發(fā)布時間：2020-04-05 16:00

【摘要】：目的:微囊藻毒素可引起雄性哺乳動物生殖系統(tǒng)損害,導(dǎo)致小鼠睪丸細胞凋亡。本研究主要探討MC-LR通過鈣離子誘導(dǎo)小鼠雄性生殖細胞凋亡及其分子機制,為制定水環(huán)境中MC-LR暴露危害的防治措施和策略提供實驗依據(jù)。研究方法:第一部分MC-LR暴露誘導(dǎo)小鼠睪丸生殖細胞凋亡選擇健康8周齡SPF級雄性ICR小鼠30只。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后,將小鼠隨機分為對照組、10μg/kg MC-LR暴露組和25μg/kg MC-LR暴露組3組,每組10只。采取暴露式氣管滴注法進行急性暴露36h。染毒結(jié)束后,處死小鼠,收集小鼠睪丸,稱重,部分置入10%甲醛中固定,其余放入液氮速凍后保存于-80℃。采用HE染色,觀察小鼠睪丸組織病理學(xué)改變;采用TUNEL法,檢測睪丸組織中生殖細胞凋亡情況;采用免疫蛋白印跡法檢測小鼠睪丸組織中細胞凋亡相關(guān)蛋白Caspse-3和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)的蛋白GRP78,IRE1,CHOP,PERK,Caspase-12表達水平。第二部分鈣離子在MC-LR誘發(fā)小鼠支持細胞凋亡中的作用研究鈣離子在MC-LR誘導(dǎo)小鼠雄性生殖細胞凋亡中的作用,采用胞內(nèi)鈣離子螯合劑Bapta預(yù)處理小鼠TM4細胞30min,然后暴露于MC-LR,檢測細胞中鈣離子濃度、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)、線粒體膜電位和細胞凋亡情況。結(jié)果:第一部分MC-LR暴露誘導(dǎo)小鼠睪丸生殖細胞凋亡(1)MC-LR暴露誘導(dǎo)小鼠睪丸組織損傷和凋亡發(fā)生率明顯上升:10μg/kg MC-LR組出現(xiàn)輕微的睪丸萎縮,生精細胞間出現(xiàn)變性、空泡化;25μg/kg MC-LR組睪丸組織生精小管內(nèi)生精細胞排列紊亂并減少。與對照組比較,MC-LR處理組小鼠睪丸組織陽性小管發(fā)生率和單位平均凋亡細胞數(shù)均較高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。(2)小鼠睪丸組織凋亡相關(guān)蛋白表達的情況:與對照組相比,MC-LR暴露組小鼠睪丸組織中Caspase-3蛋白的表達水平均升高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);而Caspase-9蛋白的表達水平均無明顯改變。(3)小鼠睪丸組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)蛋白表達的情況:與對照組相比,各劑量MC-LR組小鼠睪丸組織中Caspase-12、CHOP蛋白及25μg/kg MC-LR組小鼠睪丸組織中GRP78蛋白的表達水平均升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。第二部分鈣離子在MC-LR誘發(fā)小鼠支持細胞凋亡中的作用(1)MC-LR暴露誘導(dǎo)TM4細胞凋亡:與對照組相比MC-LR暴露組促進了TM4細胞凋亡(P0.01),Bapta拮抗了MC-LR的促凋亡作用(P0.05)。(2)MC-LR暴露誘導(dǎo)TM4細胞線粒體膜電位下降:與對照組相比,MC-LR暴露組膜電位下降,差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01);與30μg/mLMC-LR相比,加入Bapta后一定程度上抑制了膜電位的下降,且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(3)MC-LR暴露上調(diào)TM4細胞中凋亡相關(guān)蛋白表達:與對照組相比,各劑量MC-LR暴露組小鼠睪丸組織中Caspase-3蛋白的表達水平均升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。MC-LR與Bapta的處理后,TM4細胞的MC-LR組Caspase-3蛋白的表達明顯低于30μg/mL MC-LR組(P0.05)。(4)MC-LR暴露上調(diào)TM4細胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)蛋白表達:與對照組相比,各劑量MC-LR暴露組小鼠睪丸組織中Caspase12、Chop和Grp78蛋白的表達水平均升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。MC-LR與Bapta的處理后,TM4細胞的Caspase-12、Chop和GRP78的蛋白表達水平明顯低于30μg/mL MC-LR組(P0.05)。(5)MC-LR暴露上調(diào)TM4細胞中鈣離子調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白表達:與對照組相比,各劑量MC-LR暴露組小鼠睪丸組織中p-p38、p-Erk1/2、Erk1/2和p-CaMKⅡ蛋白的表達水平均升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。MC-LR暴露與Bapta的預(yù)處理后,TM4細胞的p-p38、p-Erk1/2和p-CaMKⅡ的蛋白表達水平明顯低于30μg/mL MC-LR組(P0.01)。(6)MC-LR暴露上調(diào)TM4細胞中線粒體相關(guān)蛋白表達:與對照組相比,MC-LR暴露組小鼠睪丸組織中Bcl-2、Bax和Cyt c蛋白的表達水平均升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。Bapta預(yù)處理后,TM4細胞的Bcl-2、Bax和Cyt c的蛋白表達水平明顯低于30μg/mL MC-LR組(P0.05)。結(jié)論:(1)MC-LR通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)小鼠睪丸生殖細胞凋亡。(2)微囊藻毒素MC-LR暴露通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和線粒體途徑誘導(dǎo)小鼠睪丸支持細胞凋亡中起到重要作用。(3)鈣離子在MC-LR暴露誘導(dǎo)小鼠睪丸支持細胞凋亡中起到重要作用。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R99

【參考文獻】

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1 李一鳴;臧宇;郭云山;唐娟;;CHOP/GADD153在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)細胞凋亡中的研究進展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2016年11期

2 Mohamed Hassan;Denis Selimovic;Matthias Hannig;Youssef Haikel;Robert T Brodell;Mossaad Megahed;;Endoplasmic reticulum stress-mediated pathways to both apoptosis and autophagy: Significance for melanoma treatment[J];World Journal of Experimental Medicine;2015年04期

3 周升梅;李煌;吳拓江;;Ca~(2+)信號介導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡途徑及其在相關(guān)疾病中的作用[J];南昌大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2014年03期

4 黃藝;張郅灝;;微囊藻毒素的致毒機理和人體健康風(fēng)險評價研究進展[J];生態(tài)環(huán)境學(xué)報;2013年02期

5 李超鋒;張豐泉;辛紅霞;易丹;趙仲麟;袁超;崔留欣;張慧珍;;Caspase-3在微囊藻毒素-LR誘導(dǎo)大鼠睪丸支持細胞凋亡中的作用[J];環(huán)境與健康雜志;2012年02期

6 王昊;徐立紅;;微囊藻毒素研究的當前進展和未來方向[J];水生生物學(xué)報;2011年03期

7 居靜娟;浦躍樸;尹立紅;王大勇;;微囊藻毒素神經(jīng)毒理學(xué)研究進展[J];生態(tài)毒理學(xué)報;2011年01期

8 農(nóng)清清;竹內(nèi)亨;張志勇;何敏;;微囊藻毒素-LR致HT17細胞毒性及DNA損傷[J];中國公共衛(wèi)生;2008年08期

9 董玲;段麗菊;張慧珍;程學(xué)敏;杉浦則夫;張振亞;崔留欣;;微囊藻毒素-LR致小鼠肝、腎和睪丸細胞DNA-蛋白質(zhì)交聯(lián)的研究[J];衛(wèi)生研究;2008年02期

10 張占英,連民,劉穎,衛(wèi)國榮,俞順章,張幼辰,陳傳煒,康蘇亞;微囊藻毒素LR對胎鼠的致畸和損傷作用[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2002年05期

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本文編號：2615217