【摘要】：實驗?zāi)康模?β-欖香烯作為溫郁金的主要抗腫瘤活性成分，其抗腫瘤作用廣泛，低毒性，但是天然提取的β-欖香烯水溶性較差。研究發(fā)現(xiàn)，在其母核上引入色氨酸合成β-欖香烯氨基酸綴合物不但可以增強(qiáng)其水溶性，并與三氧化二砷聯(lián)合應(yīng)用能夠提高三氧化二砷對人急性前髓性白血病的抗腫瘤效果。本文對β-欖香烯色氨酸甲酯與三氧化二砷聯(lián)合體外抗腫瘤機(jī)制進(jìn)行研究。 實驗方法： 以人肝癌細(xì)胞HepG2、SMMC-7721、人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116和K562為研究對象，運(yùn)用MTT法檢測β-欖香烯色氨酸甲酯（ETME）對于四種細(xì)胞的抗腫瘤活性。選擇人肝癌細(xì)胞SMMC-7721為機(jī)制研究對象，MTT法檢測ETME分別與As2O3和多柔比星（ADM）聯(lián)用后的抗腫瘤活性；ETME與三氧化二砷聯(lián)合應(yīng)用于肝癌細(xì)胞HepG2、SMMC-7721的抗腫瘤活性。聯(lián)合指數(shù)CI考察ETME與As2O3聯(lián)合應(yīng)用作用方式；AO/EB染色運(yùn)用高內(nèi)涵細(xì)胞成像系統(tǒng)觀察聯(lián)用前后細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)改變；EB/Hoechst33342染色對細(xì)胞凋亡率檢測；PI/Hoechst33342染色分析細(xì)胞的凋亡情況；Rh123/Hoechst33342染色高內(nèi)涵檢測線粒體膜電位；Hoechst33342染色高內(nèi)涵檢測細(xì)胞周期；免疫印跡法研究了p53、Bcl-2、Bax、Bid、caspase家族等相關(guān)蛋白的變化。 實驗結(jié)果： MTT法檢測結(jié)果顯示，ETME對人肝癌細(xì)胞HepG2、SMMC-7721、人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116和人白血病K562均呈現(xiàn)生長抑制作用，并呈現(xiàn)劑量依賴性。作用48h后其IC50分別為（22.92±1.2）μM，（34.48±0.84）μM，（21.92±1.24）μM，39.94±2.0μM。ETME與ADM聯(lián)合應(yīng)用同樣有增加生長抑制作用。ETME與As2O3聯(lián)合應(yīng)用作用于抑制率都有明顯的增加。在ETME20μM、As2O35μM濃度下，兩者聯(lián)合指數(shù)CI為1.25。 AO/EB染色及PI/Hoechst33342染色法證明，兩者聯(lián)用后能誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞SMMC-7721凋亡，并具有劑量依賴性。聯(lián)用后在形態(tài)學(xué)上可見細(xì)胞核濃染致密的顆粒狀，核分裂減少，凋亡小體形成。EB/Hoechst33342染色聯(lián)用后凋亡率為27.7%。 ETME與As2O3聯(lián)用后可以降低線粒體膜電位，，下調(diào)pro-caspase3、pro-caspase8、pro-caspase9，Bcl-2的表達(dá)，上調(diào)Bax、Bid的表達(dá)，這些都與p53蛋白的活化增加有關(guān)。他們的表達(dá)可以被PFT-α逆轉(zhuǎn)。Caspase抑制劑只能逆轉(zhuǎn)由ETME與三氧化二砷聯(lián)用引起的pro-caspase3、pro-caspase8、pro-caspase9下調(diào)，對Bcl-2家族的蛋白表達(dá)沒有影響。 高內(nèi)涵檢測細(xì)胞周期結(jié)果顯示，ETME與三氧化二砷聯(lián)合應(yīng)用后處于G2/M期細(xì)胞所占比例增加，G1期比例降低；Western Blot檢測細(xì)胞周期相關(guān)蛋白結(jié)果顯示，cyclin B1與CDK1表達(dá)增加，而cyclinD1與p27的表達(dá)降低，他們的表達(dá)都可以被PFT-α逆轉(zhuǎn)。 結(jié)論： β-欖香烯色氨酸甲酯對于于人肝癌細(xì)胞HepG2，SMMC-7721，人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-116和人白血病K562均具有明顯的抗腫瘤作用；β-欖香烯色氨酸甲酯與三氧化二砷和阿霉素聯(lián)用都有增強(qiáng)抗腫瘤作用。β-欖香烯色氨酸甲酯與三氧化二砷協(xié)同誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞凋亡作用通過p53介導(dǎo)的線粒體凋亡途徑發(fā)揮抗腫瘤作用，協(xié)同作用對于人肝癌細(xì)胞SMMC-7721細(xì)胞G2/M期的阻滯作用。
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【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R96

【參考文獻(xiàn)】

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1 孫立群;徐艷萍;趙明;陳鷗;;欖香烯聯(lián)合熱療對Hep-2細(xì)胞周期進(jìn)程及凋亡率的實驗觀察[J];中國耳鼻咽喉頭頸外科;2010年04期

本文編號：2462566