【摘要】：目的：基于血管緊張素ⅡⅠ型（AT1）受體和過氧化物酶增殖激活物受體γ（PPARγ）在抗氧化應(yīng)激和神經(jīng)保護(hù)中的重要作用，我們選擇性修飾替米沙坦分子中聯(lián)苯羧酸結(jié)構(gòu)單元，獲得新結(jié)構(gòu)的候選化合物Tek-1。本論文采用分子藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)證明Tek-1同時(shí)為AT1受體阻斷劑和PPARγ激動(dòng)劑，具有雙重靶點(diǎn)的受體藥理學(xué)特性；體內(nèi)評(píng)價(jià)Tek-1對(duì)β-淀粉樣蛋白（β-amyloid, Aβ）誘導(dǎo)的小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響，并對(duì)Tek-1參與神經(jīng)炎癥反應(yīng)的小膠質(zhì)細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)作用及其分子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制進(jìn)行研究，以期發(fā)現(xiàn)更優(yōu)的PPARγ激動(dòng)活性的AT1受體拮抗劑。 方法：首先采用放射性受體配體結(jié)合實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞內(nèi)鈣離子流動(dòng)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)及報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)評(píng)價(jià)Tek-1對(duì)AT1受體的親和力、拮抗活性及對(duì)PPARγ的激動(dòng)活性；其次在C57BL/6J小鼠側(cè)腦室注射寡聚態(tài)Aβ1-42建立的模擬阿爾茨海默�。ˋlzheimer's disease，AD）病理改變的小鼠模型上，連續(xù)給予替米沙坦（1、3mg/kg）和Tek-1（1、3、10mg/kg）4周，采用Morris水迷宮及新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)觀察替米沙坦和Tek-1對(duì)AD樣模型小鼠空間及非空間學(xué)習(xí)記憶能力的影響，并采用ELISA的方法檢測(cè)腦內(nèi)白介素-6（IL-6）和單核細(xì)胞趨化因子（MCP-1）的含量；最后，，建立細(xì)菌脂多糖（LPS）誘導(dǎo)的BV-2小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥模型，采用0.1-10μM的替米沙坦、Tek-1與小膠質(zhì)細(xì)胞單獨(dú)孵育，或替米沙坦、Tek-1與PPARγ特異性拮抗劑GW9662共同孵育，用ELISA的方法檢測(cè)替米沙坦和Tek-1對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞釋放的腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的影響，用實(shí)時(shí)定量PCR的方法檢測(cè)替米沙坦和Tek-1對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物CD11b、巨噬細(xì)胞標(biāo)記物CD16和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）的mRNA水平表達(dá)的影響；通過Western Blot的方法檢測(cè)替米沙坦和Tek-1對(duì)LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)絲裂原活化蛋白激酶（MAPKs）信號(hào)通路和核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響。 結(jié)果：放射配體結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Tek-1對(duì)AT1受體均具有較高的親和力，其競(jìng)爭(zhēng)抑制常數(shù)Ki值分別為1.1×10-9M；在細(xì)胞內(nèi)鈣離子檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中，Tek-1抑制AT1受體激動(dòng)劑ANGⅡ激動(dòng)效應(yīng)的IC50值分別為1.02nM，提示Tek-1是AT1受體的阻斷劑；在PPARγ報(bào)告基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中，在0.1-10μM濃度范圍內(nèi)，Tek-1能濃度依賴的顯著激活PPARγ，但激動(dòng)效應(yīng)顯著低于PPARγ完全激動(dòng)劑羅格列酮，提示Tek-1為PPARγ的部分激動(dòng)劑。 分別灌胃給予替米沙坦（1、3mg/kg）和Tek-1（1、3、10mg/kg）均能顯著改善AD樣模型小鼠非空間記憶能力。ELISA結(jié)果顯示，1mg/kg替米沙坦和1、3、10mg/kg Tek-1能顯著減少腦內(nèi)促炎因子IL-6的表達(dá)（P值均為P0.001），1mg/kg替米沙坦和1、3mg/kg Tek-1能顯著減少腦內(nèi)趨化因子MCP-1的表達(dá)。 在LPS誘導(dǎo)的BV-2小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥模型中，0.1-10μM替米沙坦和10μMTek-1能顯著抑制小膠質(zhì)細(xì)胞釋放TNF-α（P0.001和P0.05）；實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果表明，10μM替米沙坦和1、10μM Tek-1均能顯著抑制CD11b、CD16和iNOS基因水平表達(dá)，PPARγ特異性拮抗劑GW9662能夠部分逆轉(zhuǎn)替米沙坦和Tek-1的上述作用，提示其改善炎癥反應(yīng)的作用與部分激活PPARγ，進(jìn)而抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的激活和炎性介質(zhì)的釋放相關(guān)；Western Blot結(jié)果顯示，0.1-10μM替米沙坦和0.1、1μM Tek-1能抑制LPS誘導(dǎo)的BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞激活后引起的ERK、JNK和p38MAPK磷酸化水平升高以及IκB-α蛋白的降解和細(xì)胞核NF-κB蛋白的升高，PPARγ拮抗劑GW9662能部分拮抗替米沙坦和Tek-1的上述作用。 結(jié)論：1、Tek-1對(duì)AT1受體具有較高的親和力，并且能顯著抑制ANGⅡ?qū)?xì)胞內(nèi)鈣離子的激活作用，為AT1受體的拮抗劑；2、與PPARγ完全激動(dòng)劑羅格列酮相比，Tek-1具有部分激活PPARγ的特性；3、以替米沙坦為陽性化合物，Tek-1長(zhǎng)時(shí)程給藥同樣能改善Aβ誘導(dǎo)的小鼠學(xué)習(xí)記憶損傷，并且Tek-1能夠抑制腦內(nèi)促炎細(xì)胞因子和趨化因子的釋放，提示其改善學(xué)習(xí)記憶的效應(yīng)與減輕腦內(nèi)炎癥反應(yīng)密切相關(guān)；4、在體外LPS誘導(dǎo)的BV-2小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞的致炎模型上， Tek-1能夠抑制BV-2小膠質(zhì)細(xì)胞的激活和激活后釋放炎性介質(zhì)，其作用機(jī)制可能與部分激活PPARγ，進(jìn)而抑制MAPKs及NF-κB信號(hào)通路的激活相關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R965

【參考文獻(xiàn)】

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1 蒲丹;唐朝樞;;血管緊張素多成員系統(tǒng)及各成員相互作用[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年06期

2 朱杰,張學(xué)景,鄒永;阿爾茨海默氏病及其藥物治療研究進(jìn)展[J];廣州化學(xué);2004年02期

3 胡質(zhì)文;陳永湘;李艷梅;;Tau蛋白的翻譯后修飾與阿爾茨海默病[J];中國(guó)科學(xué):化學(xué);2013年08期

4 唐小巒;李煥德;袁娟;;基于報(bào)告基因的PPAR-α激動(dòng)劑篩選體系的建立[J];中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué);2010年08期

本文編號(hào)：2497231