【摘要】：銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa TX16)具有腺苷脫氨酶活性,可以催化2,6-二氨基嘌呤核苷脫氨合成阿糖鳥苷,但銅綠假單胞菌TX16是一種條件致病菌,直接用于工業(yè)生產(chǎn)存在一定風(fēng)險。將銅綠假單胞菌TX16菌株來源的腺苷脫氨酶基因(add)克隆至載體p ET-28a中,然后轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌Escherichia coli BL21(DE3),經(jīng)過篩選獲得工程菌E.coli(add)。經(jīng)異丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)和聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)檢測及酶活力測定,表明E.coli(add)能夠表達大量腺苷脫氨酶,其產(chǎn)酶能力是含空載質(zhì)粒的BL21(DE3)菌株E.coli(p ET-28a)的16.2倍。以E.coli(add)制備的粗酶液為催化劑,催化阿糖2,6-二氨基嘌呤核苷發(fā)生脫氨反應(yīng)得到產(chǎn)物阿糖鳥苷,轉(zhuǎn)化率可達96.8%。
[Abstract]:Pseudomonas aeruginosa (Pseudomonas aeruginosa TX16 has adenosine deaminase activity and can catalyze the deamination of 2,6-diamine nucleoside to Ara-guanosine. However, Pseudomonas aeruginosa TX16 is a conditional pathogen, and there is a certain risk for direct use in industrial production. The adenosine deaminase gene (add) from Pseudomonas aeruginosa TX16 strain was cloned into vector p ET-28a and transformed into E. coli Escherichia coli BL21 (DE3). After screening, the engineering strain E.coli (add). Was obtained. The results of isopropyl-尾-D-thiopyranopyranoside (IPTG) induction, polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and enzyme activity assay showed that E.coli (add) could express a large amount of adenosine deaminase. The enzyme production ability of BL21 (DE3) strain E.coli (p ET-28a) was 16.2 times higher than that of E.coli (p ET-28a) containing empty plasmid. The crude enzyme solution prepared by E.coli (add) was used as catalyst to catalyze the deammoniation reaction of 2, 6-diamine nucleoside to produce arabinoside. The conversion rate was up to 96.8%.
【作者單位】： 河南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院功能微生物綠色轉(zhuǎn)化技術(shù)河南省工程實驗室;新鄉(xiāng)拓新生化科技有限公司;
【基金】：河南省高�？萍紕�(chuàng)新團隊支持計劃(13IRTSTHN009) 河南省教育廳自然科學(xué)基金項目(2011B180032)
【分類號】：R915

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