肺癌是第一大癌種,每四個(gè)癌癥患者中就約有一個(gè)肺癌患者。肺癌晚期容易發(fā)生骨轉(zhuǎn)移,臨床一般采用雙膦酸鹽類藥物治療。雖然雙膦酸鹽類藥物減少了骨骼相關(guān)事件(骨折、脊髓受壓等),但是并不延長(zhǎng)生存期。臨床急需有效治療肺癌骨轉(zhuǎn)移的新藥。經(jīng)文獻(xiàn)調(diào)研,多西紫杉醇和的藤黃酸聯(lián)用研究抗肺癌骨轉(zhuǎn)移的活性,研究結(jié)果如下:1.體外MTT法測(cè)定多西紫杉醇和的藤黃酸聯(lián)用對(duì)小鼠Lewis肺癌細(xì)胞LLC的抗腫瘤活性:經(jīng)48h處理,多西紫杉醇(DTX)組、藤黃酸(GA)組和多西紫杉醇和藤黃酸聯(lián)用組的 IC50值分別為 0.049 μM,0.073 和 0.035 μM(n=3,p0.01)。經(jīng) 72h 處理,DTX組、藤黃酸組、DTX和GA聯(lián)用組的IC50值分別為0.029 μM,0.051 μ和0.013 μM(n=3,p0.01)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明DTX和GA聯(lián)用組抗腫瘤活性優(yōu)于DTX組或GA組,且隨著時(shí)間的延長(zhǎng),藥物的藥效增強(qiáng)。2.以C57BL/6小鼠Lewis肺癌骨轉(zhuǎn)移為模型,肺癌骨轉(zhuǎn)移模型分為4組,分別為空白組、DTX組、GA組和DTX和GA聯(lián)用組,腹腔注射給藥,DTX劑量為10 mg/kg,GA劑量為4 mg/kg,連續(xù)給藥10天,空白組小鼠整體生存期為19.27±1.32 d,DTX組整體生存期為25.75±0.67 d,GA組整體生存期為23.99±0.58 d,DTX和GA聯(lián)用組為32.61±1.06d(n=10,p0.01),與DTX組或GA組比較,DTX和GA聯(lián)用組小鼠生存時(shí)間明顯延長(zhǎng)。3.空白對(duì)照組小鼠平均體重為19.17±0.67g,DTX組小鼠平均體重為17.26±0.58g,GA組小鼠平均體重為16.88±0.65 g,DTX和GA聯(lián)用組平均體重為18.33±0.62g(n=10,p0.01),DTX組和GA組體重均小于聯(lián)合用藥組,結(jié)果表明DTX和GA聯(lián)用組毒性最小。4.根據(jù)小鼠瘤體積計(jì)算腫瘤抑制率,DTX組為60.35±2.79%,GA組為62.17±2.53%,DTX和GA聯(lián)用組為69.54±3.11%,DTX和GA聯(lián)用組腫瘤抑制率高于DTX組和GA組,結(jié)果表明DTX和GA聯(lián)合用藥對(duì)腫瘤的抑制作用強(qiáng)于DTX組或GA組。5.肺癌骨轉(zhuǎn)移模型建立之后,觀察各組小鼠脛骨經(jīng)X線照射后骨破壞程度。小鼠腿骨腫瘤部位透射不均一,骨皮肥厚并斷裂,骨皮呈現(xiàn)向腫瘤組織伸展的趨勢(shì)�？瞻捉M骨破壞最嚴(yán)重,DTX組和GA組稍嚴(yán)重,與DTX組或GA組對(duì)比,DTX和GA聯(lián)用組骨破壞較輕,結(jié)果表明聯(lián)合用藥發(fā)揮了更大的骨轉(zhuǎn)移抗腫瘤作用。6.通過觀察骨組織病理切片,空白組、DTX組和GA組骨瘤部位骨皮外膜消失,形成疏松狀的骨瘤組織,骨小梁中細(xì)胞質(zhì)萎縮,腫瘤細(xì)胞呈肥厚、不規(guī)則狀態(tài)遍布于骨髓腔內(nèi),排布不規(guī)則�？瞻捉M骨破壞最為嚴(yán)重,DTX組和GA組稍嚴(yán)重,與DTX組和GA組對(duì)比,DTX和GA聯(lián)用組可觀察到清晰的骨皮和細(xì)胞質(zhì),骨破壞較輕。結(jié)果表明,聯(lián)合用藥組是更有效的抑制肺癌骨轉(zhuǎn)移的抑制劑。在體內(nèi)外活性實(shí)驗(yàn)初步確定了 DTX和GA聯(lián)用具有抗肺癌骨轉(zhuǎn)移的活性后,進(jìn)一步通過Lewis肺癌細(xì)胞遷移和誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7形成破骨細(xì)胞實(shí)驗(yàn),研究DTX和GA聯(lián)用抗肺癌骨轉(zhuǎn)移的機(jī)制,研究結(jié)果如下:1.小鼠Lewis肺癌細(xì)胞LLC的遷移情況如下:與空白對(duì)照組比較,DTX組細(xì)胞遷移抑制率為52.83±3.44%,GA組細(xì)胞遷移抑制率為46.22±4.17%,DTX和GA聯(lián)合用藥組細(xì)胞遷移抑制率為64.77士3.75%(n=3,p0.01)。結(jié)果表明DTX和GA聯(lián)用可抑制小鼠Lewis肺癌細(xì)胞LLC的遷移,且抑制作用強(qiáng)于DTX組或GA組。2.小鼠Lewis肺癌細(xì)胞LLC和小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7,經(jīng)TRAP染色后,與空白對(duì)照組相比,DTX組破骨細(xì)胞形成率為73.43%±2.97%,GA組破骨細(xì)胞形成率為86.12%±2.34%,DTX和GA聯(lián)用組破骨細(xì)胞形成率為63.12±2.75%,結(jié)果表明,DTX和GA聯(lián)用組破骨細(xì)胞形成率最低,可抑制小鼠Lewis肺癌細(xì)胞LLC誘導(dǎo)小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7形成破骨細(xì)胞。由于DTX和GA水溶性差,靜脈給藥需添加有毒的助溶劑,本文通過高壓均質(zhì)乳化法制備了水溶性白蛋白包裹的DTX和GA納米粒(DTX-GA-BSA-NPs),并以C57BL/6小鼠Lewis肺癌骨轉(zhuǎn)移為模型,研究抗肺癌骨轉(zhuǎn)移的活性,研究結(jié)果如下:1.制備DTX-GA-BSA-NPs,根據(jù)DTX標(biāo)準(zhǔn)曲線和GA標(biāo)準(zhǔn)曲線,測(cè)得DTX-GA-BSA-NPs 包封率為 86.3±2.4%,載藥量為 8.7±1.2%,粒徑為 102.0±18.64nm。2.DTX-GA-BSA-NPs作用于小鼠肺癌骨轉(zhuǎn)移模型小鼠平均生存期為平均生存期為31.58±1.87d,DTX和GA聯(lián)用組平均生存期為32.61±1.06d,DTX和GA聯(lián)用組平均體重為 18.33±0.62 g,DTX-GA-BSA-NPs 組平均體重為 18.86±0.88 g,DTX 和 GA 聯(lián)用組體重均小于DTX-GA-BSA-NPs組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(n=10,p0.01)。試驗(yàn)結(jié)果表明DTX-GA-BSA-NPs對(duì)小鼠的毒副作用較聯(lián)合用藥組小,DTX-GA-BSA-NPs對(duì)肺癌骨轉(zhuǎn)移模型生存期延長(zhǎng)是有顯著效果的。總結(jié):金氏公式計(jì)算結(jié)果為q=1.17,(q≥1.15時(shí)表示兩種藥物有協(xié)同作用),結(jié)果表明,DTX和GA聯(lián)用對(duì)治療肺癌骨轉(zhuǎn)移有協(xié)同作用,且抗癌活性高于DTX和GA單一用藥。
【學(xué)位單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R96
【部分圖文】：

Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｈｅ?ｓｕｒｖｉｖａｌ?ｋｉｎｅｔｉｃｓ?ｏｆ?ｅａｃｈ?ｇｒｏｕｐ??２．５．１．２體重和腫瘤體積觀察??觀察小鼠健康情況，造模后小鼠體重變化曲線如圖２－２所示，小鼠體重從第８ｄ幵始??下降，空白組小鼠的體重減輕較慢，ＧＡ組小鼠體重減輕最快，ＤＴＸ與ＧＡ聯(lián)用組小鼠??體重減輕最慢�？瞻讓�(duì)照組小鼠平均體重為１９．１７ｇ±０．６７?ｇ，ＤＴＸ組小鼠平均體重為??１７．２６ｇ±０．５８?ｇ，ＧＡ組小鼠平均體重為１６．８８ｇ土０．６５?ｇ，?ＤＴＸ和ＧＡ聯(lián)用組平均體重為??１８．３３ｇ±０．６２ｇ，?ＤＴＸ組和ＧＡ組體重均小于聯(lián)合用藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＝〇．〇１９，??ｐ＝０．０１４，?＊ｐ＜０．０５），ＤＴＸ、ＧＡ對(duì)小鼠的毒副作用均高于聯(lián)合用藥組，本試驗(yàn)結(jié)果說??明ＤＴＸ與ＧＡ聯(lián)用對(duì)小鼠的毒副作用最小。??，?空白對(duì)照組??多西紫杉醇沮??２１?＿?Ｔ＿?ｉ?１?藤黃酸組??Ｉ?多西紫杉醉藤黃酸聯(lián)用組??Ｓ：??１６－?１??＂ｋ???１?＇?Ｉ?＇?Ｉ?１?Ｉ?１??〇?１０?２０?３０??Ｔｉｍｅ?（ｄａｙ）??圖２－２造校后小鼠體１變化曲線??Ｆｉｇ．?２－２?Ｔｈｅ?ｗｅｉｇｈｔ?ｃｈａｎｇｅ?ｃｕｒｖｅ?ａｆｔｅｒ?ｍｏｄｅｌｉｎｇ??－１２－??

１０?１２?１４?１６?１８?２０?２２?２４?２６?２８?３０?３２?３４??時(shí)間（ｄ）??圖２－１各姐小鼠生存期??Ｆｉｇ．?２－１?Ｔｈｅ?ｓｕｒｖｉｖａｌ?ｋｉｎｅｔｉｃｓ?ｏｆ?ｅａｃｈ?ｇｒｏｕｐ??２．５．１．２體重和腫瘤體積觀察??觀察小鼠健康情況，造模后小鼠體重變化曲線如圖２－２所示，小鼠體重從第８ｄ幵始??下降，空白組小鼠的體重減輕較慢，ＧＡ組小鼠體重減輕最快，ＤＴＸ與ＧＡ聯(lián)用組小鼠??體重減輕最慢�？瞻讓�(duì)照組小鼠平均體重為１９．１７ｇ±０．６７?ｇ，ＤＴＸ組小鼠平均體重為??１７．２６ｇ±０．５８?ｇ，ＧＡ組小鼠平均體重為１６．８８ｇ土０．６５?ｇ，?ＤＴＸ和ＧＡ聯(lián)用組平均體重為??１８．３３ｇ±０．６２ｇ，?ＤＴＸ組和ＧＡ組體重均小于聯(lián)合用藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ＝〇．〇１９，??ｐ＝０．０１４，?＊ｐ＜０．０５），ＤＴＸ、ＧＡ對(duì)小鼠的毒副作用均高于聯(lián)合用藥組，本試驗(yàn)結(jié)果說??明ＤＴＸ與ＧＡ聯(lián)用對(duì)小鼠的毒副作用最小。??，?空白對(duì)照組??多西紫杉醇沮??２１?＿?Ｔ＿?ｉ?１?藤黃酸組??Ｉ?多西紫杉醉藤黃酸聯(lián)用組??Ｓ：??１６－?１??＂ｋ???１?＇?Ｉ?＇?Ｉ?１?Ｉ?１??〇?１０?２０?３０??Ｔｉｍｅ?（ｄａｙ）??圖２－２造校后小鼠體１變化曲線??Ｆｉｇ．?２－２?Ｔｈｅ?ｗｅｉｇｈｔ?ｃｈａｎｇｅ?ｃｕｒｖｅ?ａｆｔ

?肺癌骨轉(zhuǎn)移模型建立８?ｄ－１０ｄ后，各組小鼠可觀察到腫瘤的形成，接種處可觸摸到??腫塊，腫塊隨時(shí)間增加逐漸增大，腫瘤生長(zhǎng)曲線如圖２－３所示。ＤＴＸ組和ＤＴＸ和ＧＡ聯(lián)??用組腫瘤生長(zhǎng)較緩慢，四組小鼠腫瘤體積差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Ｐ均小于〇．〇５）。ＤＴＸ??和ＧＡ聯(lián)用組小鼠腫瘤體積明顯小于ＤＴＸ組和ＧＡ組，ＤＴＸ組腫瘤抑制率為６０．３５土??２．７９％，ＧＡ?組為?６２．１７±２．５３％，ＤＴＸ?和?ＧＡ?聯(lián)用組為?６９．５４±３＿１１％，并且?ＤＴＸ?和?ＧＡ??聯(lián)用組小鼠腫瘤體積較ＤＴＸ組更小，兩組間差異顯著（ｐ＝〇＿〇〇７，?＊ｐ＜０．０１）。結(jié)果表明??ＤＴＸ和ＧＡ聯(lián)用組腫瘤抑制作用高于ＤＴＸ組和ＧＡ組。??一＊一空白對(duì)照組??８－，?一＿一多西紫杉醇組??藤黃酸組??■?｜?多西紫ｇ醇藤黃酸聯(lián)用組???１?｜?１?Ｉ?１?Ｉ??０?１０?２０?３０??時(shí)間（ｄ）??圖２－３造模后小鼠腫瘤生長(zhǎng)曲線??Ｆｉｇ．?２－３Ｔｈｅ?ｔｕｍｏｒ?ｇｒｏｗｔｈ?ｃｕｒｖｅ?ａｆｔｅｒ?ｍｏｄｅｌｉｎｇ??２．５．２生存期測(cè)定結(jié)果??通過觀察Ｃ５７ＢＬ／６小鼠的死亡時(shí)間，采用ｓｐｓｓ?１７．０軟件中Ｋａｐｌａｎ－Ｍｅｉｅｒ法進(jìn)行生存??期分析，小鼠平均生存期如表２－３所示，小鼠生存曲線如圖２－４所示。ＤＴＸ和ＧＡ聯(lián)用??組平均生存期較空白組、ＤＴＸ組和ＧＡ組均有延長(zhǎng)
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2869489