【摘要】：共生真菌在與宿主之間協(xié)同進(jìn)化的過程中,形成了物種豐富,數(shù)量龐大的資源庫,其次生代謝產(chǎn)物特有的化學(xué)結(jié)構(gòu)復(fù)雜性和生物活性多樣性,奠定了從中發(fā)現(xiàn)活性先導(dǎo)物進(jìn)而研發(fā)創(chuàng)新藥物的成功幾率。隨著全球人口的老齡化,阿爾茨海默病的發(fā)病率也在快速上升,由于阿爾茨海默病病因的復(fù)雜多樣,傳統(tǒng)乙酰膽堿酯酶抑制劑僅能在一定程度上緩解中、輕度阿爾茨海默病患者的癥狀,并不能終止和逆轉(zhuǎn)阿爾茨海默病的病情進(jìn)展,因此,研究新型多靶向、安全高效的抗阿爾茨海默病藥物是當(dāng)代社會對改善健康狀況、提高生活質(zhì)量的急切需求。本文研究了一種從藤本植物紅花青藤(I. rhodantha)內(nèi)生真菌Phomopsis sp.S12次級代謝產(chǎn)物中分離得到新型二萜類化合物V11的抗阿爾茨海默病生物活性,主要包括以下內(nèi)容：第一章：綜述阿爾茨海默病發(fā)病機(jī)制和藥物治療研究進(jìn)展。第二章：對V11的AChE抑制活性進(jìn)行研究。通過Ellman比色法檢測了其在體外對AChE和BuChE的抑制活性,其中對AChE的IC50接近陽性對照石杉堿甲。萜類結(jié)構(gòu)使得V11具有良好的脂溶性,易于通過血腦屏障,并在腦組織中保持較長時(shí)間,以發(fā)揮作用。通過LC-MS檢測不同時(shí)間點(diǎn)V11在腦組織中分布,發(fā)現(xiàn)其與腦組織內(nèi)AChE活力呈現(xiàn)一定相關(guān)性。對Aβ1-42雙側(cè)海馬注射造模小鼠給藥后進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn),證明V11具有改善AD模型動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶能力的作用,其顯著的AChE抑制活性可能是改善學(xué)習(xí)記憶能力的直接原因。第三章：對V11的免疫抑制活性及調(diào)節(jié)相關(guān)通路的研究。利用DCFH-DA作為熒光探針檢測Aβ1-42刺激SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)活性氧水平,發(fā)現(xiàn)經(jīng)過V11預(yù)處理的細(xì)胞活性氧水平低于未經(jīng)處理的細(xì)胞；通過Real time PCR檢測了體內(nèi)Aβ142誘導(dǎo)炎癥因子(IL-6, TNF-α和IL-1α) mRNA表達(dá)被抑制,且呈現(xiàn)量效依賴關(guān)系。通過Western blot檢測了V11抑制Toll樣受體-4表達(dá),進(jìn)一步抑制NF-κB活化,通過下調(diào)Bax蛋白表達(dá)抑制細(xì)胞凋亡,上調(diào)cAMP反應(yīng)結(jié)合原件(CREB)磷酸化水平,從而促進(jìn)長時(shí)程記憶的形成。此外,本文初步研究了V11在抑制Aβ1-42向聚集態(tài)過程中發(fā)揮的作用,提示其可能在緩解阿爾茨海默病病程中發(fā)揮作用。
[Abstract]:In the process of co-evolution between symbiotic fungi and host, they form abundant species and huge number of resources, and their secondary metabolites have unique chemical structure complexity and biological activity diversity. It establishes the probability of discovery of active precursors and development of innovative drugs. With the aging of the global population, the incidence of Alzheimer's disease is also rising rapidly. Due to the complexity and variety of the causes of Alzheimer's disease, traditional acetylcholinesterase inhibitors can only alleviate the disease to a certain extent. The symptoms of mild Alzheimer's disease do not stop and reverse the progression of Alzheimer's disease, so the study of new, multi-targeted, safe and efficient anti-Alzheimer's disease drugs is a modern society's contribution to improving health. An urgent need to improve the quality of life. A novel diterpenoid, V11, was isolated from the secondary metabolites of (I. rhodantha) endophytic fungus Phomopsis sp.S12 in lianas, and its bioactivity against Alzheimer's disease was studied in this paper. The main contents are as follows: chapter 1: review the pathogenesis and drug therapy of Alzheimer's disease. Chapter 2: the AChE inhibitory activity of V11 was studied. Its inhibitory activity to AChE and BuChE in vitro was detected by Ellman colorimetry, among which the IC50 against AChE was close to that of Huperzine A. Terpenoid structure makes V11 have good fat solubility, easy to pass through the blood-brain barrier, and keep it in the brain for a long time to play a role. The distribution of V11 in brain tissue was detected by LC-MS at different time points. It was found that V11 was correlated with the activity of AChE in brain tissue. The water maze test of A 尾 1 / 42 mice injected bilaterally into hippocampus showed that V11 could improve the learning and memory ability of AD model animals, and the obvious inhibitory activity of AChE might be the direct cause of improving learning and memory ability. Chapter 3: study on the immunosuppressive activity of V11 and the regulation of related pathways. DCFH-DA was used as fluorescence probe to detect the level of reactive oxygen species (Ros) in SH-SY5Y cells stimulated by A尾 1-42. It was found that the level of Ros in cells pretreated with V11 was lower than that in untreated cells. The mRNA expression of inflammatory factors (IL-6, TNF- 偽 and IL-1 偽) induced by A 尾 142 was detected by Real time PCR in a dose-dependent manner. V11 inhibited the expression of Toll-like receptor-4 by Western blot, further inhibited the activation of NF- 魏 B, inhibited cell apoptosis by down-regulating the expression of Bax protein, and upregulated the phosphorylation level of cAMP-binding (CREB), thus promoting the formation of long-term memory. In addition, the role of V11 in inhibiting the aggregation of A 尾 1-42 was preliminarily studied, suggesting that V11 may play a role in relieving the course of Alzheimer's disease.
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R96

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本文編號：2445417