【摘要】：目的探討新合成吩嗪衍生物抗癌活性及其作用機制。方法 MTT法檢測細胞增殖,吖啶橙/溴乙錠(AO/EB)染色熒光顯微鏡觀察細胞形態(tài),流式細胞儀檢測細胞周期,Annexin V-FITC/7-AAD雙染檢測凋亡,Western blot檢測p53和caspase-3蛋白的表達。結果 pn18、pn23、pc27和pc28四種化合物在體外抑制癌細胞增殖,尤其對人結直腸癌細胞HCT116作用明顯,且呈時間和劑量依賴性。pc28在四種化合物中作用最強,48 h對Hep G2、HCT116和A549細胞半數(shù)抑制濃度(IC50)分別為(6.62±2.69)、(10.83±1.41)和(22.39±4.31)μmol。20μmol化合物作用于HCT116細胞24 h后,細胞密度降低,形態(tài)變圓,細胞內明亮綠色熒光與染色質濃縮相關,死亡細胞呈橙黃色和紅色與細胞膜通透性增加有關;pc28誘導的細胞晚期凋亡比例由0.345%升高至19.7%。20μmol pn18和pc27誘導G0/G1期細胞分別升高17.5%和25.0%,pn23和pc28誘導S期細胞分別升高18.4%和11.0%。pn23和pc28誘導p53表達升高,pc28也能上調并激活caspase-3。結論四種合成的新型吩嗪衍生物在體外能有效抑制多種癌細胞增殖,其作用機制可能與誘導細胞周期阻滯和凋亡相關。
【圖文】：

48htestedbyMTTassay(μmol/L)Cellspn18pn23pc27pc28HCPTPDDHepG220.30±2.5821.47±4.7913.96±2.346.62±2.6917.08±2.180.31±0.14A54934.57±7.0744.24±5.1923.26±4.2822.39±4.310.79±0.26NdHCT11618.48±2.4911.30±2.4612.25±2.3910.83±1.413.54±1.043.53±0.95SW62026.72±3.7510.71±1.5812.54±1.9816.50±3.324.63±1.026.92±2.13Notes:HCPT:hydroxycamptothecine;PDD:cisplatin;Nd:notdoneCellsweretreatedwithdifferentcompoundsatvariousconcentrationsfor24,48or72h;A:pn18;B:pn23;C:pc27;D:pc28圖1化合物對HCT116細胞增殖的影響Figure1EffectofcompoundonproliferationofHCT116cells

nblot實驗中，化合物對凋亡調控關鍵蛋白p53和凋亡執(zhí)行關鍵蛋白caspase-3的表達有不同影響�；衔飌n23和pc28引起p53蛋白表達升高，為對照組的1.23倍（P=0.0312）和1.17倍（P=0.0182），其他兩種化合物對其影響較弱�；衔飌c28對caspase-3的表達及激活有促進作用，，為對照組的1.44倍（P=0.0013）和1.14倍（P=0.0389），其他化合物作用則較弱，見圖5。Cellsweretreatedwithdifferentcompounds(20μmol/L)for24handstainedwithacridineorange/ethidiumbromide(AO/EB);A:controlgroup;B:pn18;C:pn23;D:HCPT;E:pc27;F:pc28圖2熒光顯微鏡下觀察化合物對HCT116細胞形態(tài)的影響Figure2EffectofcompoundonmorphologyofHCT116cellsobservedbyfluorescentmicroscopeCellsweretreatedwithdifferentcompounds(0,10or20μmol/L)for24handanalyzedbyflowcytometry.A:pn18;B:pn23;C:pc27;D:pc28;*:P<0.05comparedwith0μmol/Lcompounds;**:P<0.01comparedwith0μmol/Lcompounds圖3化合物對HCT116細胞周期的影響Figure3EffectofcompoundoncellcycleofHCT116Cellsweretreatedwithdifferentcompounds(20μmol/L)for24handapoptosiswasdetectedbyflowcytometry圖4化合物對HCT116細胞凋亡的影響Figure4EffectofcompoundonapoptosisofHCT116cells


本文編號：2555108