【摘要】：目的研究大鼠髓核間充質(zhì)干細(xì)胞(nucleus pulposus-derived mesenchymal stem cell,NPMSC)的生物學(xué)特性及辛伐他汀對(duì)髓核間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及分泌功能的影響,探討其作為內(nèi)源性修復(fù)重建退變椎間盤的可行性。方法取8周齡SD大鼠尾椎髓核組織,采用膠原酶及胰酶序貫消化法分離NPMSC并進(jìn)行體外擴(kuò)增培養(yǎng)。觀察細(xì)胞形態(tài)并通過MTT法檢測細(xì)胞增殖,通過流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞免疫表型及RT-PCR檢測干細(xì)胞基因表達(dá)進(jìn)行髓核間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定。取第3代NPMSC施加不同濃度辛伐他汀干預(yù)(0mol/L、0.01μmol/L、0.1μmol/L及1μmol/L),在干預(yù)后1、3、7、14、21天通過CCK-8法檢測細(xì)胞活力,RT-PCR檢測蛋白多糖、Ⅱ型膠原、缺氧誘導(dǎo)因子 1 α(hypoxia-inducible factor-1 α,HIF-1 α)、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 l(glucose transporter 1,GLUT-1)及血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的mRNA表達(dá)。結(jié)果原代細(xì)胞早期可形成葵花樣細(xì)胞集落,傳代后細(xì)胞生長較原代細(xì)胞明顯加快,細(xì)胞形態(tài)以紡錘形為主。第3代細(xì)胞高表達(dá)干細(xì)胞相關(guān)陽性表面抗原分子CD73、CD90及CD105,低表達(dá)干細(xì)胞相關(guān)陰性表面抗原分子CD45及CD1 lb,與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞具有相似的干細(xì)胞相關(guān)基因Sox2、Oct-4及Nanog表達(dá)水平。合適濃度(0.01 μmol/L-0.1 μmol/L)的辛伐他汀促進(jìn)NPMSC增殖及HIF-1 α、GLUT-1、VEGF的mRNA表達(dá),且0.1 μ mol/L濃度達(dá)到最強(qiáng),而高濃度辛伐他汀(1μmol/L)對(duì)細(xì)胞增殖能力及HIF-1α、GLUT-1、VEGF的mRNA表達(dá)有明顯抑制作用。辛伐他汀可使NPMSC中出現(xiàn)并促進(jìn)Ⅱ型膠原及蛋白多糖mRNA的表達(dá),0.1 μ mol/L濃度達(dá)到最強(qiáng)。結(jié)論合適濃度(0.01 μmol/L-0.1 μmol/L)的辛伐他汀可促進(jìn)髓核間充質(zhì)干細(xì)胞的增殖和細(xì)胞外基質(zhì)的分泌,其機(jī)制可能與HIF-1 α介導(dǎo)的信號(hào)通路有關(guān)。
【圖文】：

圖１毮核間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察（倒置相差顯微鏡Ｘ１００）。Ａ：原代細(xì)胞貼壁后早期可形細(xì)胞集落，，克隆樣生長；Ｂ：原代細(xì)胞傳代后細(xì)胞形態(tài)以紡錘形為主；Ｃ：第３代細(xì)胞形態(tài)基致為紡錘樣長梭形逡逑ＮＰＭＳＣ細(xì)胞增殖曲線逡逑３０－１逡逑Ｉ逡逑ｏｎ邐／逡逑＾邋１０－邋／逡逑§邋／逡逑0邐｜邐｜邐ｒ逡逑０邐５邐１０邐１５逡逑培養(yǎng)天數(shù)（ｄ）逡逑

邐黃澤楠辛伐他汀對(duì)大鼠髓核問充質(zhì)干細(xì)胞增殖及分泌功二邐＜Ｄ圖１毮核間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察（倒置相差顯微鏡Ｘ１００）。Ａ：原代細(xì)胞集落，克隆樣生長；Ｂ：原代細(xì)胞傳代后細(xì)胞形態(tài)以紡錘形為主；Ｃ：致為紡錘樣長梭形逡逑ＮＰＭＳＣ細(xì)胞增殖曲線逡逑
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R965

【參考文獻(xiàn)】

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1 黃澤楠;馮新民;王靜成;陳濤;畢松超;張亮;;辛伐他汀調(diào)控內(nèi)源性干細(xì)胞進(jìn)行退變椎間盤的內(nèi)源性修復(fù)和重建[J];中國組織工程研究;2017年05期

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