類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（Rheumatoid arthritis,RA）是一種發(fā)病機(jī)制未明的,以滑膜炎癥和關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)破壞為特征的異質(zhì)性、系統(tǒng)性、自身免疫性疾病。研究表明成纖維樣滑膜細(xì)胞（FLS）在RA的發(fā)生發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用,FLS異常增殖和侵襲,并形成血管翳,最終導(dǎo)致了關(guān)節(jié)和軟骨的破壞。IL-1β被認(rèn)為是重要的致FLS活化的炎癥因子。NLRP3為模式識(shí)別受體NOD樣受體（NLR）家族中一員,其構(gòu)成的NLRP3炎癥小體能夠活化Caspase-1,促進(jìn)IL-1β的成熟和釋放。硫氧還蛋白相互作用蛋白（TXNIP）作為一種氧化還原調(diào)節(jié)器,在ROS激活NLRP3炎癥小體的途徑中扮演重要角色,但具體調(diào)控機(jī)制未明。近年來(lái)的研究顯示microRNAs參與基因轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控,廣泛參與到細(xì)胞增殖、分化、凋亡等一系列重要的生物學(xué)進(jìn)程,并且在炎癥的發(fā)生發(fā)展中起到調(diào)控作用。miR-20a屬于MicroRNA17⁹2家族,其在RA中異常表達(dá),且在巨噬細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。mi R-20a是否對(duì)NLRP3介導(dǎo)的IL-1β釋放具有調(diào)控作用,目前尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本研究觀察NLRP3、TX... 

【文章來(lái)源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】：89 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略詞
中文摘要
Abstract
1 前言
2 實(shí)驗(yàn)材料
    2.1 動(dòng)物
    2.2 試劑
    2.3 主要儀器
    2.4 溶液和試劑的配制
3. 實(shí)驗(yàn)方法
    3.1 佐劑性關(guān)節(jié)炎（AA）大鼠模型的建立
    3.2 佐劑性關(guān)節(jié)炎模型的確立
        3.2.1 繼發(fā)性足腫脹的測(cè)定
        3.2.2 多發(fā)性關(guān)節(jié)炎指數(shù)（polyarthritis index, PI）評(píng)分
        3.2.3 脾及胸腺指數(shù)
        3.2.4 病理組織學(xué)檢測(cè)
        3.2.5 血清樣本采集
    3.3 大鼠滑膜細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
        3.3.1 大鼠滑膜組織的采集
        3.3.2 大鼠滑膜細(xì)胞的分離
        3.3.3 大鼠滑膜細(xì)胞的培養(yǎng)
    3.4 MTT比色法測(cè)細(xì)胞增殖
    3.5 脂質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染NLRP3-siRNA、TXNIP-siRNA、mi R-20amimics進(jìn)入FLS
    3.6 qRT-PCR
        3.6.1 細(xì)胞總RNA的提取
        3.6.2 第一鏈cDNA的合成
        3.6.3 qRT- PCR檢測(cè)
    3.7 Western Blot
        3.7.1 細(xì)胞總蛋白制備和定量
        3.7.2 蛋白質(zhì)電泳
        3.7.3 電轉(zhuǎn)移
        3.7.4 抗原抗體反應(yīng)及顯色
        3.7.5 結(jié)果分析
    3.8 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè) IL-1β，MMP-1 和 TIMP-1
    3.9 生物信息技術(shù)預(yù)測(cè)miR-20a靶蛋白
    3.10 熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
    3.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4.1 大鼠AA模型的確立
    4.2 NLRP3炎癥小體在AA大鼠滑膜細(xì)胞中對(duì)炎癥因子釋放的影響及其作用機(jī)制
        4.2.1 AA大鼠血清中炎癥因子IL-1β 的表達(dá)
        4.2.2 AA大鼠FLS培養(yǎng)上清液中IL-1β、MMP-1、TIMP-1的表達(dá)
        4.2.3 IL-1β 對(duì)大鼠FLS增殖的影響
        4.2.4 AA大鼠滑膜組織蛋白中NLRP3的表達(dá)
        4.2.5 AA大鼠FLS的提取及NLRP3/ASC/casp-1 mRNA的表達(dá)
        4.2.6 采用小干擾RNA技術(shù)沉默NLRP3，對(duì)NLRP3炎癥小體及炎癥因子IL-1β、MMP-1、TIMP-1 釋放的影響。
    4.3 TXNIP對(duì)NLRP3的表達(dá)及炎癥因子釋放的影響
        4.3.1 AA大鼠滑膜組織蛋白中TXNIP的表達(dá)
        4.3.2 AA大鼠FLS中TXNIP mRNA的表達(dá)
        4.3.3 采用小干擾RNA技術(shù)沉默TXNIP，對(duì)NLRP3炎癥小體及炎癥因IL-1β、MMP-1、TIMP-1 釋放的影響
    4.4 AA大鼠FLS中mi R-20a對(duì)TXNIP表達(dá)的調(diào)控及對(duì)NLRP3炎癥小體的表達(dá)和炎癥因子IL-1β、MMP-1、TIMP-1 釋放的影響
        4.4.1 AA大鼠FLS中mi R-20a的表達(dá)
        4.4.2 mi R-20a靶向調(diào)控TXNIP的表達(dá)
        4.4.3 過(guò)表達(dá)miR-20a對(duì)TXNIP、NLRP3/ASC/caspase-1 及炎癥因子IL-1β、MMP-1、TIMP-1 釋放的影響
5.討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：2950894