【摘要】：目的探討硫化氫對(duì)HepG2細(xì)胞ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1(ABCA1)蛋白及載脂蛋白形成的影響。方法將硫化氫供體硫氫化鈉(NaHS)以不同濃度(25、50、100、200及400μmol/L)處理HepG2細(xì)胞24h后,采用MTT法檢測(cè)NaHS對(duì)HepG2細(xì)胞細(xì)胞存活率的影響;HepG2細(xì)胞以100μmol/LNaHS處理4、12及24h,實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)NaHS對(duì)HepG2細(xì)胞ABCA1及載脂蛋白A1(ApoA1)、載脂蛋白A2(ApoA2)mRNA的影響,Westernblot檢測(cè)NaHS對(duì)ABCA1、ApoA1及ApoA2蛋白的影響。結(jié)果 MTT結(jié)果顯示,除400μmol/L以外,25、50、100及200μmol/LNaHS對(duì)HepG2細(xì)胞的生長(zhǎng)無(wú)抑制作用;Westernblot量效結(jié)果顯示,NaHS呈濃度依賴(lài)性地上調(diào)ABCA1蛋白的表達(dá);時(shí)效結(jié)果顯示,100μmol/LNaHS作用4、12及24h,均能上調(diào)ABCA1表達(dá)及促進(jìn)培養(yǎng)上清ApoA1、ApoA2的分泌,但不具時(shí)間依賴(lài)性;實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果顯示,ABCA1、ApoA1及ApoA2的mRNA均增加,其變化與蛋白表達(dá)變化一致。結(jié)論硫化氫可以促進(jìn)HepG2細(xì)胞ABCA1表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)載脂蛋白形成。
【圖文】：

T-3';β-actin上游引物5'-GGCTATGCTCTCCCTCACG-3'，下游引物5'-CGCTCGGTCAGGATCTTCAT-3'。定量PCＲ反應(yīng)條件為:95℃預(yù)變性7min，1個(gè)循環(huán)，95℃10s，60℃30s，40循環(huán)，溶解曲線分析:60℃1s，98℃1s，每秒0.2℃。采用2－ΔΔCt法處理數(shù)據(jù)。1.8統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)以x±s表示，均數(shù)間比較用單因素方差分析，兩兩比較用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1NaHS對(duì)HepG2細(xì)胞存活率的影響使用不同劑量的NaHS處理HepG2細(xì)胞24h后，除400μmol/LNaHS對(duì)HepG2細(xì)胞有抑制作用外，其余各劑量對(duì)HepG2細(xì)胞無(wú)抑制作用(圖1)。圖1．硫氫化鈉對(duì)HepG2細(xì)胞存活率的影響a為P＜0.05，與對(duì)照組比較。Figure1．EffectsofNaHSonviabilityofHepG2cells2.2NaHS促進(jìn)HepG2細(xì)胞ABCA1轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)HepG2細(xì)胞ABCA1蛋白表達(dá)呈濃度依賴(lài)性增加(圖2)，綜合考慮NaHS對(duì)HepG2細(xì)胞存活率的影響，選擇100μmol/LNaHS處理HepG2細(xì)胞。100μmol/LNaHS處理HepG2細(xì)胞4h、12h及24h，與對(duì)照組相比，ABCA1mＲNA和蛋白表達(dá)的水平顯著上調(diào)(P＜0.05;圖3和4)。圖2．不同濃度硫氫化鈉對(duì)HepG2細(xì)胞ABCA1表達(dá)的影響a為P＜0.05，b為P＜0.01，與對(duì)照組比較。Figure2．EffectsofNaHSontheexpressionofABCA1indifferentdoseinHepG2cells圖3．硫氫化鈉處理不同時(shí)間對(duì)HepG2細(xì)胞ABCA1mＲ-NA表達(dá)的影響a為P＜0.05，與對(duì)照組比較。Figure3．EffectsofNaHSontheexpressionofABCA1mＲ-NAindifferenttimeinHepG2cells2.3NaHS促進(jìn)HepG2細(xì)胞ApoA1、ApoA2mＲNA和蛋白表達(dá)與對(duì)照組相比，100μmol/LNaHS處理4h、12h和24h后，ApoA1和ApoA2的mＲNA表達(dá)顯著上CN43-1262/Ｒ中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志2015年第23卷第4期327

�。采�?－ΔΔCt法處理數(shù)據(jù)。1.8統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)以x±s表示，均數(shù)間比較用單因素方差分析，兩兩比較用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2.1NaHS對(duì)HepG2細(xì)胞存活率的影響使用不同劑量的NaHS處理HepG2細(xì)胞24h后，除400μmol/LNaHS對(duì)HepG2細(xì)胞有抑制作用外，其余各劑量對(duì)HepG2細(xì)胞無(wú)抑制作用(圖1)。圖1．硫氫化鈉對(duì)HepG2細(xì)胞存活率的影響a為P＜0.05，與對(duì)照組比較。Figure1．EffectsofNaHSonviabilityofHepG2cells2.2NaHS促進(jìn)HepG2細(xì)胞ABCA1轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)HepG2細(xì)胞ABCA1蛋白表達(dá)呈濃度依賴(lài)性增加(圖2)，綜合考慮NaHS對(duì)HepG2細(xì)胞存活率的影響，選擇100μmol/LNaHS處理HepG2細(xì)胞。100μmol/LNaHS處理HepG2細(xì)胞4h、12h及24h，與對(duì)照組相比，ABCA1mＲNA和蛋白表達(dá)的水平顯著上調(diào)(P＜0.05;圖3和4)。圖2．不同濃度硫氫化鈉對(duì)HepG2細(xì)胞ABCA1表達(dá)的影響a為P＜0.05，，b為P＜0.01，與對(duì)照組比較。Figure2．EffectsofNaHSontheexpressionofABCA1indifferentdoseinHepG2cells圖3．硫氫化鈉處理不同時(shí)間對(duì)HepG2細(xì)胞ABCA1mＲ-NA表達(dá)的影響a為P＜0.05，與對(duì)照組比較。Figure3．EffectsofNaHSontheexpressionofABCA1mＲ-NAindifferenttimeinHepG2cells2.3NaHS促進(jìn)HepG2細(xì)胞ApoA1、ApoA2mＲNA和蛋白表達(dá)與對(duì)照組相比，100μmol/LNaHS處理4h、12h和24h后，ApoA1和ApoA2的mＲNA表達(dá)顯著上CN43-1262/Ｒ中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志2015年第23卷第4期327
【作者單位】： 中山大學(xué)藥學(xué)院藥理與毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)室;復(fù)旦大學(xué)藥學(xué)院藥理學(xué)教研室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助(81173056)
【分類(lèi)號(hào)】：R96

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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6 胡曉e

本文編號(hào)：2517728