【摘要】：為建立多藥耐藥相關蛋白2(MRP2)和P-糖蛋白(P-gp)的體外RNA干擾模型,應用化學合成的si RNA轉染Hep G2細胞,并用實時PCR和Western blot檢測m RNA和蛋白的表達變化,應用MRP2和P-gp底物羅丹明和甲氨蝶呤進行功能評價確定模型是否成功。si RNA篩選結果顯示,MRP2 si RNA-3或P-gp si RNA-2能夠顯著地抑制MRP2或P-gp的m RNA表達,抑制率分別為68%和84%;MRP2 si RNA-3或P-gp si RNA-2(80 nmol·L-1)作用48 h能夠明顯地抑制MRP2或P-gp的蛋白表達,抑制率分別為62%和70%,同時不影響其他轉運蛋白的表達;給予MRP2或P-gp底物甲氨蝶呤或羅丹明孵育,發(fā)現(xiàn)MRP2 si RNA-3或P-gp si RNA-2(80 nmol·L-1)作用48 h能夠顯著增加甲氨蝶呤或羅丹明的細胞內(nèi)濃度,表明其外排受到抑制。以上結果表明利用化學合成的si RNA能夠顯著地抑制細胞MRP2和P-gp的表達和功能,提示細胞干擾模型建立成功。
[Abstract]:In order to establish an in vitro RNA interference model of multidrug resistance-related protein 2 (MRP2) and P-glycoprotein (P-gp), Hep G2 cells were transfected with chemically synthesized si RNA, and the expression of m-RNA and protein was detected by real-time PCR and Western blot. The functional evaluation of rhodamine and methotrexate using MRP2 and P-gp was used to determine whether the model was successful. The results showed that the expression of MRP2 or P-gp was inhibited by MRP2 si RNA-3 or P-gp si RNA-2, and the inhibition rate was 68% and 84%, respectively. The expression of MRP2 or P-gp was inhibited by MRP2 si RNA-3 or P-gp si RNA-2 (80 nmol 路 L-1). The inhibition rate was 62% and 70%, respectively. At the same time, the expression of other transporters was not affected; either the MRP2 or P-gp substrate methotrexate or rhodamine was given, and it was found that MRP2 si RNA-3 or P-gp si RNA-2 (80 nmol 路 L-1) could significantly increase the intracellular concentration of methotrexate or rhodamine, indicating that its efflux was inhibited. The results showed that the expression and function of the cell MRP2 and P-gp were significantly inhibited by the chemical synthesis of si RNA, suggesting that the cell interference model was successfully established.
【作者單位】： 北京毒物藥物研究所抗毒藥和毒理學國家重點實驗室;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(81302760) 中國博士后基金資助項目(2013M542510) 國家“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項資助項目(2008ZXJ09006001,2012ZX09301003-001)
【分類號】：R963

【參考文獻】

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本文編號：2505206