【摘要】：目的:本文通過建立大鼠腦中動脈阻塞模型,觀察和檢測一系列生理病理指標(biāo),探討MQA對缺血性腦損傷大鼠神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制。同時初步探究MQA對腦缺血損傷大鼠RNA表達(dá)的影響。方法:實(shí)驗(yàn)一:建立腦缺血模型,分別進(jìn)行TTC染色觀察大鼠腦梗死面積;HE染色觀察大鼠大腦皮質(zhì)層病理結(jié)構(gòu)改變,試劑盒法分別檢測腦組織勻漿中MDA、LD、GSH-Px和NOS的含量(或活性);免疫組化法檢測大鼠腦組織Caspase-3和Iba1的蛋白表達(dá);TUNEL法觀察腦細(xì)胞凋亡狀態(tài);Western blot法檢測凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2和凋亡啟動因子PARP、Caspase-3,炎癥相關(guān)蛋白NFkB1和p38-MAPK信號通路中p38、AKT和ERK蛋白的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)二:建立大鼠局灶性腦缺血的病理模型,術(shù)后24h斷頭取腦提取總RNA,建立RNA-seq基因文庫,進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序檢測各組腦組織基因表達(dá),分析基因表達(dá)豐度、差異基因表達(dá)、GO富集和KEGG通路富集。結(jié)果:實(shí)驗(yàn)一:1.通過TTC染色觀察模型組腦組織出現(xiàn)顯著的大面積腦梗死,MQA和華佗再造丸都能顯著地改善腦缺血引起的腦梗死;2.HE染色發(fā)現(xiàn)MQA能減輕病理結(jié)構(gòu)的改變;3.免疫組化染色法檢測蛋白Caspase-3和Iba1的表達(dá)都明顯降低;4.TUNEL法檢測MQA能顯著性減少凋亡細(xì)胞數(shù);5.試劑盒法檢測MQA能降低腦組織中MDA含量、抑制NOS活性,同時能促進(jìn)GSH-Px活性,對LD的含量變化沒有影響;6.MQA能顯著性降低Bax/Bcl-2的蛋白比值,PARP和Caspase-3蛋白的表達(dá)也顯著性降低;炎癥蛋白NFkB1和p38-MAPK信號通路蛋白p38、AKT和ERK的表達(dá)都顯著性增加,而MQA能明顯抑制NFkB1、p38、AKT、ERK蛋白的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)二:1.以FPKM為單位,結(jié)果顯示共有22188個表達(dá)基因,分組后發(fā)現(xiàn)基因表達(dá)主要分布于1-50的FPKM值之間;2.進(jìn)行基因差異分析后,發(fā)現(xiàn)在P㩳0.05的顯著性下,給藥組與模型組相比共有762個差異基因,在P㩳0.001極顯著性差異性下有53個極顯著性差異基因,其中包括18個上調(diào)基因和35個下調(diào)基因;3.進(jìn)行GO富集分析后差異表達(dá)基因可分為:生物學(xué)過程、細(xì)胞組成成分和分子功能三類;4.KEGG通路分析主要涉及腎癌細(xì)胞通路、核糖體通路、甲狀腺激素信號通路和2-氧代羧酸代謝通路這4條通路。結(jié)論:實(shí)驗(yàn)一:1.MQA保護(hù)缺血性腦損傷作用與抗氧化應(yīng)激有關(guān);2.MQA通過抑制細(xì)胞凋亡對缺血性腦損傷發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用,原因?yàn)镸QA影響B(tài)cl-2家族蛋白和凋亡啟動蛋白半胱天冬酶(Caspase)的表達(dá)相關(guān);3.MQA能抑制缺血性腦損傷引起的炎癥反應(yīng),抑制炎癥反應(yīng)蛋白NFkB1、P38、AKT、ERK的表達(dá)。實(shí)驗(yàn)二:MQA抗腦缺血作用可能與改善纖溶反應(yīng)系統(tǒng)、提高細(xì)胞骨架的穩(wěn)定性、下調(diào)甲狀腺激素信號通路引起與其相關(guān)的信號通路蛋白表達(dá)有關(guān)聯(lián)。
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R965
【圖文】：

腦缺血作用機(jī)制圖

化合物MQA的結(jié)構(gòu)

各組腦梗死組織TTC染色結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2800886