衰老是一個(gè)由多種調(diào)節(jié)途徑和轉(zhuǎn)錄因子共同介導(dǎo)的生理過程,主要體現(xiàn)為機(jī)體功能衰退和慢性疾病風(fēng)險(xiǎn)的增加。雖然衰老是無法避免的過程,但可以在一定程度上調(diào)控其速度。通過研發(fā)抗衰老藥物來延緩衰老和延長壽命的策略一直備受關(guān)注。本課題從1386種上市藥物中篩選出L型鈣離子通道阻滯藥物維拉帕米可延長秀麗隱桿線蟲壽命,其在人胚肺成纖維細(xì)胞MRC-5上可延緩細(xì)胞衰老和提高細(xì)胞活力,并具有延長雄性果蠅壽命的趨勢。維拉帕米給藥處理能夠顯著改善線蟲的健康壽命,包括爬行速度、身體扭動(dòng)頻率、滲透壓應(yīng)激抵抗能力及衰老相關(guān)的外陰完整性缺陷這些衰老相關(guān)的生理指標(biāo)。進(jìn)一步機(jī)制研究發(fā)現(xiàn):維拉帕米作用于線蟲中的L型鈣離子通道的α1亞基,通過抑制鈣調(diào)磷酸酶而延長線蟲壽命。維拉帕米給藥后LGG-1/LC3蛋白表達(dá)水平和自噬相關(guān)基因的mRNA水平的升高反映了維拉帕米可促進(jìn)自噬,并且其介導(dǎo)的長壽需要自噬基因bec-1。另外,當(dāng)線蟲中的鈣調(diào)磷酸酶被敲低時(shí),維拉帕米不再進(jìn)一步提高線蟲的自噬水平,這提示維拉帕米的壽命延長作用是通過促進(jìn)鈣調(diào)磷酸酶下游的自噬過程介導(dǎo)的。綜上所述,本文探究了維拉帕米的抗衰老作用和在線蟲上的抗衰老機(jī)制,為將來維拉帕米... 

【文章來源】：華東理工大學(xué)上海市 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖３．１線蟲水平的抗衰老化合物篩選策略

第３２頁?華東理工大學(xué)碩士學(xué)位論文??（Ｐｈｅｎｙｔｏｉｎｓｏｄｉｕｍ）均可顯著延長線蟲的壽命（Ｐ值均小于０．０００１）（圖３．２ａ）。與對照??組相比，線蟲在給予了?２５?ｐＭ、１００?ｐＭ、４００?濃度的維拉帕米后平均壽命分別延長??了?２５．２３％、３６．１５％、４５．１６％；線蟲在給予了?２５?ｐＭ、１００?ｐＭ、４００?濃度的硝苯地平??后平均壽命分別延長了?２１．８４％、３８．９６％、２７．３０％；線蟲在給予了?２５?ｎＭ、１００?ｐＭ、４００??ＨＭ濃度的苯妥英鈉后平均壽命分別延長了?２４．０７％、２２．７５％、３４．０８％?（表３．１）。維拉??帕米給藥后的線蟲平均壽命延長的百分比更大，且具有濃度依賴性，因此我們選擇了維??拉帕米作為候選抗衰老化合物。為了進(jìn)一步確證維拉帕米對線蟲壽命的延長作用，我們??又加大樣本量重復(fù)了線蟲上維拉帕米給藥的壽命實(shí)驗(yàn)，與對照組相比，線蟲在給予了?２５??ＨＭ、１００?ｐＭ、４００?ｐＭ濃度的維拉帕米后平均壽命分別延長了?１４．５７％、１９．９８％、１８．７６％??（圖３．２ｂ，表３．１）。接著，在給藥濃度進(jìn)一步加大后，與對照組相比，線蟲在給予了?４００??ｐＭ、８００?ｐＭ、１２００?ｐＭ濃度的維拉帕米后平均壽命分別延長了?２２．８２％、２４．１５％、２４．５６％??（圖?３．２ｃ，表?３．１）。綜上所述，２５?ｐＭ、１００?ｐＭ、４００?ｐＭ、８００?ｐＭ、１２００?ｐＭ?濃度的維??拉帕米均顯著延長秀麗隱桿線蟲的壽命。??（ａ）??１〇〇１????‘仰?ｃｗ??ｉＪＪ?Ｎ２／Ｐｈｅｎｙｔｏｉｎ?ｓｏｄｉｕｍ?（２５ｐＭ）??■Ｊ５?８０－?Ｌ？Ｌ－ｊ?

ｇａｎｓ?ｔｒｅａｔｅｄ?ｗｉｔｈ?ｖｅｒａｐａｍｉｌ?ａｔ?４００?ｆｊＪＶｌ，?８００?ｐＭ，?１２００?｜ｉＭ，?ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．??Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｗａｓ?ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ?ｕｓｉｎｇ?ｌｏｇ－ｒａｎｋ?（Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘ）．??３．３．２維拉帕米不影響ＯＰ５０的生長??當(dāng)?shù)贸鼍S拉帕米可顯著延長線蟲壽命這一結(jié)果后，我們進(jìn)一步通過體外的細(xì)菌生長??實(shí)驗(yàn)來確定維拉帕米是否通過抑制線蟲食物ＯＰ５０的生長，造成飲食限制，從而延長線??蟲壽命。如圖３．３ａ所示，ＯＰ５０在對照組和給藥組（１００?＿、４００?ｐＭ維拉帕米）的ＮＧＭ??培養(yǎng)基上分別生長了?１２ｈ、２４ｈ、３６ｈ、４８ｈ、６０ｈ、７２ｈ，與對照組相比，維拉帕米兩個(gè)濃??度的給藥組的〇Ｐ５〇生長均無統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著差異，說明含１００?和４００?ｐＭ維拉帕米??的ＮＧＭ培養(yǎng)基不抑制線蟲食物ＯＰ５０的生長。因此，維拉帕米在線蟲上的長壽效應(yīng)不??是通過抑制線蟲食物的生長而實(shí)現(xiàn)的。??（ａ）??０８］?？?Ｃｔｒｌ??＾?■?Ｖｅｒ（１００ｐＭ）?ｚ??Ｓ?°６＇?ａ?Ｖｅｒ（４００ｐＭ）?Ｔ?Ｉ??Ｓ?，?ｉ?Ｊ??！〇．，?！??ｏ?■??０．０－１?１?，?，?，?，?，???１２?２４?３６?４８?６０?７２??Ｔｉｍｅ?（ｈ）??圖３．３維拉帕米對ＯＰ５０生長無影響。（ａ）?ＯＰ５０在對照組和給藥組（１００?｜ｘＭ、４００?＿維拉帕米）??的ＮＧＭ培養(yǎng)基上分別生長了?１２ｈ、２４ｈ、３６ｈ、４８ｈ、６０ｈ、７２ｈ的菌液ＯＤ值。Ｆ＞０．０５。使用非配對??ｔ檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。??Ｆｉｇ．?３．

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Life after the birth of the mitochondrial Na+/Ca2+ exchanger,NCLX[J]. NITA Lulia I.,HERSHFINKEL Michal,SEKLER Israel.  Science China（Life Sciences）. 2015(01)



本文編號(hào)：2963477