【摘要】：目的:采用化療藥物治療腫瘤時,由于特異性差,在殺傷腫瘤的同時,會損傷正常細胞,且容易引起耐藥,限制了化療藥物在腫瘤治療中的應(yīng)用,隨著免疫治療的興起,彌補了化療的不足,不僅能夠特異性的殺傷腫瘤,降低化療藥物的毒性,還能增加腫瘤對化療藥物的敏感性,同時一些化療藥還能引起抗腫瘤的免疫反應(yīng),將二者結(jié)合,可以協(xié)同治療腫瘤。本實驗為實現(xiàn)溫敏性納米粒(TSNs)介導的免疫化療治療黑色素瘤,構(gòu)建了兩種分別以p H敏感型和非p H敏感型載藥的TSNs納米粒,實現(xiàn)對化療藥物阿霉素(DOX)和免疫藥物干擾素γ(IFNγ)的共遞送。方法:利用納米沉降法制備溫敏性納米粒,在已構(gòu)建的溫敏性納米載體(TSNs)的基礎(chǔ)上,通過腙鍵或者酰胺鍵化學偶聯(lián)化療藥物DOX和利用載體自身溫敏性及靜電作用力吸附細胞因子IFNγ,實現(xiàn)化療免疫藥物的共輸送,接著比較酰胺鍵偶聯(lián)和腙鍵偶聯(lián)方法對DOX體外釋放行為的影響,結(jié)合C57BL/6小鼠黑色素瘤模型的治療效果,篩選出相對較好的化學偶聯(lián)方式載藥的納米粒,并通過ELISA、流式細胞儀、免疫組化和激光共聚焦對聯(lián)合治療的機制進行分析。結(jié)果:合成的載藥納米粒大小均一,形貌規(guī)整,具有明顯的核殼結(jié)構(gòu),對DOX和IFNγ有很好的包載。通過一系列體外和體內(nèi)實驗,確定p H敏感的腙鍵偶聯(lián)方式更有利于DOX釋放,聯(lián)合IFNγ在黑色素瘤小鼠體內(nèi)能發(fā)揮明顯的抑瘤效果,同時能活化Th1CD4+T細胞、毒性T淋巴細胞(CTL)和自然殺傷細胞(NK),進而激活免疫系統(tǒng)對腫瘤的殺傷。結(jié)論:成功構(gòu)建了以化學偶聯(lián)方式載藥的TSNs納米粒,實現(xiàn)對化療藥物DOX和細胞因子IFNγ的共遞送,以腙鍵方式載藥的納米粒無論在體外藥物釋放還是在黑色素瘤小鼠體內(nèi)的治療實驗中,釋藥能力和抑瘤效果都明顯優(yōu)于酰胺鍵偶聯(lián)。通過對比,確定最終采用腙鍵偶聯(lián)方式載藥的納米粒DOX/IFNγ-TSN(hyd),該納米粒能通過高通透滯留效應(yīng)(EPR)效應(yīng)和內(nèi)吞作用被動靶向進入腫瘤細胞,在溶酶體微酸環(huán)境(p H 5-6)下,敏感鍵會水解斷裂,釋放出游離DOX,實現(xiàn)藥物的持續(xù)緩慢釋放,由于該納米粒體帶負電性多于酰胺鍵組DOX/IFNγ-TSN(ami),所以能通過靜電作用力吸附更多的IFNγ,跟其他對照組相比,表現(xiàn)出更好的抗腫瘤效果,并且能夠激活固有免疫和適應(yīng)性免疫應(yīng)答,進而啟動抗腫瘤的免疫機制。
【圖文】：

圖 1.1 PLGA-DOX(hyd)的合成路線。Figure 1.1 Synthetic scheme of PLGA-DOX (hyd)..4 PLGA-DOX(hyd)的表征稱取 10mgPLGA-DOX(hyd)于核磁管中，加入 500μLCDCl3溶劑避光溶磁儀檢測該化合物的核磁氫譜，分析特征峰，確證最終產(chǎn)物結(jié)構(gòu)。 非 pH 敏感的 PLGA-DOX(ami)的合成與表征.1 非 pH 敏感的 PLGA-DOX(ami)的合成分別稱取 500 mg PLGA，34 mg EDCHCl，21 mg NHS 置于圓底燒瓶 4 mL DMF 使其完全溶解，室溫活化 24 h，另稱取 104 mg DOXHCTEA 溶解于 2 mLDMF，之后將阿霉素的 DMF 液逐滴滴入 PLGA 混合液氣保護，在室溫下避光攪拌 24 小時，待反應(yīng)完成后，產(chǎn)物用冷乙醚沉 3 次, 除去多余雜質(zhì)，之后將沉淀用少量 DMF 溶解，置于透析袋（M

圖 1.2 PLGA-DOX(ami)的合成路線。Figure 1.2 Synthetic scheme of PLGA-DOX (ami). pH 敏感的 PLGA-DOX(ami)的表征取 10mgPLGA-DOX(ami)于核磁管中，加入 500μLCDCl3溶劑避光溶共振儀檢測 PLGA-DOX(ami)的核磁氫譜，分析化合物的特征峰，確 PLGA-DOX(ami)是否合成。SNs 納米粒的構(gòu)建載體 TSNs 的制備 1：1 的質(zhì)量比稱取 PLGA-COOH 和 PLGA-mPEG 共 15mg，攪拌溶乙腈中，以 PLGA:F127=1：20 的比例，加入 300 mg F127，室溫待混合物完全溶解呈透亮時，在攪拌條件下，，用注射器緩慢滴入 20，室溫條件下攪拌過夜。待溶劑揮發(fā)完后，收集所得納米粒于離心
【學位授予單位】：華中科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R943

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本文編號：2660201