【摘要】：本文以苦蕎種子為原料,采用乙醇浸提法獲得60.56%的粗黃酮。為了提高總黃酮的含量,本實驗中利用反溶劑重結(jié)晶方法將總黃酮進一步純化,并對其表征、溶解度、體外釋放規(guī)律、小腸吸收和細胞抗氧化性進行了考察。該實驗和結(jié)果如下:用Design Expert 8.0軟件,按Box-Behnken設(shè)計對該工藝進行優(yōu)化,得到以下最佳條件:攪拌時間13.9min,總黃酮濃度70.0mg/mL,再結(jié)晶溫度38.0℃,水(反溶劑)與甲醇(溶劑)的體積比為10:1。在此條件下,總黃酮的得率和純度分別為94.35%和99.81%,其中蘆丁的含量為86.37%,山奈酚-3-O-蕓香糖苷的含量為3.61%,槲皮素的含量為5.21%。通過粒徑和SEM對純化后的黃酮進行表征,結(jié)果表明反溶劑法不僅提高了總黃酮的純度,還減小了黃酮的粒徑的大小(250-430 nm)。由于粒徑的減小,總黃酮的溶解度、體外的釋放速率和小腸吸收均有所提高,但細胞毒性實驗結(jié)果表明,苦蕎黃酮純化微粉并沒有因為吸收改善后對細胞產(chǎn)生毒性。在抗氧化方面,因為吸收度增加和生物相容性的提高,細胞抗氧化結(jié)果顯示出經(jīng)純化后,苦蕎黃酮的抗氧化能力提高。本文利用上述純化黃酮為原料,采用溶劑重結(jié)晶法,使蘆丁通過在乙醇中重結(jié)晶來改變原有的晶體結(jié)構(gòu)改善其水溶性和生物利用度。實驗中,在60℃時蘆丁在乙醇中完全溶解,放置于25℃時,由于過飽和析出新的晶體,即蘆丁乙醇溶劑化物。首先為了確定化學結(jié)構(gòu)的變化,通過高效液相色譜和氣相色譜分別對蘆丁-乙醇化物中蘆丁和乙醇的含量進行了測試,實驗數(shù)據(jù)顯示,兩種物質(zhì)之間以摩爾比1:1形成氫鍵。FTIR測試中,蘆丁的特征峰發(fā)生變化,進一步證實所得晶體中乙醇的存在。其次為鑒定蘆丁乙醇化物晶體結(jié)構(gòu)的變化,實驗通過顯微鏡、SEM、XRD和DSC對其進行表征。結(jié)果表明,蘆丁乙醇化物是不同于蘆丁原藥的一種新型晶體,具有不同結(jié)構(gòu)特征。溶解性試驗結(jié)果表明,由于晶體結(jié)構(gòu)的改變使蘆丁乙醇化物具有更好的吸濕性,所以比蘆丁的溶解速率更快。在大鼠實驗中,蘆丁乙醇化物的生物利用度是蘆丁原藥的1.67倍,這意味著蘆丁溶劑化后提高了口服吸收的效率。此外,對蘆丁乙醇化物晶體結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性進行了考察。結(jié)果證明,蘆丁乙醇化物吸潮后,易再次與水結(jié)合形成水合物即蘆丁三水合物,但干燥密封條件下保存,晶體結(jié)構(gòu)將不會改變。說明此結(jié)構(gòu)是異于蘆丁三水合物的亞穩(wěn)態(tài)晶體。本文利用羥丙基-β-環(huán)糊精(HP-β-CD)為包合材料,結(jié)合反溶劑法制備了蘆丁-羥丙基-β-環(huán)糊精包合物,對其體外表征、體內(nèi)生物利用度和降糖作用進行了測試。實驗和結(jié)果如下:首先,了解蘆丁與羥丙基-β-環(huán)糊精相溶解平衡,確定蘆丁與羥丙基-β-環(huán)糊精的摩爾比例為1:1時,蘆丁可以完全被包合。其次,采用反溶劑重結(jié)晶法與包合技術(shù)相結(jié)合的方法,以N,N-二甲基甲酰胺(DMF)為溶劑,丙酮為反溶劑,對單因素蘆丁濃度、包合時間、包合溫度、重結(jié)晶溫度、溶劑與反溶劑比對蘆丁-羥丙基-β-環(huán)糊精包合物中蘆丁的載藥量和包合率的影響,并得到最優(yōu)條件:蘆丁的濃度為120 mg/mL,包合時間為60 min、包合溫度為25 ℃、重結(jié)晶溫度為0 ℃、溶劑與反溶劑比為1:13。在最佳條件下進行驗證實驗,所得結(jié)果:包合物的載藥量為28.93%±0.12%,包封率為90.02%±1.3%。實驗中利用SEM、FTIR、XRD、1HNMR和DSC對包合物進行表征。結(jié)果顯示:蘆丁與羥丙基-β-環(huán)糊精形成了包合物且以一種無定型態(tài)的形式存在。此外進行了溶劑殘留、溶解度、體外溶出、生物利用度和體內(nèi)降糖測試。實驗結(jié)果顯示,蘆丁羥丙基-β-環(huán)糊精包合物中的DMF和丙酮的殘留量分別為0.021%和0.025%,均符合人用藥物注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會(ICH)要求的最低標準;在水溶性的測試結(jié)果中,蘆丁羥丙基-β-環(huán)糊精包合物的溶解度及體外溶出速率都明顯高于蘆丁原藥同時,蘆丁羥丙基-β-環(huán)糊精包合物的口服生物利用度約為蘆丁的2.24倍,經(jīng)過包合后的蘆丁,在生物利用度提高的基礎(chǔ)上,降糖活性有所提高,血糖含量可降為8.6mmol/L。
【圖文】：

反溶劑中有較好的溶解度，使在反溶劑重結(jié)晶時不會因為溶解度過飽和與目標物一起析逡逑出。又考慮到去除溶劑殘留的難易程度，最后選擇甲醇作為溶劑，水為反溶劑。逡逑圖２－１為反溶劑重結(jié)晶法純化苦蕎黃酮的工藝流程。稱量２．２．１中獲得的苦蕎黃酮逡逑提取物１５０ｍｇ于燒杯中，加入５ｍＬ的甲醇使其充分溶解，通過離心或過濾去除不溶殘逡逑余物。通過蠕動泵以５ｎｉＬ／ｍｉｎ的速度將溶液泵入一定體積和恒定溫度的去離子水中，逡逑３０0ｒ／ｍｉｎ攪拌。一定時間后，，過濾除去全部溶液，獲得沉淀物并用去離子水洗滌三次。逡逑１２０．０°Ｃ烘箱干燥至恒重，獲得苦蕎黃酮純化粉體。逡逑邐逡逑＿逡逑蠕艦邐＞邋機械財卜器逡逑＿＿；逡逑丨丨丨１邐Ｊｉｌｌ！逡逑ＴＴ－［Ｔ邐ＴＴ７ＴＴ逡逑Ｉｋ邐灥—^悖懾澹保卞義霞祝芤哄巍�、逦Ｎ．辶x細嘰慷任露卻釁麇義賢跡玻狽慈薌斂僮鞒絳虻氖疽饌煎義希疲椋紓玻卞澹櫻悖瑁澹恚幔簦椋沐澹洌澹螅悖潁椋穡簦椋錚鑠澹錚駑澹幔睿簦椋螅錚歟觶澹睿翦澹錚穡澹潁幔簦椋錚鑠澹穡潁錚悖澹洌酰潁邋義希玻玻誠煊γ娣ㄓ嘔嘬窕仆炕義希玻玻常筆笛檣杓棋義舷煊γ嬗嘔ǹ悸橇聳匝樗婊蟛睿畢煊γ娣ń叢擁奈粗暮叵翟諦∏義嫌蚰謨眉虻サ囊淮位蚨味嘞釷僥Ｐ屠茨夂�，紦溷比较枷l�，蕢︷q鍪導飾侍獾撓行皺義隙巍ｅ義希保矗義

本文編號：2600795