【摘要】：目的:(1)觀察二甲雙胍聯(lián)合柔紅霉素對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞(SW480)的增殖抑制作用及促進(jìn)細(xì)胞凋亡作用,并探討其可能的作用機(jī)制。(2)觀察二甲雙胍聯(lián)合柔紅霉素對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞(SW480)荷瘤裸鼠的抑瘤作用。方法:(1)體外培養(yǎng)SW480結(jié)腸癌細(xì)胞,通過(guò)MTT法檢測(cè)不同濃度二甲雙胍(2.5、5、10、20、40、80 mmol·L-1)、柔紅霉素(0.025、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8?mol·L-1)以及不同濃度二甲雙胍(2.5、5、10、20、40、80 mmol·L-1)聯(lián)合柔紅霉素(0.2?mol·L-1)在不同時(shí)間(24h、48h、72h)對(duì)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞增殖的影響,確定藥物的濃度和作用時(shí)間。實(shí)驗(yàn)分為四組:空白組,二甲雙胍組(20mmol·L-1),柔紅霉素組(0.2?mol·L-1),二甲雙胍與柔紅霉素聯(lián)合用藥組(20mmol·L-1+0.2?mol·L-1),藥物作用24h后檢測(cè)相應(yīng)指標(biāo):(1)MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率;(2)集落克隆形成法檢測(cè)細(xì)胞集落克隆形成情況;(3)碘化丙啶(propidium iodide,PI)單染及Annexin V/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞的凋亡率;(4)Western blot檢測(cè)Bax、Bcl-2蛋白的表達(dá);(5)RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞Bcl-2、Bax mRNA變化。(2)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)使用人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞,建立移植腫瘤裸鼠模型:選取5-6周健康裸鼠,待細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期時(shí),調(diào)整細(xì)胞濃度為1×107/ml,每只裸鼠左側(cè)腋窩下注射細(xì)胞懸液0.2ml,將40只荷瘤小鼠隨機(jī)分為4組:模型組(生理鹽水NS),二甲雙胍組(100mg·kg-1),柔紅霉素組(0.1mg·kg-1),二甲雙胍組與柔紅霉素聯(lián)合用藥組(100mg·kg-1+0.1mg·kg-1),以上各組裸鼠腹腔注射給藥,每只0.2mL,每隔3天給藥一次,給藥6次,處死裸鼠,檢測(cè)相應(yīng)指標(biāo)。(1)測(cè)量瘤體大小,繪制成瘤曲線;(2)稱(chēng)量瘤體濕量,計(jì)算抑瘤率;(3)HE染色觀察瘤體轉(zhuǎn)移浸潤(rùn)情況;(4)TUNEL檢測(cè)細(xì)胞凋亡情況;結(jié)果:(1)體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn):(1)MTT法檢測(cè)顯示,不同濃度二甲雙胍(2.5、5、10、20、40、80mmol·L-1)、柔紅霉素(0.025、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8?mol·L-1)作用于SW480細(xì)胞24h、48h、72h后均可降低細(xì)胞的存活率。兩者合用時(shí),對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率明顯增加,且抑制作用具有濃度、時(shí)間依賴性。20mmol·L-1二甲雙胍作用于細(xì)胞24h、48h、72h后的存活率分別為66.35%、50.37%、42.02%。0.2?mol·L-1柔紅霉素作用于細(xì)胞24h、48h、72h后的存活率分別為63.12%、48.13%、45.24%。二甲雙胍與柔紅霉素(0.2 mol·L-1)合用作用于細(xì)胞24h、48h、72h的存活率分別為60.63%、45.29%、32.16%。明顯低于各單用組(P0.05)。(2)集落克隆結(jié)果顯示,在經(jīng)過(guò)結(jié)晶紫染色以后,克隆處顯示為紫色斑點(diǎn),而細(xì)胞經(jīng)二甲雙胍和柔紅霉素單獨(dú)用藥及聯(lián)合用藥組處理后,與空白組比較,集落克隆形成數(shù)量均有所減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),進(jìn)一步觀察兩者合用后,聯(lián)合用藥組與柔紅霉素單用組比較,克隆形成的斑點(diǎn)減少更加明顯,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(3)PI單染及Annexin V/PI雙染經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示:SW480細(xì)胞的自發(fā)凋亡率極低,在用藥以后,二甲雙胍和柔紅霉素單獨(dú)作用于細(xì)胞后凋亡率增加,兩者合用作用于細(xì)胞后,細(xì)胞凋亡率明顯增加,與空白組比較差異均具有顯著性(P0.05),與柔紅霉素單用組相比,聯(lián)合用藥組細(xì)胞凋亡率明顯增加,差異均具有顯著性(P0.05)。(4)Western blot及RT-PCR結(jié)果顯示,Bcl-2蛋白及mRNA的表達(dá),與空白組比較,各組表達(dá)量減少,差異具有顯著性(P0.05);與柔紅霉素單用組比較,聯(lián)合用藥組表達(dá)量明顯減少,差異具有顯著性(P0.05);Bax蛋白及mRNA的表達(dá),與空白組比較,其他各組表達(dá)量均增加,差異具有顯著性(P0.05);與柔紅霉素單用組比較,聯(lián)合用藥組表達(dá)量明顯增加,差異具有顯著性(P0.05);(2)動(dòng)物實(shí)驗(yàn):(1)聯(lián)合用藥組的瘤體積、生長(zhǎng)與單用組比,生長(zhǎng)緩慢,體積縮小,差異具有顯著性(P0.05)。瘤體濕重及計(jì)算抑瘤率。結(jié)果顯示,與模型組相比,柔紅霉素組與聯(lián)合用藥組瘤重有明顯減少,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),與柔紅霉素組相比,聯(lián)合用藥組瘤重減少的更明顯,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)HE染色,在血管最豐富處即腫瘤的最外層,聯(lián)合用藥組同其他組相比,細(xì)胞正常區(qū)域較少,而壞死區(qū)域較多。(3)TUNEL檢測(cè)凋亡細(xì)胞,鏡下顯示聯(lián)合用藥組細(xì)胞凋亡最為明顯。結(jié)論:(1)二甲雙胍聯(lián)合柔紅霉素對(duì)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞增殖有抑制作用并能促進(jìn)細(xì)胞凋亡,其作用機(jī)制可能與促進(jìn)Bax蛋白表達(dá),抑制Bcl-2蛋白表達(dá)有關(guān)。(2)二甲雙胍聯(lián)合柔紅霉素對(duì)SW480結(jié)腸癌荷瘤裸鼠有抗腫瘤增長(zhǎng)作用,其機(jī)制可能與促進(jìn)凋亡有關(guān)。
【圖文】：

圖 2-1 藥物對(duì)細(xì)胞增殖抑制作用( x ±s，n=5)A.二甲雙胍 B.柔紅霉素 C.二甲雙胍聯(lián)合柔紅霉素Fig.2-1 The effect of drugs on cell proliferation( x ±s，n=5A.Metformin B. Erythromycin C. Metformin and Erythromy腸癌細(xì)胞 SW480 集落克隆形成的抑制作用多的了解二甲雙胍和柔紅霉素單獨(dú)使用或者是聯(lián)合用80）在增殖方面的影響，在實(shí)驗(yàn)中，我們根據(jù) MTT 實(shí)細(xì)胞，運(yùn)用集落克隆形成實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)方法，，進(jìn)一步觀察80）增殖抑制作用的影響。由結(jié)果，我們可以看出，在處顯示為紫色斑點(diǎn)，而細(xì)胞經(jīng)二甲雙胍和柔紅霉素單后，與空白組比較，集落克隆形成數(shù)量均有所減少，差進(jìn)一步觀察兩者合用后，聯(lián)合用藥組與柔紅霉素單用

-2.藥物對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞SW480集落克隆形成的影響
【學(xué)位授予單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R96

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 羅敏玉,許文思;馬杜拉放線菌對(duì)柔紅霉素轉(zhuǎn)化的酶學(xué)研究[J];中國(guó)抗生素雜志;1991年01期

2 陳代杰,許文思;柔紅霉素的發(fā)酵研究[J];中國(guó)抗生素雜志;1991年06期

3 蔣莎義,馬沛然,陳力軍,韓月琴,孫迎紅,王海虹;硫酸鋅在體外對(duì)柔紅霉素的細(xì)胞毒性影響研究[J];臨床兒科雜志;2004年04期

4 蘇麗萍,王玉萍,喬振華,張麗,朱鐳,鹿育晉,周永安;急性髓系白血病細(xì)胞內(nèi)柔紅霉素潴留與多藥耐藥關(guān)系的研究[J];中華血液學(xué)雜志;2005年08期

5 劉珊珊;黃偉;;大劑量柔紅霉素在老年急性髓細(xì)胞白血病治療中的應(yīng)用[J];內(nèi)科急危重癥雜志;2010年01期

6 何暉;周宏灝;劉昭前;;柔紅霉素個(gè)體差異的遺傳藥理學(xué)研究進(jìn)展[J];中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué);2013年10期

7 顧伯雄;顧澤輝;;柔紅霉素發(fā)酵后期參照過(guò)濾速率放罐的試驗(yàn)[J];醫(yī)藥工業(yè);1988年05期

8 陳代杰,羅敏玉,許文思;柔紅霉素和襄樊霉素產(chǎn)生菌突變生物合成的研究[J];中國(guó)抗生素雜志;1990年04期

9 蔣莎義,馬沛然,韓月琴,丁宇,孫迎紅,王海虹;亞硒酸鈉在體外對(duì)柔紅霉素的細(xì)胞毒性影響[J];醫(yī)學(xué)臨床研究;2004年03期

10 翁立堅(jiān);林若玲;;單光子斷層顯像在評(píng)價(jià)柔紅霉素對(duì)急性淋巴細(xì)胞白血病患兒左心功能影響中的作用[J];中國(guó)醫(yī)藥;2006年08期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 劉佳;吳海龍;方冬梅;夏阿林;俞汝勤;;三維熒光二階校正法用于血漿和尿液中柔紅霉素的定量測(cè)定[A];第九屆全國(guó)計(jì)算（機(jī)）化學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要集[C];2007年

2 丁麗婭;黃維雪;黃強(qiáng);余龍;;羰基還原酶的抑制劑EGCG聯(lián)合柔紅霉素在治療肝癌中的應(yīng)用[A];遺傳學(xué)與社會(huì)可持續(xù)發(fā)展——2010中國(guó)青年遺傳學(xué)家論壇論文摘要匯編[C];2010年

3 盧遠(yuǎn)航;鄧安國(guó);楊曉;劉建社;;血管生成素在柔紅霉素誘導(dǎo)大鼠腎病中的變化及意義[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

4 梁雪;陳幸華;張曦;孔佩艷;彭賢貴;高蕾;曾東風(fēng);孫愛(ài)華;王慶余;;柔紅霉素對(duì)白血病細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡和抑制增殖的實(shí)驗(yàn)研究[A];第11次中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文匯編[C];2007年

5 王菊香;曾煒煒;錢(qián)江潮;周海霞;黃珍;方希敏;徐霞;李原;;左卡尼汀對(duì)柔紅霉素誘導(dǎo)的急性淋巴細(xì)胞白血病患兒血漿N末端腦利鈉肽原的影響[A];第六屆江浙滬兒科學(xué)術(shù)會(huì)議暨兒科學(xué)基礎(chǔ)與臨床研究進(jìn)展學(xué)術(shù)班論文匯編[C];2009年

6 戴永援;陳寶安;王雪梅;張仁云;高峰;丁家華;高沖;孫耘玉;程堅(jiān);趙剛;王駿;;磁性納米四氧化三鐵及納米金協(xié)同柔紅霉素作用K562/A02的初步研究[A];第11次中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文匯編[C];2007年

7 張翔;顧健;張育;馬莉;;白血病多藥耐細(xì)胞內(nèi)柔紅霉素沈度與復(fù)方當(dāng)歸注射液相互作用影響[A];2005年華東六省一市血液病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨浙江省血液病學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2005年

8 胡群;侯燕;劉愛(ài)國(guó);;Survivin在柔紅霉素誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡作用機(jī)制中的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十四次全國(guó)兒科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

9 龔玉萍;楊曦;林娟;周睿卿;郭勇;單卿卿;何光翠;;雷帕霉素聯(lián)合柔紅霉素對(duì)Ph+急性淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株SUP-B15的抗腫瘤效應(yīng)及機(jī)制探討[A];第13屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2011年

10 任艷艷;陳寶安;蔡曉輝;劉苒;吳瑋瑋;夏國(guó)華;王筠;;磁性納米Fe3O4載柔紅霉素及5溴-漢防己甲素荷瘤裸鼠內(nèi)逆轉(zhuǎn)白血病多藥耐藥研究[A];第13屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2011年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前3條

1 孫國(guó)根;茶多酚能顯著提高柔紅霉素的抗癌作用[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2010年

2 上海長(zhǎng)海中醫(yī)醫(yī)院 蘇永華 張遵涌;柔紅霉素在腫瘤治療中的應(yīng)用[N];上海中醫(yī)藥報(bào);2013年

3 記者 吳苡婷;茶多酚是抗癌藥物“好幫手”[N];上�？萍紙�(bào);2010年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前6條

1 劉連碧;柔紅霉素高產(chǎn)菌種選育及其生物轉(zhuǎn)化的研究[D];上海醫(yī)藥工業(yè)研究院;2000年

2 吳大治;柔紅霉素C-14羥化酶基因的克隆、表達(dá)和應(yīng)用研究[D];上海醫(yī)藥工業(yè)研究院;2003年

3 王磊;PI3K/Akt抑制劑和傳統(tǒng)化療藥物對(duì)急性髓系白血病中Eps8的作用及分子機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

4 蔣莎義;Neuregulin和硫酸鋅對(duì)柔紅霉素心臟損害的保護(hù)研究[D];山東大學(xué);2004年

5 王從軍;柔紅霉素對(duì)心肌細(xì)胞BNP表達(dá)的影響及BNP在柔紅霉素心肌病監(jiān)測(cè)中的作用研究[D];華中科技大學(xué);2007年

6 尚珂;柔紅霉素產(chǎn)生菌dnmV基因阻斷突變和功能替換研究[D];上海醫(yī)藥工業(yè)研究院;2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 董洪婧;小劑量全反式維甲酸、三氧化二砷聯(lián)合柔紅霉素治療初發(fā)急性早幼粒細(xì)胞白血病的近期療效觀察[D];泰山醫(yī)學(xué)院;2014年

2 祁冰潔;二甲雙胍聯(lián)合柔紅霉素對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞（SW480）增殖及凋亡的影響[D];貴州醫(yī)科大學(xué);2016年

3 李萍;柔紅霉素治療小兒白血病的心臟毒性臨床分析[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2005年

4 李偉平;工程菌制備表柔紅霉素工藝的研究[D];河南工業(yè)大學(xué);2011年

5 劉陽(yáng);心肌肌球蛋白的提純及與柔紅霉素作用的熒光研究[D];中南民族大學(xué);2007年

6 胡彩蓮;柔紅霉素不同滴注時(shí)間在急性白血病患兒體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)及其對(duì)誘導(dǎo)化療和毒副反應(yīng)的影響[D];蘇州大學(xué);2008年

7 宮倩;柔紅霉素生物合成基因dnrV、dnrX的研究[D];上海醫(yī)藥工業(yè)研究院;2006年

8 孫伊娜;柔紅霉素在白血病患兒體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)及其與療效和毒副反應(yīng)的相關(guān)性研究[D];蘇州大學(xué);2007年

9 呂文旭;光纖化學(xué)傳感器在位過(guò)程監(jiān)測(cè)家兔柔紅霉素和阿霉素血液濃度[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2001年

10 郝晶;柔紅霉素和NVP-BEZ235對(duì)人髓系白血病KG1a細(xì)胞的作用及相關(guān)機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2014年

本文編號(hào)：2583414