【摘要】：目的越來越多的證據(jù)表明鎘可誘導(dǎo)炎癥，但其機(jī)制尚未明確。本文研究氯化鎘（CdCl2）對RAW264.7細(xì)胞巨噬細(xì)胞炎性蛋白2（MIP-2）和環(huán)氧合酶2（COX-2）表達(dá)的調(diào)控作用，探討PTEN介導(dǎo)的PI3K/Akt信號通路在鎘調(diào)控MIP-2和COX-2表達(dá)中的作用。 方法（1）給予CdCl2（50.0μM）刺激RAW264.7細(xì)胞不同時(shí)間（4和8hr），或給予不同濃度CdCl2（0、6.25、12.5、25.0和50.0μM）刺激RAW264.7細(xì)胞8hr，檢測細(xì)胞因子/趨化因子mRNA表達(dá)。（2）給予不同濃度CdCl2（0、6.25、12.5、25.0和50.0μM）刺激RAW264.7細(xì)胞8hr或給予CdCl2（50.0μM）刺激RAW264.7細(xì)胞不同時(shí)間（1、4和8hr），檢測Akt和pAkt蛋白水平。單純給予CdCl2（50.0μM）刺激RAW264.7細(xì)胞8小時(shí)或選用磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）特異性抑制劑LY294002（50.0μM）進(jìn)行預(yù)處理后給予CdCl2刺激細(xì)胞，檢測Akt、pAkt和COX-2蛋白水平以及Mip-2和Cox-2mRNA水平。（3）給予不同濃度的CdCl2（0、6.25、12.5、25.0和50.0μM）刺激RAW264.7細(xì)胞8hr或給予CdCl2（50.0μM）刺激RAW264.7細(xì)胞不同時(shí)間（1、4和8hr），檢測PTEN蛋白水平。單純給予CdCl2（50.0μM）刺激RAW264.7細(xì)胞8hr或選用蛋白酶體特異性抑制劑MG132（20.0μM）進(jìn)行預(yù)處理后給予CdCl2刺激細(xì)胞，檢測細(xì)胞中Akt、pAkt和PTEN蛋白水平。（4）給予不同濃度CdCl2（0、12.5、25.0和50.0μM）刺激RAW264.7細(xì)胞8hr，檢測PTEN蛋白泛素化水平。（5）選用還原型谷胱甘肽（GSH）前體物N-乙酰半胱氨酸（NAC，4.0mM）或GSH合成抑制劑丁硫氨酸-亞砜亞胺（BSO，1.0mM）進(jìn)行預(yù)處理后給予CdCl2刺激細(xì)胞，檢測細(xì)胞Akt、pAkt和PTEN蛋白水平。（6）選用抗氧化劑N-叔丁基-α-苯基硝酮（PBN，4.0mM）或維生素C（100μM）進(jìn)行預(yù)處理后給予CdCl2刺激細(xì)胞，，檢測Akt、pAkt和PTEN蛋白水平。 結(jié)果（1）CdCl2選擇性誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞Mip-2和Cox-2mRNA表達(dá)。（2）CdCl2能夠明顯提高Akt磷酸化水平，并呈濃度-效應(yīng)和時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系；LY294002抑制CdCl2引起的Akt磷酸化；LY294002顯著抑制CdCl2誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞MIP-2和COX-2上調(diào)。（3）CdCl2處理明顯降低RAW264.7細(xì)胞PTEN蛋白水平。（4）RAW264.7細(xì)胞中CdCl2處理引起PTEN蛋白泛素化，蛋白酶體抑制劑MG132阻斷CdCl2引起的PTEN蛋白降低，提示PTEN蛋白下降與PTEN蛋白泛素化有關(guān)。（5）NAC抑制CdCl2引起的PTEN降解和Akt磷酸化；BSO加劇CdCl2引起的PTEN降解和Akt磷酸化。（6）PBN及維生素C分別對CdCl2引起的PTEN降解和Akt磷酸化無抑制效應(yīng)。 結(jié)論（本研究發(fā)現(xiàn)，鎘顯著提高RAW264.7細(xì)胞MIP-2和COX-2表達(dá)。同時(shí)，我們發(fā)現(xiàn)，鎘上調(diào)RAW264.7細(xì)胞MIP-2和COX-2表達(dá)可能與PI3K/Akt信號激活有關(guān)。此外，蛋白酶體介導(dǎo)的PTEN降解參與鎘激活RAW264.7細(xì)胞PI3K/Akt信號，且GSH耗竭可能是介導(dǎo)鎘引起PTEN降解及其隨后PI3K/Akt信號激活的重要原因。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R99

【參考文獻(xiàn)】

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1 JELENA STOSIC;IVANA MIRKOV;SANDRA BELIJ;MIROSLAV NIKOLIC;ALEKSANDRA POPOV;DRAGAN KATARANOVSKI;MILENA KATARANOVSKI;;Gender Differences in Pulmonary Inflammation Following Systemic Cadmium Administration in Rats[J];Biomedical and Environmental Sciences;2010年04期

本文編號：2550417