制作用的檢測結(jié)果
    2.5 討論與小結(jié)
3 DIS/DIIS候選蛋白的表達與活性檢測
    3.1 立項依據(jù)
    3.2 DIS/DIIS七個候選基因的克隆及Rosetta表達體系的構建
        3.2.1 實驗背景
        3.2.2 實驗材料
        3.2.3 實驗方法
        3.2.4 實驗結(jié)果
        3.2.5 結(jié)果討論與小結(jié)
    3.3 DIS/DIIS三個候選基因的GS115表達體系的構建
        3.3.1 實驗背景
        3.3.2 實驗材料
        3.3.3 實驗方法
        3.3.4 實驗結(jié)果
        3.3.5 結(jié)果討論與小結(jié)
    3.4 DIS/DIIS 一個候選基因的M15表達體系的構建
        3.4.1 實驗背景
        3.4.2 實驗材料
        3.4.3 實驗方法
        3.4.4 實驗結(jié)果
        3.4.5 結(jié)果討論與小結(jié)
    3.5 標準產(chǎn)物合成與酶活測定
        3.5.1 實驗背景
        3.5.2 實驗材料
        3.5.3 實驗方法
        3.5.4 實驗結(jié)果
        3.5.5 結(jié)果討論與小結(jié)
    3.6 討論與小結(jié)
參考文獻
附錄
作者簡歷



本文編號：2966279