【摘要】：膠質瘤是一種常見且高致死率的原發(fā)性腦腫瘤,在小孩和成人中皆可發(fā)生。膠質瘤患者經過標準治療后,中位生存期只有13-16個月,并且超過70%的膠質瘤患者在確診后的2年內死亡。為了提高膠質瘤治療的有效性及改善膠質瘤患者的存活狀況,開發(fā)出新的安全有效的治療藥物顯得尤為重要。N25(注:N25化學名:N-(2,5-二甲氧基苯基)-N`-羥基辛二酰胺,專利授權號:ZL201310087797.9),一種新型的組蛋白去乙�；敢种苿�,我們在SAHA的基礎上進行構效修飾而獲得。細胞自噬,又稱Ⅱ型細胞死亡,是指細胞將自生胞漿蛋白或細胞器包裹形成囊泡,并與溶酶體融合形成自噬溶酶體進而降解自身成分的過程。細胞自噬在腫瘤中發(fā)揮著重要作用,其與腫瘤的關系十分復雜,目前尚未完全闡明。為了研究N25的抗腫瘤作用及其誘導膠質瘤細胞自噬的分子機制,我們進行了系列相關實驗。首先,我們使用CCK-8法檢測了N25的體外抗增殖活性,并通過建立裸鼠膠質瘤移植模型評價N25的體內抗腫瘤作用;然后,我們通過透射電子顯微鏡觀察了N25是否誘導膠質瘤細胞自噬;此外,我們隨機收集了20例臨床膠質瘤樣本及3例正常腦組織,通過western blot分析了臨床膠質瘤樣本中LC3,HDAC3,Tip60等蛋白的表達情況;最后,我們用western blot分析了N25對膠質瘤細胞中HDAC3,Tip60,ULK1(Atg1),Beclin-1(Atg6)等蛋白的影響,并檢測了選擇性HDAC3抑制劑RGFP966是否誘導膠質瘤細胞自噬。我們的研究結果顯示,N25的體外抗增殖活性略強于SAHA,通過計算得出N25與SAHA的IC50分別為2.55μM和3.58μM,并且從繪制的生長抑制曲線可以發(fā)現(xiàn),在相對較低濃度范圍內,N25較SAHA能夠更顯著地抑制膠質瘤U87細胞的生長;在膠質瘤移植模型中也發(fā)現(xiàn),N25具有顯著的體內抗腫瘤活性且略強于SAHA,其中,N25高劑量組(96 mg/kg)對膠質瘤移植模型的抑瘤率約為68%。在透射電子顯微鏡的觀察中,我們發(fā)現(xiàn)N25(5μM)可以明顯誘導膠質瘤細胞自噬體的產生。在對臨床膠質瘤樣本的分析中,我們發(fā)現(xiàn),與正常腦組織相比,HDAC3是明顯上調的,而LC3與Tip60是明顯下調的。當我們用N25處理膠質瘤細胞后,發(fā)現(xiàn)HDAC3明顯受到抑制,而LC3與Tip60明顯增加。此外,我們也發(fā)現(xiàn)N25明顯誘導膠質瘤細胞中ULK1(Atg1),Beclin-1(Atg6)等自噬相關蛋白的表達,并且發(fā)現(xiàn)選擇性HDAC3抑制劑RGFP966也可明顯誘導膠質瘤細胞自噬。總之,這些數(shù)據(jù)表明N25具有顯著的抗腫瘤活性,且部分原因可能與HDAC3的抑制有關;此外,N25可能通過一條新的通路誘導膠質瘤細胞自噬,即N25通過下調HDAC3,激活Tip60,進而刺激ULK1和Beclin-1而誘導膠質瘤細胞自噬。
[Abstract]:Glioma is a common and lethal primary brain tumor, which can occur in both children and adults. After standard treatment, the median survival time of glioma patients was only 13 脳 16 months, and more than 70% of glioma patients died within 2 years after diagnosis. In order to improve the efficacy of glioma treatment and improve the survival of glioma patients, it is particularly important to develop new safe and effective therapeutic drugs. N25 (N25 chemical name: N25 (2, 5-dimethoxyphenyl)-N`hydroxyoctanediamide, patent authorization number: ZL201310087797.9), a new histone deacetylase inhibitor, we obtained on the basis of SAHA structure-activity modification. Autophagy, also known as type II cell death, refers to the process in which cells encapsulate authigenic cytoplasmic proteins or organelle to form vesicles and fuse with lysosomes to form autophagy lysosomes and then degrade their own components. Autophagy plays an important role in tumor, and the relationship between autophagy and tumor is very complex, which has not been fully clarified at present. In order to study the antitumor effect of N25 and the molecular mechanism of inducing autophagy of glioma cells, we carried out a series of related experiments. First, we detected the anti-proliferation activity of N25 in vitro by CCK-8 assay, and evaluated the antitumor effect of N25 in vivo by establishing a nude mice glioma transplantation model. Then, we observed whether N25 induced autophagy of glioma cells by transmission electron microscope. In addition, 20 clinical glioma samples and 3 normal brain tissues were randomly collected, and the expression of LC3,HDAC3,Tip60 and other proteins in clinical glioma samples was analyzed by western blot. Finally, we analyzed the effect of N25 on HDAC3,Tip60,ULK1 (Atg1), Beclin-1 (Atg6) and other proteins in glioma cells by western blot, and detected whether RGFP966, a selective HDAC3 inhibitor, induced autophagy of glioma cells. Our results show that the anti-proliferation activity of N25 in vitro is slightly stronger than that of SAHA,. The IC50 of N25 and SAHA are 2.55 渭 M and 3.58 渭 M, respectively. From the drawn growth inhibition curve, it can be found that N25 can inhibit the growth of glioma U87 cells more significantly than SAHA in a relatively low concentration range. It was also found that N25 had significant antitumor activity in vivo and was slightly stronger than SAHA, in glioma transplantation model. The tumor inhibition rate of N25 high dose group (96 mg/kg) was about 68%. In the observation of transmission electron microscope, we found that N25 (5 渭 M) could obviously induce the production of autophagy in glioma cells. In the analysis of clinical glioma samples, we found that compared with normal brain tissue, HDAC3 was significantly up-regulated, while LC3 and Tip60 were significantly down-regulated. When we treated glioma cells with N25, it was found that HDAC3 was significantly inhibited, while LC3 and Tip60 were significantly increased. In addition, we also found that N25 significantly induced the expression of ULK1 (Atg1), Beclin-1 (Atg6) and other autophagy related proteins in glioma cells, and found that selective HDAC3 inhibitor RGFP966 could also induce autophagy in glioma cells. In conclusion, these data suggest that N25 has significant antitumor activity, and some of the reasons may be related to the inhibition of HDAC3. In addition, N25 may induce autophagy of glioma cells through a new pathway, that is, N25 can induce autophagy of glioma cells by down-regulating HDAC3, to activate Tip60, and stimulating ULK1 and Beclin-1.
【學位授予單位】：廣東藥科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R96

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 周志華;易良;卞修武;;膠質瘤干細胞研究進展[J];中華病理學雜志;2007年03期

2 徐俊杰;于洪泉;國巍;趙偉;金宏;溫娜;齊玲;;西蘭花多肽對大鼠C6膠質瘤細胞生長的影響[J];中風與神經疾病雜志;2012年11期

3 徐俊杰;于洪泉;趙偉;金宏;溫娜;齊玲;劉興吉;;西蘭花多肽對C6膠質瘤細胞的誘導凋亡作用[J];吉林大學學報(醫(yī)學版);2013年01期

4 仝海波,江澄川,唐鎮(zhèn)生,金一尊;膠質瘤細胞化學增敏作用實驗研究[J];山西臨床醫(yī)藥;2000年07期

5 李嗍,王楓,繆珊,駱文靜;過量鋅對鼠膠質瘤細胞體外生長的影響[J];解放軍預防醫(yī)學雜志;2001年04期

6 梁一鳴,郭國慶,鄭少俊,沈偉哉;膠質瘤血管內皮生長因子表達的調節(jié)[J];臨床與實驗病理學雜志;2001年02期

7 曲元明,韓韜,李桂林,王成偉;血管內皮細胞生長因子抗體對膠質瘤生長的影響[J];山東醫(yī)科大學學報;2001年02期

8 黃強,董軍;膠質瘤的分子外科治療[J];中國微侵襲神經外科雜志;2001年04期

9 葉明,周岱,周幽心,王瑋,傅建新,黃煜倫;血管內皮生長因子在膠質瘤中的表達[J];腫瘤;2002年06期

10 顧宇翔,陳銜城,王宇倩;膠質瘤對親細胞非均質分子脂質和幾種藥物敏感性的比較[J];復旦學報(醫(yī)學版);2003年02期

相關會議論文 前10條

1 李飛;李梅;盧佳友;朱剛;林江凱;孟輝;吳南;陳志;馮華;;脂質微區(qū)干擾劑甲基-β-環(huán)糊精影響C6膠質瘤細胞侵襲和遷移的體外實驗研究[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經外科醫(yī)師分會第四屆全國代表大會論文匯編[C];2009年

2 吳安華;王運杰;Ohlfest JR;Wei Chen;Low WC;;膠質瘤的生物治療-從實驗室到臨床[A];中華醫(yī)學會神經外科學分會第九次學術會議論文匯編[C];2010年

3 徐宏;韓楊云;孫中書;李新軍;;與膠質瘤代謝通路相關的候選基因篩選[A];中華醫(yī)學會神經外科學分會第九次學術會議論文匯編[C];2010年

4 潘冬生;;多基因修飾膠質瘤細胞疫苗的抗腫瘤免疫反應[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經外科醫(yī)師分會第六屆全國代表大會論文匯編[C];2011年

5 俞文華;車志豪;張祖勇;許培源;陸鏞民;傅林;朱強;陳鋒;杜權;;骨橋蛋白在膠質瘤細胞中的表達及其信號傳導途徑[A];2005年浙江省神經外科學術會議論文匯編[C];2005年

6 張震;徐克;;低強度超聲誘導C6膠質瘤細胞凋亡的體外實驗研究[A];中華醫(yī)學會第十三次全國超聲醫(yī)學學術會議論文匯編[C];2013年

7 蔣偉峰;高方友;尹浩;;白細胞介素-17及其受體在膠質瘤中的表達及臨床意義[A];2013年貴州省神經外科年會論文集[C];2013年

8 徐慶生;張小兵;周永慶;;膠質瘤干細胞及其放療敏感性[A];2011年浙江省神經外科學學術年會論文匯編[C];2011年

9 楊孔賓;趙世光;劉炳學;陳曉豐;戴欽舜;;K~+通道阻斷劑四乙胺對大鼠膠質瘤細胞的增殖和凋亡影響[A];中國醫(yī)師協(xié)會神經外科醫(yī)師分會第四屆全國代表大會論文匯編[C];2009年

10 黃強;;膠質瘤生成細胞研究[A];第三屆中國腫瘤學術大會教育論文集[C];2004年

相關重要報紙文章 前10條

1 衣曉峰　馮宇曦;中藥三氧化二砷有望成為治療膠質瘤新藥[N];中國醫(yī)藥報;2011年

2 記者 匡遠深;讓膠質瘤干細胞不再“繁殖”[N];健康報;2011年

3 記者 張建琛 通訊員 李靜;我科學家發(fā)現(xiàn)細胞自噬密碼[N];科技日報;2012年

4 記者 佘崢　通訊員 李靜;廈大一研究成果今日登上美《科學》雜志[N];廈門日報;2012年

5 張獻懷　張文;瘤區(qū)埋雷 持續(xù)殺傷[N];健康報;2007年

6 ;細胞自噬的奧秘被發(fā)現(xiàn)[N];農村醫(yī)藥報（漢）;2007年

7 小亦;日發(fā)現(xiàn)細胞自噬奧秘[N];中國醫(yī)藥報;2007年

8 記者 錢錚;細胞自噬作用有“油門”“剎車”[N];新華每日電訊;2009年

9 白毅;人腦膠質瘤基礎與應用研究喜結“九大碩果”[N];中國醫(yī)藥報;2006年

10 常麗君;英發(fā)現(xiàn)控制細胞自噬過程分子開關[N];科技日報;2012年

相關博士學位論文 前10條

1 董軍;CUL4B在神經膠質細胞瘤中的作用研究[D];山東大學;2015年

2 張睿;循環(huán)miR-221/222在膠質瘤診斷與預后中的價值與基于CED的中樞神經系統(tǒng)給藥新方法的研究[D];山東大學;2015年

3 許森林;ALDH1A1在膠質瘤侵襲和結直腸癌轉移中的作用和機制[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

4 王嘯;靶向嵌段共聚物膠束在膠質瘤磁共振成像、藥物輸送及治療的應用[D];安徽醫(yī)科大學;2015年

5 廖紅展;鋅指轉錄因子SNAI2在miR-203的影響下通過上皮間質轉化參與膠質瘤耐藥機制的調節(jié)[D];南方醫(yī)科大學;2015年

6 潘俊;IRG1促進膠質瘤增殖的作用機制及臨床意義[D];南方醫(yī)科大學;2015年

7 鄭傳宜;膠質瘤中GLUT3基因異常表達的意義及其相關調控機制[D];南方醫(yī)科大學;2015年

8 徐紅超;氬氦冷凍消融聯(lián)合GM-CSF治療膠質瘤小鼠的療效及其對小鼠脾臟樹突狀細胞免疫功能影響[D];南方醫(yī)科大學;2015年

9 黃素寧;TNFRSF6B在膠質瘤中的表達及對膠質瘤細胞增殖及凋亡的作用研究[D];南方醫(yī)科大學;2015年

10 熊偉;GBE1在人腦膠質細胞瘤中的表達及干預實驗研究[D];第四軍醫(yī)大學;2015年

相關碩士學位論文 前10條

1 丁玲玲;黃芩素促進膠質瘤細胞自噬和凋亡及相關機制研究[D];青島大學;2017年

2 張大慶;單核細胞趨化蛋白-1在骨髓間充質干細胞向膠質瘤細胞趨化中的作用研究[D];大連醫(yī)科大學;2012年

3 黃俊龍;ADC值與膠質瘤Ki-67、MGMT的相關性研究[D];福建醫(yī)科大學;2015年

4 李明聰;下調Pygo2對U251及U251起源的膠質瘤干細胞生物學特性的影響[D];福建醫(yī)科大學;2015年

5 徐云峰;膠質瘤干細胞的3D培養(yǎng)及其核酸適體篩選的探索[D];福建醫(yī)科大學;2015年

6 張靜文;T細胞過繼免疫治療小鼠腦膠質瘤原位模型的研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

7 洪宇;膠質瘤瘤周水腫、病理級別、Ki-67表達三者相關性研究[D];石河子大學;2015年

8 姬云翔;磷酸化Cx43蛋白在人膠質瘤細胞中表達及其與腫瘤細胞增殖相關性研究[D];石河子大學;2015年

9 朱峰;OPN的異常表達與膠質瘤的相關性研究[D];河北醫(yī)科大學;2015年

10 劉兵;SENP1表達水平對人腦膠質瘤發(fā)生發(fā)展的作用機制及其相關性[D];河北醫(yī)科大學;2015年

，

本文編號：2501225