發(fā)布時(shí)間：2019-10-02 09:58

【摘要】：潰瘍性結(jié)腸炎(Ulcerative colitis, UC)屬于炎癥性腸病(inflammatory bowel disease, IBD)的一種,其發(fā)病病情輕重不等,多呈現(xiàn)反復(fù)發(fā)作或長(zhǎng)期遷延的慢性過(guò)程,具有主要累及直腸、結(jié)腸黏膜和黏膜下層的慢性非特異性炎癥特征。越來(lái)越多的證據(jù)表明UC的發(fā)病率正逐年增多。根據(jù)病情輕重程度不同,目前對(duì)UC采用不同的治療方法,但是臨床對(duì)UC的治療均還不能真正治愈疾病,僅能在一定程度上緩解相關(guān)癥狀,并常伴隨有副作用,使病人依從性降低。因此,研制有效的抗UC藥物有顯著的必要性。近期研究發(fā)現(xiàn),X-盒結(jié)合蛋白-1 (X-box binding protein-1, XBP1)轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)的缺失或下調(diào)會(huì)促進(jìn)UC的發(fā)生和發(fā)展,XBP1可能成為治療UC潛在的、新的藥物作用靶點(diǎn)。然而,除本課題組之外,目前尚未有其他文獻(xiàn)展開(kāi)基于XBP1靶點(diǎn)的抗UC藥物的研究。黃連堿具有降血糖、抗菌、抗病毒、抗癌、心肌保護(hù)等多種生理活性,黃連堿類似物的抗UC活性也已經(jīng)被證實(shí)。本論文以氯化黃連堿季銨鹽為起始原料,以文獻(xiàn)調(diào)研和課題組前期工作的經(jīng)驗(yàn)為基礎(chǔ),結(jié)合黃連堿的結(jié)構(gòu)與性質(zhì),以改善其穩(wěn)定性、脂溶性,增加其生理活性為目標(biāo),對(duì)黃連堿開(kāi)展了一系列的結(jié)構(gòu)修飾。共設(shè)計(jì)并合成8-亞烴基二氫黃連堿衍生物、N-二氫黃連堿-8-亞基胺類衍生物、8-N,N-二取代胺基黃連堿季銨鹽類衍生物、8-N,N-二取代胺基-13-取代黃連堿季銨鹽類衍生物、8,8-二取代二氫黃連堿衍生物、8,8-二取代四氫黃連堿-7,13a-亞胺鹽衍生物、5,6-二去氫-8,8-二取代-13-羰基四氫黃連堿-7,13a-亞胺鹽衍生物、二氫黃連堿烷基季銨鹽衍生物、13-酰氧基取代黃連堿季銨鹽衍生物和[1,4]二嗯烷并[2',3'：7,8]異喹啉并[3,2-a][1,4]二VA烷并[2,3-g]異喹啉型黃連堿類似物等十類黃連堿衍生物,包括目標(biāo)化合物共計(jì)119個(gè),其中新結(jié)構(gòu)化合物117個(gè),已知化合物2個(gè)。合成的化合物均經(jīng)1H-NMR、13C-NMR、ESIMS分析完成結(jié)構(gòu)鑒定,部分化合物的鑒定還包括NOE、IR、HRESIMS等實(shí)驗(yàn)。本論文對(duì)所合成的119個(gè)目標(biāo)化合物進(jìn)行了抗UC的體外藥理活性測(cè)試并對(duì)部分化合物進(jìn)行了體內(nèi)活性實(shí)驗(yàn)篩選。發(fā)現(xiàn)了以N-二氫黃連堿-8-亞基芳胺衍生物5e-1和N-二氫黃連堿-8-亞基脂肪酰胺衍生物10d為代表的具有抗UC潛力、新結(jié)構(gòu)、新作用靶點(diǎn)的目標(biāo)分子,并對(duì)其進(jìn)行了構(gòu)效關(guān)系的總結(jié)與探討。(1)腸上皮細(xì)胞-6(IEC-6細(xì)胞)存活率實(shí)驗(yàn)顯示：除N-二氫黃連堿-8-亞基脂肪胺類衍生物(烷基碳原子數(shù)大于6)、8-N,N-二取代胺基黃連堿季銨鹽類衍生物、8-N,N-二取代胺基-13-取代黃連堿季銨鹽類衍生物和5,6-二去氫-8,8-二取代-13-羰基四氫黃連堿-7,13a-亞胺鹽衍生物外,其他系列化合物對(duì)IEC-6細(xì)胞均具有較好的細(xì)胞存活率,為進(jìn)一步體內(nèi)抗UC活性實(shí)驗(yàn)提供了很好的基礎(chǔ)。(2)對(duì)在IEC-6細(xì)胞上未顯示出明顯細(xì)胞毒性的化合物進(jìn)行了XBP1激活活性評(píng)價(jià),結(jié)果顯示：N-二氫黃連堿-8-亞基芳香胺類衍生物、N-二氫黃連堿-8-亞基脂肪酰胺類衍生物、二氫黃連堿烷基季銨鹽衍生物和[1,4]二VA烷并[2',3'：7,8]異喹啉并[3,2-a][1,4]二VA烷并[2,3-g]異喹啉型二氫黃連堿類似物中部分化合物顯示較好的XBP1激活活性,一些化合物對(duì)XBP1基因啟動(dòng)子的轉(zhuǎn)錄激活活性達(dá)對(duì)照組的2.11～3.75倍。(3)對(duì)顯示較好XBP1激活效應(yīng)的部分化合物進(jìn)行了濃度依賴測(cè)試。部分化合物表現(xiàn)出較好的體外活性,化合物5e-1、10d、5r-2、21的EC50值分別為13.2nM,32.5 nM,11.4 nM和36.3 nM。(4)初步的抗UC動(dòng)物體內(nèi)藥效實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：化合物5e-1、10d、10j、18a和21均表現(xiàn)出一定的體內(nèi)活性。綜合化合物對(duì)DSS誘導(dǎo)C57b1/6j小鼠UC模型動(dòng)物體重和結(jié)腸攣縮的影響,結(jié)合DAI和CMDI等多項(xiàng)指標(biāo)綜合評(píng)價(jià),化合物5e-1的活性明顯優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照藥SASP;化合物10d、10j、18a和21的體內(nèi)抗UC活性稍差于5e-1但與陽(yáng)性藥SASP作用相當(dāng)。對(duì)所合成的部分目標(biāo)分子進(jìn)行了體外腫瘤細(xì)胞株生長(zhǎng)抑制活性篩選,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：與陽(yáng)性藥紫杉醇相比較,大部分化合物對(duì)HCT116、HT29、MCF7和MDAMB231腫瘤細(xì)胞株具有較弱的體外生長(zhǎng)抑制活性,只有極少數(shù)化合物能達(dá)到甚至超過(guò)紫杉醇的抑制率。對(duì)抑制率較好的目標(biāo)物進(jìn)行了濃度依賴試驗(yàn)并計(jì)算了IC50值,同時(shí)評(píng)價(jià)了對(duì)IEC-6細(xì)胞的細(xì)胞毒性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：部分化合物不僅具有較好的腫瘤細(xì)胞株生長(zhǎng)抑制活性,同時(shí)對(duì)IEC-6細(xì)胞顯示較好的存活率；化合物8g對(duì)HCT116細(xì)胞株的IC50值為8.89×10-6 mol/L,對(duì)HT29細(xì)胞株的IC50值為0.81×10-6 mol/L,而IEC-6細(xì)胞存活率為81.3%；化合物9b-1對(duì)HCT116細(xì)胞株的IC50值為3.15×10-6 mol/L,對(duì)HT29細(xì)胞株的IC50值為6.65×10-6 mol/L,而IEC-6細(xì)胞存活率為92%。論文研究結(jié)果為黃連堿類似物的創(chuàng)新藥物研究提供了科學(xué)依據(jù)。
【圖文】：

８ｅ、８ｇ、９ｂ－ｌ、９ｄ－ｌ、９ｅ－ｌ、９ｅ￣２和９ｇ之外），不適合進(jìn)一步的抗ＵＣ篩選；Ｗ－逡逑二氨黃連堿－８－亞基脂肪憸胺類衍生物均具有良好的［ＥＣ－６細(xì)胞存活率；從圖中逡逑４．１－Ｃ可見(jiàn)，除５，６－二去氨二取代－１３－叛基四氨黃連堿－７，１３ａ－亞胺鹽衍生物外，逡逑均具有較好的W'Ｃ－６細(xì)胞存活率。逡逑

８ｅ、８ｇ、９ｂ－ｌ、９ｄ－ｌ、９ｅ－ｌ、９ｅ￣２和９ｇ之外），不適合進(jìn)一步的抗ＵＣ篩選；Ｗ－逡逑二氨黃連堿－８－亞基脂肪憸胺類衍生物均具有良好的［ＥＣ－６細(xì)胞存活率；從圖中逡逑４．１－Ｃ可見(jiàn)，除５，，６－二去氨二取代－１３－叛基四氨黃連堿－７，１３ａ－亞胺鹽衍生物外，逡逑均具有較好的W'Ｃ－６細(xì)胞存活率。逡逑
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R914


本文編號(hào)：2544874