發(fā)布時(shí)間：2020-03-22 17:43

【摘要】：化療藥物紫杉醇(Paclitaxel,PTX)是治療乳腺癌的一線藥物。但由于PTX水溶性較小、靶向性較差、毒副反應(yīng)強(qiáng),限制了其臨床應(yīng)用。PTX的第一個(gè)商用配方Taxol(?)以聚氧乙烯蓖麻油(Cremophor(?)EL)和無(wú)水乙醇以1:1的比例作為溶劑。但配方中所含的聚氧乙烯蓖麻油易導(dǎo)致嚴(yán)重的過(guò)敏反應(yīng)、腎毒性與神經(jīng)毒性,患者的耐受性較差。為了增大PTX的水溶性與靶向性,提高制劑的安全性,本課題設(shè)計(jì)了一種具有雙敏感特性的前藥納米載體,用來(lái)遞送化療藥物PTX。根據(jù)腫瘤組織谷胱甘肽(glutathione,GSH)濃度較高與金屬基質(zhì)蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)過(guò)表達(dá)的特性,設(shè)計(jì)的納米粒具有氧化還原與MMP-2酶雙敏感性,并可實(shí)現(xiàn)程序化藥物釋放。另外,加入牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)用來(lái)主動(dòng)靶向乳腺癌細(xì)胞上過(guò)表達(dá)的SPARC受體。課題研究主要包括以下四部分內(nèi)容:1.含二硫鍵的PTX前藥與巰基化明膠(Gel-SH)的合成及表征首先,利用 PTX、3,3'-二硫代二丙酸酐(dithiodipropionicanhydride,DTDPA)合成含二硫鍵的紫杉醇前藥PTX-SS-COOH。接著,利用明膠與對(duì)巰基苯甲酸的酰胺化反應(yīng)合成巰基化明膠(Gel-SH)。最后,將PTX-SS-COOH與Gel-SH在混合溶劑中進(jìn)行酰胺化反應(yīng),得到巰基化修飾的兩親性聚合物Gel-SS-PTX。產(chǎn)物通過(guò)紫外分光光度法(UV)、核磁共振氫譜法(1H-NMR)及傅里葉變換紅外光譜法(FT-IR)驗(yàn)證了上述物質(zhì)成功合成。通過(guò)Ellman法測(cè)得Gel-SH中巰基含量為55.88 μmol/g。2.BSA/Gel-SS-PTX/PTX-SS-COOH納米粒的制備及理化性質(zhì)的考察通過(guò)一步制備法制備了 BSA/Gel-SS-PTX/PTX-SS-COOH雙模式載藥納米粒,測(cè)定了納米粒的載藥量。分別利用透射顯微鏡法(transmission microscopy,TEM)、動(dòng)態(tài)光散射法(dynamic light scattering,DLS)、花熒光探針?lè)ǹ疾炝思{米粒的外觀形態(tài)、粒徑分布、Zeta電位及臨界聚集濃度(critical aggregation concentration,CAC)等物理化學(xué)性質(zhì)。結(jié)果顯示,按照最優(yōu)處方制備的雙模式載藥納米粒載藥量約為28.71%,其外觀形態(tài)良好,呈光滑圓球形;粒徑約為124.4±1.32 nm,分布均勻,Zeta電位為-1.47±0.278 mV;臨界聚集濃度為0.0355 mg/mL。3.雙模式載藥納米粒的體外評(píng)價(jià)將BSA/Gel-SS-PTX/PTX-SS-COOH雙模式載藥納米粒在不同pH值下與MMP-2酶孵育不同時(shí)間后,通過(guò)測(cè)量粒徑及粒徑分布變化證明了納米粒的酶敏感性。利用透析袋法,測(cè)定了 Gel-SH/PTX-SS-COOH納米粒、Gel-SS-PTX納米粒與BSA/Gel-SS-PTX/PTX-SS-COOH納米粒在不同氧化還原水平的釋放介質(zhì)中的體外釋藥情況,發(fā)現(xiàn)當(dāng)存在10 mM D,L-二硫蘇糖醇(dithiothreitol,DTT)時(shí),納米粒的釋藥速度與累積釋放量均明顯上升,證實(shí)了其氧化還原敏感性。利用鼠系黑色素瘤細(xì)胞(B16細(xì)胞)與人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7細(xì)胞)為細(xì)胞模型,評(píng)價(jià)了納米粒的體外抗腫瘤活性、細(xì)胞攝取能力、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡能力與消耗細(xì)胞內(nèi)GSH的能力,并通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry,FCM)證明了納米粒的主動(dòng)靶向性。4.雙模式載藥納米粒的體內(nèi)藥效學(xué)評(píng)價(jià)在小鼠的右側(cè)腋下注射鼠系黑色素瘤細(xì)胞(B16細(xì)胞)建立荷瘤小鼠模型,通過(guò)尾靜脈注射生理鹽水、Taxol(?)制劑與BSA/Gel-SS-PTX/PTX-SS-COOH雙模式載藥納米粒,并以小鼠瘤體積與體重為指標(biāo)評(píng)價(jià)了納米粒的體內(nèi)抗腫瘤活性與體內(nèi)安全性。與生理鹽水組相比,Taxol(?)治療組與納米粒治療組的小鼠腫瘤體積均無(wú)顯著增長(zhǎng),說(shuō)明兩種制劑的治療效果較好;但Taxol(?)治療組的小鼠體重下降明顯,納米粒治療組小鼠的體重略有上升,說(shuō)明與Taxol(?)相比,納米粒的毒副作用較小。將各組小鼠的正常組織與腫瘤組織剝離后,進(jìn)行蘇木精-伊紅染色(hematoxylin-eosin staining,HE staining)后發(fā)現(xiàn),生理鹽水組與納米粒治療組小鼠的正常組織均正常,而Taxol(?)治療組小鼠表現(xiàn)出肝毒性與腎毒性,進(jìn)一步證明了納米粒有較好的體內(nèi)安全性。
【圖文】：

Ｆｉｇ．ｌ．邋Ｔｈｅ邋ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ邋ｏｆ邋ＰＴＸ邋ａｎｄ邋ｔｈｅ邋ｆｏｎｎｕｌａｔｉｏｎ邋ｏｆ邋Ｔａｘｏｌ＊邋［３２］逡逑為了充分發(fā)揮紫杉醇作為抗癌藥物在臨床應(yīng)用上的作用，人們?cè)O(shè)計(jì)了納米逡逑給藥系統(tǒng)用來(lái)遞送紫杉醇，在降低其自身副反應(yīng)、避免使用聚氧乙烯蓖麻油的逡逑同時(shí)，提高了藥物的溶解度，并利用多種手段提高了藥物的瘤內(nèi)濃度。Ｂｙｅｏｎ逡逑Ｙｅｏｎｇｓｅｏｎ＾邋［３３］設(shè)計(jì)了一種用透明質(zhì)酸標(biāo)記的邋ｐｏｌｙ（ｄ，ｌ－ｌａｃｔｉｄｅ－ｃｏ－ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ）納米逡逑粒包裹紫杉醇與ＦＡＫｓｉＲＮＡ，治療化療耐受性卵巢癌，其中，透明質(zhì)酸可主動(dòng)逡逑靶向癌細(xì)胞表面過(guò)表達(dá)的ＣＤ４４受體。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，納米粒可克服紫杉醇水逡逑溶性低的缺點(diǎn)，并提高ＦＡＫｓｉＲＮＡ在血液循環(huán)系統(tǒng)中的穩(wěn)定性。另外，此給藥逡逑系統(tǒng)可提高腫瘤部位的藥物濃度，最大限度地減少脫靶效應(yīng)，，增加耐藥卵巢癌逡逑細(xì)胞的細(xì)胞毒性，誘導(dǎo)其凋亡，在選擇性靶向與高效治療耐藥腫瘤細(xì)胞方面具逡逑有較好的應(yīng)用前景。逡逑五、牛血清白蛋白概述逡逑牛血清白蛋白（Ｂｏｖｉｎｅ邋ｓｅｒｕｍ邋ａｌｂｕｍｉｎ，邋ＢＳＡ）是一種牛血清中的天然蛋白，逡逑

PTX.SsCOOH與PTx的’H.NM嘆圖
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R943

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本文編號(hào)：2595394