二咖啡�；鼘幩嵫苌铮∕QA）神經(jīng)保護作用機制和轉錄組學的研究

發(fā)布時間：2020-08-22 16:21

【摘要】：目的:本文通過建立大鼠腦中動脈阻塞模型,觀察和檢測一系列生理病理指標,探討MQA對缺血性腦損傷大鼠神經(jīng)保護作用的機制。同時初步探究MQA對腦缺血損傷大鼠RNA表達的影響。方法:實驗一:建立腦缺血模型,分別進行TTC染色觀察大鼠腦梗死面積;HE染色觀察大鼠大腦皮質(zhì)層病理結構改變,試劑盒法分別檢測腦組織勻漿中MDA、LD、GSH-Px和NOS的含量(或活性);免疫組化法檢測大鼠腦組織Caspase-3和Iba1的蛋白表達;TUNEL法觀察腦細胞凋亡狀態(tài);Western blot法檢測凋亡相關蛋白Bax、Bcl-2和凋亡啟動因子PARP、Caspase-3,炎癥相關蛋白NFkB1和p38-MAPK信號通路中p38、AKT和ERK蛋白的表達。實驗二:建立大鼠局灶性腦缺血的病理模型,術后24h斷頭取腦提取總RNA,建立RNA-seq基因文庫,進行轉錄組測序檢測各組腦組織基因表達,分析基因表達豐度、差異基因表達、GO富集和KEGG通路富集。結果:實驗一:1.通過TTC染色觀察模型組腦組織出現(xiàn)顯著的大面積腦梗死,MQA和華佗再造丸都能顯著地改善腦缺血引起的腦梗死;2.HE染色發(fā)現(xiàn)MQA能減輕病理結構的改變;3.免疫組化染色法檢測蛋白Caspase-3和Iba1的表達都明顯降低;4.TUNEL法檢測MQA能顯著性減少凋亡細胞數(shù);5.試劑盒法檢測MQA能降低腦組織中MDA含量、抑制NOS活性,同時能促進GSH-Px活性,對LD的含量變化沒有影響;6.MQA能顯著性降低Bax/Bcl-2的蛋白比值,PARP和Caspase-3蛋白的表達也顯著性降低;炎癥蛋白NFkB1和p38-MAPK信號通路蛋白p38、AKT和ERK的表達都顯著性增加,而MQA能明顯抑制NFkB1、p38、AKT、ERK蛋白的表達。實驗二:1.以FPKM為單位,結果顯示共有22188個表達基因,分組后發(fā)現(xiàn)基因表達主要分布于1-50的FPKM值之間;2.進行基因差異分析后,發(fā)現(xiàn)在P㩳0.05的顯著性下,給藥組與模型組相比共有762個差異基因,在P㩳0.001極顯著性差異性下有53個極顯著性差異基因,其中包括18個上調(diào)基因和35個下調(diào)基因;3.進行GO富集分析后差異表達基因可分為:生物學過程、細胞組成成分和分子功能三類;4.KEGG通路分析主要涉及腎癌細胞通路、核糖體通路、甲狀腺激素信號通路和2-氧代羧酸代謝通路這4條通路。結論:實驗一:1.MQA保護缺血性腦損傷作用與抗氧化應激有關;2.MQA通過抑制細胞凋亡對缺血性腦損傷發(fā)揮神經(jīng)保護作用,原因為MQA影響B(tài)cl-2家族蛋白和凋亡啟動蛋白半胱天冬酶(Caspase)的表達相關;3.MQA能抑制缺血性腦損傷引起的炎癥反應,抑制炎癥反應蛋白NFkB1、P38、AKT、ERK的表達。實驗二:MQA抗腦缺血作用可能與改善纖溶反應系統(tǒng)、提高細胞骨架的穩(wěn)定性、下調(diào)甲狀腺激素信號通路引起與其相關的信號通路蛋白表達有關聯(lián)。
【學位授予單位】：石河子大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R965
【圖文】：

二咖啡酰基奎寧酸衍生物（MQA）神經(jīng)保護作用機制和轉錄組學的研究