【摘要】：熱原是一類在宿主體內(nèi)可以引起發(fā)熱和誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)的異構(gòu)類化合物。在臨床上,熱原是指能使哺乳動(dòng)物產(chǎn)生熱原反應(yīng)的物質(zhì)。熱原按照來(lái)源分為外源性熱原和內(nèi)源性熱原。外源性熱原主要來(lái)源于機(jī)體外,分別為微生物(如細(xì)菌、病毒、真菌)與非微生物(如抗原、抗腫瘤藥)性熱原,內(nèi)源性熱原主要包括機(jī)體內(nèi)的激素(如類固醇、前列腺素)與細(xì)胞因子(如腫瘤壞死因子、干擾素、生長(zhǎng)因子、白介素)。使用熱原污染的藥品和醫(yī)療器械會(huì)引起系統(tǒng)性炎癥,在最糟糕的情況下,則會(huì)引起敗血性休克。因此,準(zhǔn)確和快速量化熱原對(duì)藥品安全是至關(guān)重要的。到目前為止,家兔法、鱟試劑法和單核細(xì)胞激活試驗(yàn)檢測(cè)法對(duì)于熱原的檢測(cè)都存在限制。在我們的研究中,我們致力于開發(fā)一種利用熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)來(lái)靈敏、可靠、快速地檢測(cè)熱原的方法。先前的報(bào)道已經(jīng)表明,細(xì)菌鞭毛蛋白可以通過(guò)Toll樣受體TLR5刺激人肺泡上皮細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子IL-8。然而,其他的熱原物質(zhì)是如何誘導(dǎo)激活肺上皮細(xì)胞還沒(méi)有完全被闡釋清楚。脂多糖(LPS,也被稱為內(nèi)毒素)作為最主要的熱原,是細(xì)胞因子最有效的細(xì)菌誘導(dǎo)劑之一。在感染過(guò)程中,熱原刺激人的單核細(xì)胞去合成或者釋放炎癥細(xì)胞因子,包括白介-1β,白介-6,腫瘤壞死因子-α。而NF-κB是調(diào)控編碼這些促炎因子基因的主要轉(zhuǎn)錄因子。與此同時(shí),人類β-干擾素(IFN-β)通過(guò)增強(qiáng)TNF依賴的TNF的產(chǎn)生,顯著性增加了正常家兔對(duì)內(nèi)毒素的發(fā)熱反應(yīng),而且也恢復(fù)了致敏原耐受的家兔對(duì)內(nèi)毒素的正常發(fā)熱反應(yīng)。鑒于此,我們把含有NF-κB應(yīng)答元件或者IFN-β啟動(dòng)子的熒光素酶基因插入到慢病毒載體中,然后穩(wěn)定轉(zhuǎn)染到A549細(xì)胞中,再經(jīng)過(guò)流式分選單克隆,最后利用熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)來(lái)鑒定單克隆細(xì)胞的活性,從而構(gòu)建出穩(wěn)定的人A549熒光素酶報(bào)告細(xì)胞系。我們的結(jié)果表明幾株NF-κB單克隆穩(wěn)定細(xì)胞對(duì)0.1EU/mL的內(nèi)毒素響應(yīng),而這是少于人的發(fā)熱閾值0.3EU/mL內(nèi)毒素的。我們進(jìn)一步使用靈敏度為0.125 EU/mL的鱟試劑與報(bào)告細(xì)胞比較,這是藥物中廣泛使用的鱟試劑靈敏度,以評(píng)估相同條件下的熱原,結(jié)果顯示報(bào)告細(xì)胞達(dá)到了鱟試劑檢測(cè)法同等的靈敏度。此外,我們進(jìn)一步研究報(bào)告細(xì)胞發(fā)現(xiàn),和原始的A549相比,報(bào)告細(xì)胞克隆在低濃度內(nèi)毒素刺激下就能被激活并上調(diào)TLR4的表達(dá)。這些結(jié)果表明以人肺泡上皮細(xì)胞為基礎(chǔ)的報(bào)告實(shí)驗(yàn)對(duì)于進(jìn)一步開發(fā)可替代的熱原檢測(cè)方法很有潛力同時(shí)也是可行的。因此,穩(wěn)定的熒光素酶報(bào)告細(xì)胞很有可能進(jìn)一步發(fā)展成為一種既快速又靈敏的熱原評(píng)估方法。
【學(xué)位授予單位】：安徽大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R927.12

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 郭麗霞,石曉霞;對(duì)注射劑中熱原污染的探討[J];海峽藥學(xué);2005年05期

2 艾智武,康光明,王前喜,鄒莉;抗人淋巴細(xì)胞免疫球蛋白制品中的熱原處理工藝[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2002年04期

3 何學(xué)英,陳玉蓮;潔消精去熱原效果觀察[J];湖北預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2001年03期

4 孟麗,楊匯川,龔曼琳,張玉蓉;酸堿處理去除血液制品中熱原工藝的探索[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2001年01期

5 徐楨琦,關(guān)國(guó)雄,王豫生;人絨毛膜促性腺激素的精制、去熱原工藝[J];沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào);1998年02期

6 張玉芬,王春紅;輸液“熱原”反應(yīng)淺析[J];中國(guó)療養(yǎng)醫(yī)學(xué);1998年04期

7 曾煥初;二次滅菌法去除不合格輸液中熱原的探討[J];華夏醫(yī)學(xué);1999年02期

8 郭文欣;獸用大輸液中熱原的去除[J];黑龍江畜牧獸醫(yī);1995年12期

9 范q4;;藥物除熱原的方法[J];生化藥物雜志;1985年04期

10 佟書蓮;;執(zhí)行中國(guó)藥典(1985年版)兔溫法檢查熱原的體會(huì)[J];現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué);1987年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 呂棟;杜雅娟;馬迎春;王蘭霞;;正常體溫家兔連續(xù)實(shí)驗(yàn)后對(duì)熱原檢測(cè)數(shù)值的影響[A];中國(guó)藥學(xué)會(huì)第四屆藥物檢測(cè)質(zhì)量管理學(xué)術(shù)研討會(huì)資料匯編[C];2017年

2 李澤美;;三效滅活劑與超聲機(jī)四種除熱原方法探討[A];中華護(hù)理學(xué)會(huì)第7屆消毒供應(yīng)中心發(fā)展論壇論文匯編[C];2011年

3 王明玉;;臨床常用聯(lián)合用藥中熱原的檢測(cè)[A];2006第六屆中國(guó)藥學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

4 張波;郝飛;王豐;邵國(guó)青;;基于無(wú)線測(cè)溫云平臺(tái)的家兔體溫變化規(guī)律及熱原實(shí)驗(yàn)的研究[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)信息技術(shù)分會(huì)第十二屆學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2017年

5 何開勇;;人全血體外熱原實(shí)驗(yàn)方法研究[A];中國(guó)科學(xué)技術(shù)協(xié)會(huì)第十屆年會(huì)21分會(huì)場(chǎng)論文匯編[C];2008年

6 彭國(guó)平;鄭云楓;李存玉;李紅陽(yáng);尹楠;;中藥注射劑中熱原的去除工藝研究[A];現(xiàn)代化中藥制劑發(fā)展與中藥藥理學(xué)研究交流會(huì)論文集[C];2009年

7 牟會(huì)舉;;對(duì)影響輸液質(zhì)量的原因分析及對(duì)策[A];2004年中國(guó)西部藥學(xué)論壇論文匯編（下冊(cè)）[C];2004年

8 杜穎;蔡彤;劉倩;張橫;賀慶;裴宇盛;張媛;高華;譚德講;;熱原檢測(cè)的三種方法在非腸道用制品檢測(cè)中的適用性比較研究[A];2011年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第11屆中國(guó)藥師周論文集[C];2011年

9 田莉;何毅;;用鱟試劑檢測(cè)血液保存液中的熱原[A];中國(guó)輸血協(xié)會(huì)第三屆輸血大會(huì)論文專輯[C];2004年

10 趙慶麗;廖學(xué)均;;動(dòng)態(tài)濁度法定量檢測(cè)愛(ài)欣森注射液中細(xì)菌內(nèi)毒素[A];'2004天津市第十六屆色譜學(xué)術(shù)交流會(huì)論文集[C];2004年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前5條

1 金禮琴 葉燈鳳;二次吸附除胞磷膽堿鈉注射液熱原有效[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

2 曹國(guó)霞;超濾過(guò)濾技術(shù)去除熱原保障注射液安全[N];健康報(bào);2007年

3 王國(guó)明 劉德芳 劉德晶;活性炭去除注射劑熱原效果好[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

4 貴州中泰生物科技有限公司 石正國(guó);標(biāo)準(zhǔn)不打折[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2016年

5 聞靜;肺結(jié)核患者發(fā)熱先“解冷”[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2007年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前7條

1 李凱莉;快速靈敏檢測(cè)熱原的穩(wěn)定細(xì)胞系的開發(fā)與研究[D];安徽大學(xué);2018年

2 馮梅;云芝糖肽（PSP）中熱原物質(zhì)檢查和去除方法的研究[D];上海師范大學(xué);2006年

3 孫沛懋;X公司藥品生產(chǎn)中的熱原控制及改善研究[D];天津大學(xué);2015年

4 劉用國(guó);外源性熱原對(duì)體外人全血中IL-6細(xì)胞因子含量的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2009年

5 劉紅俠;頭孢替唑鈉熱原檢測(cè)方法可行性研究[D];西北大學(xué);2007年

6 陸洪省;蠶蛹氨基酸大輸液原粉制備方法的研究[D];浙江大學(xué);2002年

7 呂名蕊;磷脂酰膽堿富集及熱原去除的研究[D];江南大學(xué);2010年

本文編號(hào)：2714944