【摘要】：目的:研究法舒地爾對內(nèi)皮祖細(xì)胞(endothelial progenitor cells,EPCs)功能活性及一氧化氮(NO)合成的影響。方法:利用密度梯度離心法分離、培養(yǎng)人外周血單個核細(xì)胞,由FITC-UEA-I和Dil-acLDL雙染色鑒定正在分化的EPCs。將分離、培養(yǎng)的EPCs分為對照組、法舒地爾組(10μmol/L)和內(nèi)皮型一氧化氮合酶抑制劑(L-NAME,100μmol/L)干預(yù)組。分別采用免疫熒光染色計(jì)數(shù)法、Transwell小室法、粘附實(shí)驗(yàn)以及體外小管形成實(shí)驗(yàn)觀察法舒地爾干預(yù)后EPCs增殖、遷移、粘附以及血管形成能力的變化情況,同時采用Greiss法檢測法舒地爾處理后EPCs合成NO的變化情況,應(yīng)用Western blot計(jì)數(shù)檢測法舒地爾處理EPCs后一氧化氮合酶(eNOS)和磷酸化eNOS(Ser1179)蛋白的表達(dá)變化情況。結(jié)果:與對照組相比,法舒地爾組EPCs增殖、遷移、粘附以及血管形成等功能活性顯著提高,而在L-NAME組,法舒地爾改善EPCs功能活性的作用受到明顯的抑制。另外,EPCs經(jīng)法舒地爾處理后,NO的合成分泌水平以及磷酸化eNOS(Ser1179)表達(dá)水平均明顯高于對照組(P0.05)。結(jié)論:法舒地爾具有促進(jìn)EPCs增殖、遷移、粘附等功能的作用,其主要機(jī)制可能與法舒地爾促進(jìn)eNOS的活性,進(jìn)而增加NO的合成分泌有關(guān)。
[Abstract]:Aim: to study the effects of fasudil on the functional activity of endothelial progenitor cells (endothelial progenitor cells,EPCs) and the synthesis of nitric oxide (no) (NO). Methods: human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) were isolated and cultured by density gradient centrifugation. The differentiated EPCs. was identified by FITC-UEA-I and Dil-acLDL double staining. The cultured EPCs were divided into control group, fasudil group (10 渭 mol / L) and endothelial nitric oxide synthase inhibitor (100 渭 mol / L) group. Immunofluorescence staining, Transwell chamber method, adhesion test and tubule formation test were used to observe the changes of proliferation, migration, adhesion and angiogenesis ability of EPCs after the intervention of fasudil. At the same time, the expression of nitric oxide synthase (eNOS) and phosphorylated eNOS (Ser1179) protein in EPCs treated with fasudil was detected by Greiss method and the expression of nitric oxide synthase (eNOS) and phosphorylated eNOS (Ser1179) protein were detected by Western blot counting after fasudil was treated with fasudil. Results: compared with the control group, the proliferation, migration, adhesion and angiogenesis of EPCs were significantly increased in fasudil group, while in L-NAME group, the effect of fasudil on improving EPCs functional activity was significantly inhibited. In addition, the synthesis and secretion of NO and the expression of phosphorylated eNOS (Ser1179) in EPCs treated with fasudil were significantly higher than those in control group (P0.05). Conclusion: fasudil can promote the proliferation, migration and adhesion of EPCs. The main mechanism of fasudil may be that fasudil promotes the activity of eNOS and then increases the synthesis and secretion of NO.
【作者單位】： 武漢大學(xué)人民醫(yī)院心內(nèi)科;湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院心內(nèi)科;湖北醫(yī)藥學(xué)院;
【分類號】：R96

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