目的探討基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOF-MS）和實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）檢測(cè)脂質(zhì)及藥物代謝相關(guān)的基因位點(diǎn)的方法學(xué)比對(duì),以評(píng)估MALDI-TOF-MS是否可用于臨床SLCO1B1和ApoE多態(tài)性檢測(cè)。方法納入2018年7月至9月在北京協(xié)和醫(yī)院診斷為高脂血癥、高血壓或動(dòng)脈粥樣硬化的患者共計(jì)71例。收集EDTA抗凝全血并提取基因組DNA,分別采用MALDI-TOF-MS和RT-qPCR檢測(cè)SLCO1B1的rs2306283（388A>G）和rs4149056（521T>C）位點(diǎn)以及ApoE的rs429358（388T>C）和rs7412（526C>T）位點(diǎn),并利用Kappa系數(shù)比較結(jié)果的一致性。結(jié)果兩種方法對(duì)相關(guān)基因位點(diǎn)的檢測(cè)結(jié)果具有較高的一致性,僅1例患者rs4149056（521T>C）位點(diǎn)出現(xiàn)分型差異且在MALDI-TOF-MS復(fù)檢后得到與RT-qPCR一致的結(jié)果。結(jié)論 MALDI-TOF-MS可應(yīng)用于脂質(zhì)及藥物代謝相關(guān)基因SLCO1B1和ApoE多態(tài)性的檢測(cè),從而指導(dǎo)臨床他汀類用藥。 

【文章來源】：基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床. 2020年07期

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

RT-qPCR檢測(cè)SLCO1B1和ApoE多態(tài)性位點(diǎn)

圖1 RT-qPCR檢測(cè)SLCO1B1和ApoE多態(tài)性位點(diǎn)目前市場(chǎng)上檢測(cè)SNP的商品化試劑盒多是基于RT-qPCR或基因芯片法,這些方法基于化學(xué)(熒光)方法,依賴于核苷酸的互補(bǔ)性對(duì)核酸序列進(jìn)行分析,對(duì)序列的長(zhǎng)度、復(fù)雜性和反應(yīng)條件等具較高的要求,易受多種化學(xué)因素的影響,從而導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的偏差。MALDI-TOF-MS依賴于分子量這一物理參數(shù),是根據(jù)核苷酸組成分子被電離后在真空管中的飛行時(shí)間來確定其分子量大小,最終確定核苷酸序列。此外,RT-qPCR技術(shù)只適用于對(duì)有限的基因位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè),MALDI-TOF-MS可在同一反應(yīng)體系中對(duì)多個(gè)SNP位點(diǎn)進(jìn)行多重檢測(cè)和分析,可大幅提高檢測(cè)通量和效率,是對(duì)現(xiàn)有RT-qPCR的重要補(bǔ)充。本研究發(fā)現(xiàn),雖然MALDI-TOF-MS與RT-qPCR兩種方法在檢測(cè)結(jié)果上具高度一致性,但有1例樣本出現(xiàn)差異,MS復(fù)檢時(shí)得到與RT-qPCR一致的結(jié)果,說明重復(fù)檢測(cè)可提高M(jìn)ALDI-TOF-MS的準(zhǔn)確性,建議在實(shí)際應(yīng)用中針對(duì)每個(gè)樣本設(shè)立3個(gè)重復(fù)檢測(cè)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]SLCO1B1&APOE基因多態(tài)性檢測(cè)性能驗(yàn)證[J]. 呂園,邱樊,薛雪,俞楊,杜同信,王自正,王峰.  臨床檢驗(yàn)雜志. 2017(11)



本文編號(hào)：2953430