【摘要】：目的構(gòu)建人源去甲腎上腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(h NET)穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系,并對細(xì)胞系h NET的結(jié)合和重?cái)z取功能進(jìn)行研究。方法采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將h NET轉(zhuǎn)染于母細(xì)胞-人胚腎(HEK)293細(xì)胞(HEK293-h NET);采用RT-PCR和Western蛋白質(zhì)印跡法在基因和蛋白水平對HEK293-h NET細(xì)胞系進(jìn)行鑒定和穩(wěn)定性驗(yàn)證;采用放射性配基結(jié)合實(shí)驗(yàn)檢測HEK293-h NET的結(jié)合和重?cái)z取功能。并采用三環(huán)類抗抑郁藥地昔帕明(DIM)和5-羥色胺/去甲腎上腺素雙重重?cái)z取抑制劑度洛西汀(DLX),在0~1×10-4mol·L-1濃度梯度范圍繪制藥物與h NET的結(jié)合與重?cái)z取抑制曲線,進(jìn)一步驗(yàn)證HEK293-h NET細(xì)胞系的結(jié)合和重?cái)z取功能。結(jié)果 RT-PCR和Western蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,所建立的HEK293-h NET細(xì)胞系在15代內(nèi)均穩(wěn)定表達(dá)h NET;放射性配基結(jié)合實(shí)驗(yàn)表明,HEK293-h NET細(xì)胞具有內(nèi)源性h NET的結(jié)合和重?cái)z取功能。并且,DIM和DLX與HEK293-h NET細(xì)胞中h NET具有明顯的特異性結(jié)合(Ki值分別為2.45和3.40 nmol·L-1),并可顯著抑制h NET對去甲腎上腺素的重?cái)z取作用(IC50分別為5.78和10.23 nmol·L-1)。結(jié)論成功建立的可穩(wěn)定表達(dá)h NET的HEK293-h NET細(xì)胞系具有內(nèi)源性h NET的結(jié)合和重?cái)z取功能,可用于h NET靶標(biāo)藥物研究。
【作者單位】： 北京工商大學(xué)食品學(xué)院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所;大連市友誼醫(yī)院藥劑科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81274117);國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(30901975) 教師隊(duì)伍建設(shè)-青年英才計(jì)劃(YETP1447) 組織部優(yōu)秀人才計(jì)劃(2013D005003000001)~~
【分類號】：R96

【參考文獻(xiàn)】

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1 武秀麗;李晶潔;;交感風(fēng)暴發(fā)生機(jī)制及治療[J];國際心血管病雜志;2013年04期

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3 李迎;馮航;龔偉;喻芳鄰;謝向陽;何新華;張有志;梅興國;;在線固相萃取-液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定阿姆西汀異構(gòu)體的藥代動(dòng)力學(xué)差異[J];分析化學(xué);2014年12期

4 郭雪梅;南群;翟飛;張會娟;;腎動(dòng)脈交感神經(jīng)消融術(shù)治療頑固性高血壓研究現(xiàn)狀[J];北京生物醫(yī)學(xué)工程;2014年04期

5 王偉民;;腎交感神經(jīng)消融治療難治性高血壓[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2014年06期

6 孫亞京;周岳君;張副興;孫佩娜;潘方舒;;逍遙散抗抑郁作用藥理實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展[J];內(nèi)蒙古中醫(yī)藥;2013年25期

7 朱秀清;李敬來;鄧鳴;熊山;張振清;;大鼠血漿中抗抑郁新藥阿姆西汀濃度檢測方法的建立及其藥代動(dòng)力學(xué)[J];軍事醫(yī)學(xué);2013年11期

8 朱秀清;李敬來;鄧鳴;熊山;張振清;;HPLC-MS/MS法測定抗抑郁新藥阿姆西汀在大鼠體內(nèi)的組織分布[J];解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào);2014年01期

9 邱航;黃晶;查才環(huán);劉映江;鄧昌明;劉地川;;MRI引導(dǎo)高強(qiáng)度聚焦超聲去犬腎交感神經(jīng)化[J];中國介入影像與治療學(xué);2014年06期

10 安磊;李靜;薛瑞;李云峰;仲伯華;李錦;張有志;;阿姆西汀抗抑郁作用的細(xì)胞調(diào)控機(jī)制[J];軍事醫(yī)學(xué);2015年01期

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2 張人昱;新型抗抑郁候選化合物L(fēng)PM570065大鼠藥動(dòng)學(xué)和藥效學(xué)研究初探[D];吉林大學(xué);2014年

3 孟霖;抑郁癥與高血壓的相關(guān)性：隊(duì)列研究的薈萃分析及NET基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化的作用研究[D];吉林大學(xué);2014年

4 李健玲;去腎動(dòng)脈神經(jīng)對SHR腎交感神經(jīng)活性及鈉處理的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2014年

5 秦娟娟;鹽酸羥哌吡酮（YL-0919）的抗抑郁效應(yīng)和機(jī)制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2014年

6 劉丹;涉及抑郁癥的組蛋白乙�；{(diào)控和文拉法辛的干預(yù)作用研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2014年

7 杜秉健;黃花菜水醇提取物的抗抑郁和促睡眠活性及綜合利用研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

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2 王林;;去甲腎上腺素和腎上腺素治療心室顫動(dòng)的比較[J];國外醫(yī)學(xué)(內(nèi)科學(xué)分冊);1992年06期

3 江云香;;如何計(jì)算去甲腎上腺素注射液的藥量[J];中華護(hù)理雜志;1992年02期

4 丁家望 ,楊俊 ,李穩(wěn)慧 ,王興祥 ,馮義柏 ,程龍獻(xiàn);尼古丁對缺血心臟去甲腎上腺素釋放的影響[J];中華心血管病雜志;2003年01期

5 蔡惠文;凝血酶、去甲腎上腺素治療新生兒上消化道出血療效分析[J];中國航天醫(yī)藥雜志;2004年01期

6 王惠君;去甲腎上腺素加凝血酶佐治新生兒上消化道出血的療效觀察[J];護(hù)理研究(上旬版);2005年16期

7 韓京;冉新澤;艾國平;粟永萍;;去甲腎上腺素促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖的研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年23期

8 陳時(shí)行;;人尿中腎上腺素及去甲腎上腺素代謝產(chǎn)物的定性測定方法及臨床意義[J];天津醫(yī)藥雜志;1965年09期

9 Charney DS ,朱悅心;人類焦慮的神經(jīng)生物學(xué)機(jī)制:支持中樞去甲腎上腺素能功能亢進(jìn)的證據(jù)[J];國外醫(yī)學(xué).藥學(xué)分冊;1984年06期

10 黃來運(yùn);去甲腎上腺素在外科出血病人的應(yīng)用[J];中國社區(qū)醫(yī)師;1994年11期

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1 曹平;黃鳳玲;;去甲腎上腺素對蟾蜍心臟的雙重作用[A];湖南省生理科學(xué)學(xué)會2004年度學(xué)術(shù)年會論文摘要匯編[C];2004年

2 王迪芬;;兒茶酚胺的選擇:多巴胺與去甲腎上腺素?[A];中國危重病醫(yī)學(xué)大會-2011暨北京醫(yī)學(xué)會重癥醫(yī)學(xué)年會匯編[C];2011年

3 張燕妮;;口服去甲腎上腺素法院前搶救急性上消化道出血2例報(bào)告[A];中華醫(yī)學(xué)會急診醫(yī)學(xué)學(xué)會第六次全國急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];1996年

4 韓奕;李春盛;;去甲腎上腺素誘導(dǎo)的高血壓灌注對豬心跳驟停復(fù)蘇后肝臟的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會急診醫(yī)學(xué)分會第十三次全國急診醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)年會大會論文集[C];2010年

5 郭禮和;朱麗華;黃芳;張孝勇;費(fèi)儉;;去甲腎上腺素運(yùn)載蛋白的克隆篩選與分析[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會第五次會議論文摘要匯編[C];1992年

6 金濤;;酶聯(lián)免疫法測定血清多巴胺,去甲腎上腺素方法的初步應(yīng)用[A];全國臨床免疫檢驗(yàn)研討會暨第六屆全國臨床免疫學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

7 李淑芳;吳海龍;夏阿林;朱紹華;聶瑾芳;邊英超;劉佳;俞汝勤;;熒光動(dòng)力學(xué)結(jié)合二階校正法定量測定人血漿中的去甲腎上腺素[A];第九屆全國計(jì)算（機(jī)）化學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2007年

8 張建軍;;應(yīng)激對腦內(nèi)去甲腎上腺素的影響[A];中國神經(jīng)科學(xué)學(xué)會第六屆學(xué)術(shù)會議暨學(xué)會成立十周年慶祝大會論文摘要匯編[C];2005年

9 金濤;;酶聯(lián)免疫法測定血清多巴胺,去甲腎上腺素方法的初步應(yīng)用[A];中華醫(yī)學(xué)會第九次全國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議暨中國醫(yī)院協(xié)會臨床檢驗(yàn)管理專業(yè)委員會第六屆全國臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

10 劉婷婷;馬勇;魏偉;;α1腎上腺素受體亞型在肝星狀細(xì)胞中的表達(dá)及去甲腎上腺素對肝星狀細(xì)胞增殖的作用[A];安徽省藥理學(xué)會2012年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2012年

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1 北京軍區(qū)總醫(yī)院主任醫(yī)師 張禹;去甲腎上腺素也可肌注[N];健康報(bào);2001年

2 董天恩;女性的九大優(yōu)勢[N];家庭醫(yī)生報(bào);2007年

3 蒲昭和;寧做百靈鳥 莫當(dāng)夜貓子[N];檢察日報(bào);2000年

4 單曉聲;有些老人過年不能太激動(dòng)[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2009年

5 中華中醫(yī)藥學(xué)會 莊乾竹　(醫(yī)學(xué)博士);熬夜吸煙 危害更大[N];家庭醫(yī)生報(bào);2008年

6 湯鳳;健康活過100歲[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2004年

7 孫浩陽;減少自由基防衰老[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報(bào);2006年

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1 肖榮;去甲腎上腺素對外周細(xì)胞炎性因子表達(dá)的影響[D];南華大學(xué);2007年

2 周晶;多巴胺、去甲腎上腺素對心臟手術(shù)病人圍手術(shù)期腎臟功能、早期預(yù)后影響的比較研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2009年

3 于飛;去甲腎上腺素和腎上腺素對急性重度失血性休克大鼠模型的實(shí)驗(yàn)研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2014年

4 杜晶慧;去甲腎上腺素用于腎移植術(shù)中對患者腎功能的影響[D];吉林大學(xué);2009年

5 喬玉敏;去甲腎上腺素和多巴胺在利多卡因致大鼠驚厥過程中的作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2008年

6 柴寧;去甲腎上腺素促進(jìn)恐懼記憶消退的長期維持[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

7 黃新華;去甲腎上腺素介導(dǎo)的后適應(yīng)對離體大鼠心臟保護(hù)作用的研究[D];中南大學(xué);2008年

8 傅俊杰;合并高血壓的前列腺增生組織中α_1受體亞型以及去甲腎上腺素含量的變化[D];福建醫(yī)科大學(xué);2013年

9 趙倩;重癥手足口病病情相關(guān)因素分析研究及患兒去甲腎上腺素水平測定[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

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本文編號：2545678