腫瘤是當(dāng)前人類面臨的一大醫(yī)學(xué)疾病。近幾十年來表觀遺傳學(xué)圍繞基因異常表達引起的腫瘤發(fā)生,獲得了許多重要的突破,其中組蛋白翻譯后修飾(PTM)是當(dāng)前世界范圍內(nèi)研究的熱點。組蛋白賴氨酸殘基的第五位氨基(N~ε)常常發(fā)生不同類型的PTM包括乙�；⒘姿峄�、泛素化和甲基化等。其中,組蛋白賴氨酸的異常甲基化與腫瘤細胞的轉(zhuǎn)化、異常增殖有著密切的聯(lián)系。組蛋白賴氨酸甲基化的修飾受到兩類具有相反功能的酶調(diào)節(jié):組蛋白賴氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶(KMTs)和組蛋白賴氨酸去甲基化酶(KDMs)。近年來,KDMs在不同腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中扮演著越來越重要的作用,如促進原癌基因的表達激活,免疫系統(tǒng)失調(diào),DNA損傷修復(fù)等。因此找出有效的抑制劑是治療KDMs表達異常的癌癥的關(guān)鍵所在。迄今為止,幾種不同的高通量篩選(HTS)方法已經(jīng)被開發(fā)用于尋找KDMs的抑制劑。但是假陰性、假陽性和無法實時監(jiān)測酶活性是這幾種方法的主要弊端,所以迫切需要一種更加優(yōu)化的檢測KDMs活性的方法。鑒于上述現(xiàn)有技術(shù)的不足,本研究針對KDMs,利用核磁共振技術(shù)開創(chuàng)了一套新穎而特異性的檢測酶活性和篩選抑制劑的方法。首先在較復(fù)雜的環(huán)境如細胞裂解液,可以高選擇性、... 

【文章來源】：深圳大學(xué)廣東省

【文章頁數(shù)】：49 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

由含有JmjC結(jié)構(gòu)域的KDMs介導(dǎo)的組蛋白賴氨酸去甲基化反應(yīng)機制

特異性測定賴氨酸去甲基化酶活性的方法及其在抑制劑篩選中的應(yīng)用21圖3.核磁共振波譜檢測緩沖液體系KDM4A介導(dǎo)的代謝反應(yīng)。（A）組蛋白去甲基化酶KDM4A不存在時緩沖液中的底物α-KG，（B）和產(chǎn)物SUC的HCACONMR核磁共振譜；（C、D），添加純化的KDM4A時緩沖液中的底物α-KG（C）和產(chǎn)物SUC（D）的HCACONMR核磁共振譜。每個實驗緩沖液中都含有酸提取的組蛋白，13C標(biāo)記的α-KG（0.1mg），Ascorbicacid（1mM）和(NH4)2Fe(SO4)2（50μM）。

特異性測定賴氨酸去甲基化酶活性的方法及其在抑制劑篩選中的應(yīng)用23圖4.核磁共振波譜檢測細胞裂解液中KDM4A介導(dǎo)的代謝反應(yīng)。（A）在細胞裂解液中，產(chǎn)物SUC的常規(guī)1HNMR檢測，顯示出SUC的1H信號與來自內(nèi)源分子的背景信號重疊。（B）產(chǎn)物SUC的HCACONMR核磁共振譜，其中被13C標(biāo)記的1H-13CA-13CO已用紅色標(biāo)記出來。每個實驗緩沖液中都含有13C標(biāo)記的α-KG（0.1mg），Ascorbicacid（1mM）和(NH4)2Fe(SO4)2（50μM）。


本文編號：2927786