與傳統(tǒng)化學(xué)藥物相比,蛋白質(zhì)和多肽藥物具有更高的安全性和靶點特異性,但其開發(fā)應(yīng)用仍然存在眾多挑戰(zhàn),其中最重要原因之一就是蛋白質(zhì)和多肽藥物的體內(nèi)半衰期普遍偏短。為了克服上述問題,研究人員逐漸發(fā)展出多種蛋白長效化技術(shù),通過改變藥物分子的結(jié)構(gòu)來影響其體內(nèi)代謝速率及方式,進(jìn)而延長蛋白質(zhì)和多肽類藥物的半衰期。相比糖基化修飾,融合蛋白修飾或PEG修飾,脂肪酸修飾不僅能實現(xiàn)半衰期的延長,還有助于提高藥物的脂溶性、腸道黏膜透過及吸收效率,故而越來越受到研究人員的關(guān)注。傳統(tǒng)的蛋白藥物脂肪酸修飾主要通過體外化學(xué)偶聯(lián)的方式來實現(xiàn),存在反應(yīng)條件限制多、修飾效率偏低、分離步驟復(fù)雜、修飾均一度差等多種局限。合成編碼技術(shù)利用正交氨酰tRNA合成酶可以在表達(dá)宿主體內(nèi)將修飾后的氨基酸（非天然氨基酸）點特異的引入到蛋白的特定位點,生產(chǎn)修飾蛋白,從而從原理上避開蛋白體外修飾的各種限制。本論文中,我們設(shè)計了一種帶7個碳原子脂肪酸鏈的非天然氨基酸-HepoK,通過高通量篩選獲得了一個對HepoK特異的正交氨酰tRNA合成酶;然后利用合成編碼非天然氨基酸技術(shù),在E.coli體內(nèi)分別將HepoK引入到到肌紅蛋白（Myoglobin）... 

【文章來源】：浙江理工大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：118 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

傳感器放置位置

圖 2.3 傳感器放置位置Figure 2.3 Sensor placement location；31.5/15.75/7.88/3.94 μM 五個濃度點，按下表 2-40 上肽（PCS）、LIT-HepoK（LIT1）、LIT-WT（LIT2）和表 2-40 上樣Table 2-40 Sample loading列 4 列 5 列 6 列 7 列 8 列） PBST PBST PBST PBST PBST PB PBST 3.94 μM 7.88 μM 15.75 μM 31.5 μM 63 ） PBST 3.94 μM 7.88 μM 15.75 μM 31.5 μM 63 ） PBST 3.94 μM 7.88 μM 15.75 μM 31.5 μM 63 定檢測程序，并執(zhí)行；

圖 3.1 不同濃度 NaOH 對 DH10B 菌的生長抑制作用igure 3.1 Inhibitory effects of different concentrations of NaOH on growth of DH10B bacteria DH10B（pREP）電轉(zhuǎn)感受態(tài)的轉(zhuǎn)化效率取 0.1 ng pUC19 電轉(zhuǎn)到制備好的 100 ul DH10B（pREP）電轉(zhuǎn)感受態(tài)中，加入 900熱的 SOC 培養(yǎng)基（此時已稀釋 10 倍），振蕩培養(yǎng) 1.5 h 后，培養(yǎng)物稀釋后涂板，置于 37 養(yǎng)箱培養(yǎng)過夜。結(jié)果在培養(yǎng)物稀釋 10000 的平板上長出了 582 個單克隆。根據(jù)轉(zhuǎn)化效計算公式：Efficiency=(cfu on plate/ng DNA)(1*103ng/ug)*Dilution factor，可得出，這H10B 電轉(zhuǎn)感受態(tài)的轉(zhuǎn)化效率為 5.82*1010。而本次實驗的 RS 篩選實驗中，所用的 TK庫的庫容為 2*106，需要 DH10B（pREP）的轉(zhuǎn)化效率至少是 10 倍的庫容大小。因此批制備的 DH10B 電轉(zhuǎn)感受態(tài)是完全能滿足之后的 RS 篩選實驗的。


本文編號：2935845