【摘要】：背景：依硫磷酸（通用名：氨磷�。┦且环N泛細(xì)胞保護(hù)劑，臨床主要用于腫瘤放療或細(xì)胞毒化療的臟器保護(hù)。基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)依硫磷酸還具有其他作用，包括類造血生長因子、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制細(xì)胞周期進(jìn)程等，然而，這些作用并不能用經(jīng)典的堿性磷酸酶途徑解釋，說明依硫磷酸還有其他作用途徑。我們前期臨床研究發(fā)現(xiàn)，以依硫磷酸為主的聯(lián)合方案治療慢性ITP及MDS患者，獲得血象改善，且ITP患者骨髓巨核細(xì)胞的成熟障礙減輕，但機制并不清楚。我們應(yīng)用生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)依硫磷酸可能具有調(diào)控細(xì)胞分化的作用，本研究擬以人巨核細(xì)胞白血病Dami細(xì)胞系為對象，觀察依硫磷酸促進(jìn)Dami細(xì)胞向成熟巨核細(xì)胞分化的作用，為前期臨床研究提供理論依據(jù)。 方法：生物信息學(xué)預(yù)測依硫磷酸是否具有調(diào)控細(xì)胞分化的作用；細(xì)胞計數(shù)法檢測依硫磷酸對Dami細(xì)胞增殖的影響，，篩選依硫磷酸促進(jìn)Dami細(xì)胞分化的合適濃度；流式細(xì)胞儀檢測CD33、CD34、CD41a的表達(dá)，鑒定Dami細(xì)胞所處的分化階段；Giemsa染色顯示細(xì)胞核，倒置顯微鏡、透射電鏡觀察依硫磷酸（0.1mmol/L處理0、4、8、12天）對Dami細(xì)胞形態(tài)學(xué)的影響；流式細(xì)胞儀檢測DNA倍體化及細(xì)胞膜CD41a、CD33表達(dá)的變化。Q-PCR和Western blot檢測轉(zhuǎn)錄因子GATA-1、Fli-1、NF-E2在mRNA水平及蛋白水平表達(dá)的變化。 結(jié)果：1)生物信息學(xué)預(yù)測發(fā)現(xiàn)依硫磷酸可能調(diào)控細(xì)胞的分化，并得到依硫磷酸促進(jìn)細(xì)胞分化相關(guān)的8個基因；2)本研究發(fā)現(xiàn)低濃度（0.1mmol/L）依硫磷酸能促進(jìn)Dami細(xì)胞向成熟巨核細(xì)胞分化，而高濃度（1mmol/L）則明顯抑制Dami細(xì)胞增殖；3)依硫磷酸（0.1mmol/L）能誘導(dǎo)Dami細(xì)胞由原始巨核細(xì)胞向成熟巨核細(xì)胞分化。表現(xiàn)為依硫磷酸處理第12天，Dami細(xì)胞出現(xiàn)血小板分界膜系統(tǒng)，直徑20μM的細(xì)胞比例較對照增加24.63%，細(xì)胞表面CD41a Mean值增加206.43，CD33表達(dá)陽性率下降13.98%；和對照比，DNA倍體化2N下降20.93%，4N增加15.93%，8N增加8.62%，16N增加3.41%；4）Q-PCR和western blot結(jié)果顯示，巨核細(xì)胞分化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子GATA-1、Fli-1、NF-E2在mRNA水平及蛋白水平表達(dá)沒有升高。 結(jié)論：1)不同濃度依硫磷酸對Dami細(xì)胞作用不同，低濃度（0.1mmol/L）誘導(dǎo)分化，高濃度（1mmol/L）抑制其增殖；2) Dami細(xì)胞分化表現(xiàn)在細(xì)胞體積增大，產(chǎn)生血小板分界膜系統(tǒng)，細(xì)胞CD41a表達(dá)增加，CD33表達(dá)下降，DNA倍體化增加；3）巨核細(xì)胞分化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子GATA-1、Fli-1、NF-E2在mRNA及蛋白水平表達(dá)沒有升高，需要進(jìn)一步研究其轉(zhuǎn)錄活性的變化。
【圖文】：

不同濃度依硫磷酸對Dami細(xì)胞增殖的影響

17 圖 2 依硫磷酸在 0.1mmol/L 水平對 Dami 細(xì)胞表現(xiàn)出誘導(dǎo)分化作用（200×）圖 A、C 為對照組；圖 B、D 分別為依硫磷酸 0.1mmol/L 處理 12 天，Giemsa 染色見胞倍體增加（A、B）；光鏡下見處理組 Dami 細(xì)胞體積增大（C、D）。
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R96

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本文編號：2565968