【摘要】：目的：（1）建立紫杉醇含量測定方法；分離人血漿低密度脂蛋白（LDL）；（2）合成癸酸接枝的精氨酸改性殼聚糖（ACD）。（3）制備包載紫杉醇（PTX）的聚合物膠束（PTX-ACD）并用LDL對其進行修飾，對兩種載藥膠束進行表征并對其釋放度進行考察。（4）對LDL修飾的載紫杉醇膠束（PTX-LDL-ACD）的體內(nèi)急性毒性，A549細胞移植瘤裸鼠的抗腫瘤活性及體內(nèi)靶向性進行考察，并與紫杉醇注射劑（PTX-INJ）進行比較。（5）評價新型載藥系統(tǒng)PTX-LDL-ADC膠束的體外藥效。對PTX-LDL-ADC的體外細胞毒性、細胞攝取和細胞凋亡進行考察，并與PTX-ADC及原料藥進行比較。 方法：（1）采用高效液相色譜法建立紫杉醇的含量測定方法；溴化鉀密度梯度離心法從人血漿中分離LDL并對其進行表征；（2）分別用IR、1H NMR、廣角x射線衍射（WAXD）和差示掃描量熱法（DSC）等技術(shù)對殼聚糖衍生物結(jié)構(gòu)進行表征，并考察其在各種溶劑中的溶解性能及其對難溶性藥物的增溶能力。（3）初步篩選載藥膠束的制備方法，并對其制備工藝進行優(yōu)化；采用EDC·HCl和NHS活化法將LDL接枝于膠束上；對其進行表征；透析袋法測定兩種載藥膠束的釋放度。（4）利用小鼠急性毒性實驗測定LD50。建立動物腫瘤模型，繪制在體腫瘤生長曲線，計算各組裸鼠的抑瘤率。HE染色后進行病理組織學(xué)觀察。構(gòu)建了具備靶向性的Cy7-LDL-ACD，并對其體內(nèi)靶向性進行研究。（5）MTT法求算腫瘤細胞抑制率IR。分別利用共聚焦顯微鏡、熒光顯微鏡觀察膠束在A549細胞內(nèi)的攝取和分布情況。利用熒光顯微鏡考察不同膠束誘導(dǎo)癌細胞凋亡的情況。 結(jié)果：（1）建立了PTX的HPLC標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為y=33.784x+6.073，，R2=0.99996， PTX濃度在0.5～200μg·mL-1范圍內(nèi)線性良好。分離得到的LDL平均粒徑為（28.7±5.1）nm，PDI為0.208，透射電鏡下觀察LDL的形態(tài)為圓整球狀；應(yīng)用Bradford法測得LDL蛋白濃度（未經(jīng)濃縮）為0.808mg·mL-1。（2）所制得的兩親性嵌段共聚物精氨酸-殼聚糖-癸酸（ACD）的分子量約為8.3kD，熒光光譜法測得ACD臨界膠束濃度約為3.299×10-2mg·mL1；溶解度實驗表明其在pH1～12溶液中均可溶解，并可在水中自組裝形成帶有淡藍色乳光的膠束溶液；（3）選取超聲法為本實驗載藥膠束的制備方法并對其進行優(yōu)化，得到最佳制備工藝為：ACD的濃度3mg·mL-1、藥載比3∶10、超聲次數(shù)200次。紅外和凝膠電泳試驗表明LDL成功接上載藥膠束；其釋放符合Higuchi方程，遵循骨架型釋放模型特點。馬爾文粒徑測定儀顯示系列ARG-CS-DA形成的聚合物膠束平均粒徑為166.3nm，多分散系數(shù)為0.2，Zeta電位為+21.75～+29.80mV。（4）PTX-ACD及PTX-LDL-ACD組小鼠尾靜脈注射的LD50及其95%可信限，分別為65.36(40.92~94.70) mg·kg-1和70.81(44.33~102.59) mg·kg-1。PTX-LDL-ACD組小鼠尾靜脈注射的LD50為PTX-INJ組的2.4倍，PTX-ACD組小鼠尾靜脈注射的LD50為PTX-INJ組的2.2倍。腫瘤抑制強弱順序為：PTX-LDL-ACDPTX-ACD PTX-INJ，其中PTX-LDL-ACD抑瘤率達到63.42%。尾靜脈給藥1h后，2種膠束在體內(nèi)均可全身彌散，6h內(nèi)腫瘤部位可見較為集中的熒光分布；在12h內(nèi)，可較為明顯的觀察到膠束在裸鼠肝臟與腫瘤部位集中；72h內(nèi)PTX-LDL-ACD組裸鼠腫瘤部位仍可觀察到較強的熒光。（5）載藥膠束的細胞毒性PTX-LDL-ADCPTX-ADCPTX；細胞攝取PTX-LDL-ADCPTX-ADC；對細胞凋亡的影響PTX-LDL-ADCPTX-ADCPTX。 結(jié)論：成功建立了紫杉醇的HPLC含量測定方法；分離得到純度較高的LDL；制備了PTX-ACD載藥膠束，并將LDL成功連接到膠束上。PTX載藥膠束具有增加藥物溶解性、減緩藥物釋放的作用。急性毒性實驗表明，PTX-ACD和PTX-ACD-LDL比PTX-INJ具有更低的毒性。抑瘤實驗說明，LDL修飾的膠束的抑瘤效果更好。靶向性實驗說明，Cy7標(biāo)記的LDL-ACD在活體熒光顯像中具有更明顯的靶向性。與泰素和未經(jīng)靶頭修飾的載藥膠束相比，經(jīng)低密度脂蛋白（LDL）修飾后的殼聚糖納米粒靶向主動的與癌細胞上過表達的低密度脂蛋白受體（LDLR）相結(jié)合，細胞毒性顯著增加。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R943;R965

【參考文獻】

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本文編號：2460235