目的探討基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜（MALDI-TOF-MS）和實時熒光定量PCR（RT-qPCR）檢測脂質(zhì)及藥物代謝相關(guān)的基因位點的方法學(xué)比對,以評估MALDI-TOF-MS是否可用于臨床SLCO1B1和ApoE多態(tài)性檢測。方法納入2018年7月至9月在北京協(xié)和醫(yī)院診斷為高脂血癥、高血壓或動脈粥樣硬化的患者共計71例。收集EDTA抗凝全血并提取基因組DNA,分別采用MALDI-TOF-MS和RT-qPCR檢測SLCO1B1的rs2306283（388A>G）和rs4149056（521T>C）位點以及ApoE的rs429358（388T>C）和rs7412（526C>T）位點,并利用Kappa系數(shù)比較結(jié)果的一致性。結(jié)果兩種方法對相關(guān)基因位點的檢測結(jié)果具有較高的一致性,僅1例患者rs4149056（521T>C）位點出現(xiàn)分型差異且在MALDI-TOF-MS復(fù)檢后得到與RT-qPCR一致的結(jié)果。結(jié)論 MALDI-TOF-MS可應(yīng)用于脂質(zhì)及藥物代謝相關(guān)基因SLCO1B1和ApoE多態(tài)性的檢測,從而指導(dǎo)臨床他汀類用藥。 

【文章來源】：基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床. 2020年07期

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

RT-qPCR檢測SLCO1B1和ApoE多態(tài)性位點

圖1 RT-qPCR檢測SLCO1B1和ApoE多態(tài)性位點目前市場上檢測SNP的商品化試劑盒多是基于RT-qPCR或基因芯片法,這些方法基于化學(xué)(熒光)方法,依賴于核苷酸的互補性對核酸序列進(jìn)行分析,對序列的長度、復(fù)雜性和反應(yīng)條件等具較高的要求,易受多種化學(xué)因素的影響,從而導(dǎo)致檢測結(jié)果的偏差。MALDI-TOF-MS依賴于分子量這一物理參數(shù),是根據(jù)核苷酸組成分子被電離后在真空管中的飛行時間來確定其分子量大小,最終確定核苷酸序列。此外,RT-qPCR技術(shù)只適用于對有限的基因位點進(jìn)行檢測,MALDI-TOF-MS可在同一反應(yīng)體系中對多個SNP位點進(jìn)行多重檢測和分析,可大幅提高檢測通量和效率,是對現(xiàn)有RT-qPCR的重要補充。本研究發(fā)現(xiàn),雖然MALDI-TOF-MS與RT-qPCR兩種方法在檢測結(jié)果上具高度一致性,但有1例樣本出現(xiàn)差異,MS復(fù)檢時得到與RT-qPCR一致的結(jié)果,說明重復(fù)檢測可提高M(jìn)ALDI-TOF-MS的準(zhǔn)確性,建議在實際應(yīng)用中針對每個樣本設(shè)立3個重復(fù)檢測。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]SLCO1B1&APOE基因多態(tài)性檢測性能驗證[J]. 呂園,邱樊,薛雪,俞楊,杜同信,王自正,王峰.  臨床檢驗雜志. 2017(11)



本文編號：2953430