【摘要】：肺癌是最常見的肺原發(fā)性惡性腫瘤,也是發(fā)病率和死亡率增長最快,對人群健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一。絕大多數(shù)肺癌起源于支氣管黏膜的上皮細胞。目前臨床上吉西他濱是治療晚期非小細胞肺癌的一線藥物,但因其半衰期短需大劑量持續(xù)給藥維持體內有效的藥用濃度。這種大劑量的給藥方式給患者帶來了很強的毒副作用,限制了其臨床效用。本課題旨在,利用肺癌細胞表面過表達的雌激素受體(Estrogen receptors,ER)與配體雌酮(Estrogen,ES)間的特異性高親和力,研制出一種新型以雌酮修飾的長效吉西他濱脂質體制劑,以提高藥物對腫瘤的靶向性同時能夠實現(xiàn)在體內達到長效循環(huán)的效果。此外,本論文對該新型脂質體制劑進行了表征、體外靶向性、體外細胞毒及體內抗腫瘤的研究。首先采用硫酸銨梯度法制備4種不同的吉西他濱脂質體制劑,即吉西他濱普通脂質體(L-GEM)、吉西他濱靶向脂質體(ES-L-GEM)、吉西他濱長效脂質體(SSL-GEM)和吉西他濱長效靶向脂質體(ES-SSL-GEM)。然后分別對這四種脂質體制劑進行表征研究,通過透射電鏡對脂質體形態(tài)進行觀察,采用動態(tài)光散射粒徑分析儀測定粒徑大小、粒徑分布、多分散系數(shù)和Zeta電位,借助紫外可見分光光度計檢測吉西他濱脂質體的包封率,并通過透析法檢測四種制劑儲存在4℃和25℃條件下于不同時間段的穩(wěn)定性。之后在熒光顯微鏡下觀察肺癌細胞A549對加載了羅丹明熒光染料(Rh B)的四種脂質體制劑的攝取情況,以此驗證長效靶向脂質體的體外靶向作用。為探究A549細胞對長效靶向脂質體的攝取機制,于吉西他濱脂質體與細胞孵育前加入內吞抑制劑:蔗糖、染料木黃酮、鹽酸阿米洛利等,并于熒光顯微鏡下觀察內吞結果。最后采用MTT比色法對吉西他濱及所制備的的4種脂質體制劑分別進行細胞毒實驗,以此觀察體外抗腫瘤作用。實驗結果顯,成功制備出四種脂質體制劑(L-GEM、ES-L-GEM、SSL-GEM、ES-SSL-GEM),粒徑約在120nm~130nm間,粒徑較為均一,PDI在0.1~0.2范圍內,脂質體并帶有一定負電荷。吉西他濱長效靶向脂質體的穩(wěn)定性顯著優(yōu)于吉西他濱靶向脂質體和普通脂質體,并且在4°C下保存至48h后吉西他濱長效靶向脂質體制劑的滲漏率不超過10%。體外靶向性的研究結果證實ES-L-Rh B與ES-SSL-Rh B均對A549細胞具有主動靶向作用,且ES-SSL-Rh B具有長效作用。此外,除受體介導的內吞作用外,巨胞飲介導的內吞作用是長效靶向脂質體進入細胞的主要途徑。吉西他濱及所制備的這四種脂質體對A549細胞的毒性作用由強到弱依次為:ES-SSL-GEM、SSL-GEM、ES-L-GEM、L-GEM、GEM,且ES-SSL-GEM的抗腫瘤效果顯著高于其他四種制劑,在體內實驗中也可以看出ES-SSL-GEM抗腫瘤效果是最好的。本課題在常規(guī)脂質體中載入特異性識別雌激素受體的雌酮片段和長效PEG分子,成功研制出一種具有長循環(huán)和腫瘤特異性靶向特性的高效低毒的脂質體載藥系統(tǒng),將這種載藥系統(tǒng)攜帶臨床上的一線抗肺癌用藥物吉西他濱,針對有高表達雌激素受體的非小細胞肺癌進行各種研究,發(fā)現(xiàn)這種吉西他濱長效靶向脂質體能夠延長藥物在體內的作用時間,藥物對腫瘤細胞的殺傷作用隨著濃度和時間的增加而提高,其靶向性也可顯著增強其對腫瘤的定位作用并降低了毒副作用,有較高的臨床價值。希望本論文所制備的吉西他濱長效靶向脂質體在不久的將來可以有效的應用于肺癌的臨床治療。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R943;R96

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