【摘要】：第一部分：腫瘤血管破壞劑DMXAA的抗血小板、抗血栓作用及其機(jī)制隨著我國人民生活水平的提高,動(dòng)脈血栓性疾病如冠心病和中風(fēng)等已超過惡性腫瘤成為導(dǎo)致國人死亡的首要疾病。血小板功能亢進(jìn)或異常激活引起的血管內(nèi)血栓形成是此類疾病的病理基礎(chǔ),抗血小板藥對其治療效果是肯定的。目前臨床上使用的抗血小板藥主要有環(huán)氧化酶抑制劑阿司匹林、P2Y12受體拮抗劑氯吡格雷、磷酸二酯酶(PDE)抑制劑西洛他唑、和整合素allbβ3受體拮抗劑阿昔單抗等,但由于存在阿司匹林抵抗和氯吡格雷抵抗等現(xiàn)象,導(dǎo)致現(xiàn)有的抗血小板藥對某些血栓性疾病患者臨床應(yīng)用受限,部分患者治療效果未盡如人意。因此,臨床仍需要抗血小板作用更強(qiáng)且副作用更小的藥物面世以改善某些動(dòng)脈血栓性疾病患者的療效,研究開發(fā)此類藥物仍具有較大的市場。DMXAA作為腫瘤血管破壞劑治療非小細(xì)胞肺癌等已進(jìn)入Ⅲ期臨床試驗(yàn),其主要通過破壞腫瘤組織血管導(dǎo)致腫瘤組織血供減少,從而達(dá)到抑制腫瘤作用。FAA結(jié)構(gòu)與DMXAA類似,顯著抑制小鼠來源腫瘤,但其作為腫瘤血管破壞劑進(jìn)入臨床試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)其幾乎不抑制人來源腫瘤。在臨床試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)患者使用FAA治療時(shí)有明顯出血,進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)其具有抗血小板、抗血栓作用。雖然,臨床試驗(yàn)中使用DMXAA治療的患者未見明顯出血,其是否具有抗血小板、抗血栓作用也未見報(bào)道,但由于DMXAA與FAA結(jié)構(gòu)類似,均屬于黃酮類藥物,我們推測其具有與FAA類似的抗血小板、抗血栓作用。因此,在本研究中,我們探討DMXAA是否具有抗血小板、抗血栓作用,及其相應(yīng)機(jī)制。在本研究中,我們發(fā)現(xiàn)DMXAA在10-600μmol/L范圍內(nèi)濃度依賴性地抑制TXA2類似物U46619誘導(dǎo)的阿司匹林處理或未處理的人血小板聚集和ATP釋放。300 μmol/L DMXAA強(qiáng)烈抑制AA、ADP、膠原或瑞斯托酶素誘導(dǎo)的阿司匹林未處理的人血小板聚集和ATP釋放。通過給小鼠尾靜脈注射DMXAA,體外取血檢測發(fā)現(xiàn)DMXAA也抑制U46619、AA、膠原或瑞斯托霉素誘導(dǎo)的小鼠血小板聚集。機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)DMXAA主要通過抑制血栓素合成酶導(dǎo)致血小板TXA2生成抑制,進(jìn)而抑制TXA2信號調(diào)控下游的Akt和Erk1/2蛋白磷酸化。另外,我們發(fā)現(xiàn)DMXAA也抑制血小板內(nèi)PDE。最后,我們采用FeCl3誘導(dǎo)的小鼠腸系膜動(dòng)脈血栓模型和激光誘導(dǎo)的小鼠提睪肌動(dòng)脈血栓模型均發(fā)現(xiàn)DMXAA靜脈注射給藥顯著抑制體內(nèi)血栓形成。在與氯吡格雷口服給藥相同的抗血栓作用劑量下,DMXAA靜脈注射給藥小鼠未見明顯出血。綜上所述,在本研究中我們首次發(fā)現(xiàn)DMXAA具有強(qiáng)大的抗血小板、抗血栓作用,且沒有明顯的出血副作用,其抗血小板作用機(jī)制為抑制血栓素合成酶導(dǎo)致血小板TXA2生成抑制和PDE抑制導(dǎo)致血小板內(nèi)cAMP和cGMP水平升高。DMXAA已經(jīng)在臨床前期試驗(yàn)和Ⅰ期臨床試驗(yàn)中顯示藥物安全性好,因此有希望作為一個(gè)有效和安全的抗血小板藥物推向市場。第二部分：NOD2增強(qiáng)血小板活化和血栓形成的作用及其機(jī)制血小板的主要功能是參與生理性止血和病理性血栓,其功能亢進(jìn)或異常激活可導(dǎo)致冠心病、中風(fēng)等動(dòng)脈血栓性疾病發(fā)生,在此過程中血小板表達(dá)的各種信號分子可顯著影響其活化過程。NOD (nucleotide binding oligomerization domain)作為白細(xì)胞中的眾多模式識別受體之一,包括NOD1和NOD2,其在機(jī)體對抗微生物入侵的天然免疫系統(tǒng)中發(fā)揮重要作用。我們課題組前期研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)人和小鼠血小板表達(dá)NOD2,但不表達(dá)NOD1, MDP腹腔注射激活NOD2可增強(qiáng)野生型小鼠血小板對ADP、凝血酶或膠原誘導(dǎo)的血小板聚集和ATP釋放,增強(qiáng)凝血酶誘導(dǎo)的野生型小鼠血小板凝塊收縮反應(yīng),但幾乎不影響凝血酶誘導(dǎo)的NOD2基因敲除小鼠血小板凝塊收縮反應(yīng),說明NOD2在小鼠血小板活化過程中可能發(fā)揮作用,但對人血小板活化、體內(nèi)血栓形成的影響及相應(yīng)機(jī)制等尚未闡明。在本部分中我們研究了采用MDP激活NOD2對人血小板活化、體內(nèi)血栓形成的影響及增強(qiáng)血小板活化的分子機(jī)制。我們發(fā)現(xiàn)MDP通過使血小板內(nèi)NOD2單體變成二聚體從而激活NOD2。體外MDP激活NOD2濃度依賴性地增強(qiáng)凝血酶或膠原誘導(dǎo)的人血小板聚集和ATP釋放。體外MDP激活NOD2增強(qiáng)凝血酶誘導(dǎo)的人血小板凝塊收縮反應(yīng),但幾乎不影響血小板在固相纖維蛋白原上鋪展。給FeCl3誘導(dǎo)的小鼠腸系膜動(dòng)脈血栓模型小鼠腹腔內(nèi)注射MDP激活NOD2,顯示MDP可增強(qiáng)FeCl3誘導(dǎo)的野生型小鼠腸系膜動(dòng)脈血栓形成,但幾乎不影響FeCl3誘導(dǎo)的NOD2基因敲除小鼠腸系膜動(dòng)脈血栓形成。采用抗血小板血清去除小鼠體內(nèi)血小板,再輸入MDP刺激或未刺激的血小板,最后尾靜脈注射膠原和腎上腺素誘導(dǎo)的肺栓塞模型小鼠觀察小鼠死亡情況,結(jié)果顯示輸注MDP刺激的野生型小鼠血小板可導(dǎo)致小鼠肺栓塞死亡率增高,而輸注MDP刺激的NOD2基因敲除小鼠血小板對小鼠肺栓塞死亡率幾乎不影響,說明MDP激活血小板NOD2可導(dǎo)致小鼠肺栓塞死亡率增高,進(jìn)一步說明MDP激活NOD2增強(qiáng)體內(nèi)血栓形成主要是通過激活血小板NOD2。小鼠斷尾出血量檢測顯示MDP激活NOD2可使野生型小鼠出血量減少,而在NOD2基因敲除小鼠中則無此作用,說明MDP激活血小板NOD2也加速了血小板依賴的止血。進(jìn)一步研究機(jī)制,首次發(fā)現(xiàn)血小板表達(dá)受體相互作用蛋白-2 (receptor-interacting protein 2, RIP2), MDP激活血小板NOD2導(dǎo)致RIP2磷酸化增加,進(jìn)一步激活RIP2調(diào)控的下游MAPK信號通路和cGMP/PKG通路,從而發(fā)揮NOD2激活增強(qiáng)血小板活化的作用。綜上所述,本部分研究揭示了MDP激活NOD2增強(qiáng)人血小板活化和體內(nèi)血栓形成,并闡明了相應(yīng)的分子機(jī)制,其主要是激活下游調(diào)控的RIP2/MAPKs通路和RIP2/cGMP/PKG通路發(fā)揮作用,這較好地解釋了一些炎癥患者如克羅恩氏病(Crohn's disease)等為何易發(fā)動(dòng)脈血栓性疾病,為治療此類患者易發(fā)的動(dòng)脈血栓性疾病提供了理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R965
【相似文獻(xiàn)】
相關(guān)期刊論文 前10條
1 g6振順,王雅卿;對腦寶抗血栓作用的機(jī)理的初步探討[J];中國藥房;1993年04期
2 朵振順,韓肖里;地培菲尼抗血栓作用的研究[J];實(shí)用醫(yī)技雜志;1994年02期
3 楊如蘭,王連杰;木耳對老年抗血栓作用初步觀察[J];血栓與止血學(xué)雜志;1996年04期
4 武玉欣;啤酒與抗血栓作用[J];日本醫(yī)學(xué)介紹;1998年01期
5 唐剛?cè)A,姜國輝,王世真,鄭連芳;川芎哚及其類似物的抗血小板與抗血栓作用[J];中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志;2001年04期
6 ;阿司匹林抗血栓作用長期應(yīng)用的最適劑量是多少?[J];中國社區(qū)醫(yī)師;2006年11期
7 楊靜嫻;史相國;徐志立;閆宇輝;呂莉;韓國柱;;烏蘇里藜蘆堿抗血栓作用機(jī)制的研究[J];中國醫(yī)藥指南;2010年32期
8 李文鐸,周寶玉,朵振順;復(fù)方路通片抗血栓作用的實(shí)驗(yàn)研究[J];神經(jīng)精神疾病雜志;1982年06期
9 李亦秀,高云瑞,張永春,李文漢,許德,周志健;鹽酸小檗胺抑制血小板聚集及抗血栓作用的研究[J];哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1986年03期
10 胡芝華,張康宣,葉桐封,蔡鳴,錢紅美;淡水魚內(nèi)臟油脂降血脂抗血栓作用研究[J];淡水漁業(yè);1998年03期
相關(guān)會(huì)議論文 前10條
1 劉大有;徐莉;王淑敏;金偉;;姚虻多肽類成分抗血栓作用的研究[A];中國自然資源學(xué)會(huì)全國第三屆天然藥物資源學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];1998年
2 韓嵐;劉青云;張露露;王宇;袁慧;彭代銀;;桃紅四物湯抗血栓作用及機(jī)制的初步探討[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)中藥實(shí)驗(yàn)藥理分會(huì)第七屆學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2007年
3 吳健波;李瑞;朱紹文;王婉瑜;熊郁良;呂秋敏;;蛇毒C-型凝集素誘導(dǎo)的血小板清除與體內(nèi)抗血栓作用[A];第八屆中國生物毒素學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要集[C];2007年
4 吳健波;李瑞;朱紹文;王婉瑜;熊郁良;呂秋敏;;蛇毒C-型凝集素誘導(dǎo)的血小板清除與體內(nèi)抗血栓作用[A];第八屆中國生物毒素學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要[C];2007年
5 陳超;饒婭琦;;香椿子抗血栓作用的實(shí)驗(yàn)研究[A];第六屆海峽兩岸心血管科學(xué)研討會(huì)論文摘要集[C];2007年
6 汪洋;賈乘;鄭利巖;張君利;程嘉藝;;復(fù)方三七納米顆粒劑抗血栓作用的實(shí)驗(yàn)研究[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)中藥實(shí)驗(yàn)藥理分會(huì)第八屆學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要匯編[C];2009年
7 李立文;季暉;張奕華;俞珊;周洲;;3-(4-甲苯基)-1，，2，3，4-三唑-5-[N-(2-乙酰氧基)苯甲�；鵠-亞胺抗血栓作用研究[A];中國藥理學(xué)會(huì)第九次全國會(huì)員代表大會(huì)暨全國藥理學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年
8 杜海燕;姬勝利;崔慧斐;王鳳山;曹吉超;;酸皮膚素衍生物的制備、理化性質(zhì)及其抗血栓作用機(jī)制的研究[A];中國資源生物技術(shù)與糖工程學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2005年
9 陳冬梅;汪海;;激活非神經(jīng)性乙酰膽堿系統(tǒng)抗動(dòng)脈粥樣硬化和抗血栓作用的研究[A];第九屆全國心血管藥理學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2007年
10 李立文;季暉;張奕華;余珊;周洲;;新型NO-阿司匹林衍生物ZA-6的抗血栓作用[A];中國藥學(xué)會(huì)應(yīng)用藥理專業(yè)委員會(huì)第三屆學(xué)術(shù)會(huì)議、中國藥理學(xué)會(huì)制藥工業(yè)專業(yè)委員會(huì)第十三屆學(xué)術(shù)會(huì)議暨2008生物醫(yī)藥學(xué)術(shù)論壇論文匯編[C];2008年
相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條
1 章圣輝;DMXAA抗血小板、抗血栓作用和NOD2增強(qiáng)血小板活化和血栓形成的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2014年
2 郝旭亮;羅布麻總黃酮抗血栓作用物質(zhì)基礎(chǔ)及抗人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡作用機(jī)理研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2009年
相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條
1 徐旭;玉足海參酸性多糖抗血栓作用及其機(jī)理研究[D];天津中醫(yī)學(xué)院;2004年
2 陳蓉;蛇床子素抗血栓作用及其機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2005年
3 毛娜娜;納豆激酶抗血栓作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2008年
4 潘嫦娥;BF066抗血小板、抗血栓作用及其機(jī)制的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2012年
5 高天紅;紅花提取物活血化瘀作用及抗血栓作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2011年
6 張未瑋;亞硒酸鈉與丹參注射液抗血栓作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2009年
7 雷田香;僵蠶純化液抗血栓作用機(jī)理的研究[D];湖南中醫(yī)藥大學(xué);2007年
8 楊倩;α-亞麻酸新資源及其抗血栓作用研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2008年
9 潘平;烏蘇里藜蘆生物堿單體新計(jì)巴丁抗血栓作用的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2008年
10 汪洋;復(fù)方三七顆粒劑抗血栓作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2010年
本文編號：
2477434
