【摘要】：致病菌對(duì)人類社會(huì)生活造成的困擾不容忽視,在對(duì)抗致病菌的過(guò)程中,抗菌藥物發(fā)揮了重大的作用,但同時(shí)也帶來(lái)了困擾。在醫(yī)院及各個(gè)社區(qū)抗菌藥物的濫用現(xiàn)象很普遍,由此導(dǎo)致的耐藥菌株對(duì)人類公共衛(wèi)生安全造成了很大的威脅。細(xì)菌受到的強(qiáng)烈生存壓力是耐藥菌株產(chǎn)生的主要原因,故尋求既可以降低致病性又對(duì)病原體生長(zhǎng)不影響的新型抗菌藥物迫在眉睫。Ⅲ型分泌系統(tǒng)(T3SS)是存在于革蘭氏陰性致病菌中高度保守的毒力因子,是一種注射器狀的毒性蛋白運(yùn)輸系統(tǒng),分泌效應(yīng)蛋白到宿主細(xì)胞促進(jìn)侵襲。本論文選用具有感染致病性的鼠傷寒沙門(mén)氏菌菌株,進(jìn)行T3SS的具體探討。首先對(duì)提取分離的20個(gè)異戊烯基取代化合物采用SDS-PAGE進(jìn)行初步的篩選,并對(duì)有抑制作用的化合物進(jìn)行復(fù)篩確認(rèn)及Western Blotting驗(yàn)證,并對(duì)其構(gòu)效關(guān)系進(jìn)行簡(jiǎn)單的探討,未發(fā)現(xiàn)顯著的共同結(jié)構(gòu)特征。其中,作用最強(qiáng)的是Licoflavonol(LCF),對(duì)毒性蛋白SipA、SipB、SipC和SipD均有明顯的抑制作用,且對(duì)鞭毛蛋白FliC幾乎沒(méi)有影響。同時(shí),LCF對(duì)T3SS毒性蛋白的抑制呈現(xiàn)明顯的濃度梯度依賴,且對(duì)沙門(mén)氏菌的正常生長(zhǎng)幾乎沒(méi)有影響。故選取LCF進(jìn)行作用機(jī)制的深入探討。隨后對(duì)LCF作用機(jī)制研究,沙門(mén)氏菌侵襲HeLa細(xì)胞的同時(shí)加藥檢測(cè)SipC含量,發(fā)現(xiàn)LCF抑制SipC的轉(zhuǎn)運(yùn);通過(guò)RT-PCR檢驗(yàn)LCF對(duì)T3SS相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄影響,發(fā)現(xiàn)LCF通過(guò)抑制SicA/InvF基因的轉(zhuǎn)錄而抑制SipC毒性蛋白的分泌。另外檢測(cè)LCF對(duì)針尖蛋白的影響,發(fā)現(xiàn)LCF對(duì)針尖復(fù)合物NC中PrgH的組裝影響不大。同時(shí),對(duì)課題組前期篩選得到的活性較好的抑制劑Csn-B進(jìn)行合成,以尋找Csn-B與相關(guān)蛋白的結(jié)合位點(diǎn)。本論文的合成途徑為將原料3,5-二甲氧基苯乙酸進(jìn)行�；磻�(yīng),然后脫甲基反應(yīng),最后酯化形成目標(biāo)產(chǎn)物Csn-B。最后,本論文針對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌T3SS中分子伴侶SicA及轉(zhuǎn)錄因子InvF基因進(jìn)行克隆、異源表達(dá)與蛋白質(zhì)的結(jié)晶及與小分子化合物的共晶。經(jīng)過(guò)不斷的嘗試及不同constructs的構(gòu)建,SicA蛋白得到柱狀棱型晶體;而InvF蛋白從最初的包涵體終于可溶。綜上,本論文主要進(jìn)行T3SS抑制劑的篩選,發(fā)現(xiàn)新型天然化合物L(fēng)CF,并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行探索,對(duì)于開(kāi)發(fā)新型抗耐藥型抗生素具有積極的意義。
[Abstract]:The trouble caused by pathogenic bacteria to human social life can not be ignored. In the process of anti-pathogenic bacteria, antibacterial drugs play an important role, but at the same time, they also bring trouble. The abuse of antibiotics is widespread in hospitals and communities, and the drug-resistant strains pose a great threat to human health and safety. The strong pressure on bacteria to survive is the main cause of drug-resistant strains. Therefore, it is urgent to seek new antimicrobial agents that can reduce pathogenicity without affecting the growth of pathogens. Type 鈪，

本文編號(hào)：2465889