【摘要】：目的:觀察肝X受體(Liver X receptors,LXR)激動劑對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)向多巴胺能(dopaminergic,DA)神經(jīng)元分化的影響,并初步探討其機制。方法:1.采用全骨髓細胞貼壁法分離、純化和培養(yǎng)大鼠BMSCs。使用生長良好的第3代大鼠BMSCs進行成脂和成骨誘導(dǎo)分化,鑒定BMSCs多向分化潛能;流式細胞術(shù)檢測BMSCs表面標記物CD90、CD44、CD45、CD29和CD11b的表達。2.將大鼠BMSCs分為對照組、LXR激動劑組(LXR組)、生長因子組(growth factors,GF組)和生長因子+LXR激動劑組(GF+LXR組)。其中,LXR+GF組在GF的基礎(chǔ)作用上,考察LXR激動劑的時間依賴性和濃度依賴性:(1)確定LXR激動劑的加入時間點:在預(yù)先給予GF下,不同時間點加入0.5μM LXR激動劑:GF與LXR激動劑同時加入(Day0)、GF作用3天后加入LXR激動劑(Day3)、GF作用6天后加入LXR激動劑(Day6)和GF作用9天后加入LXR激動劑(Day9),采用細胞免疫熒光法測定Tuj1和TH的表達;(2)確定GF聯(lián)合LXR激動劑的最佳誘導(dǎo)時程:在(1)確定的基礎(chǔ)上,LXR+GF培養(yǎng)不同時間,分別為3天、6天、9天和12天,采用細胞免疫熒光法測定Tuj1和TH的表達;(3)確定LXR激動劑的最佳濃度:在(1)和(2)確定的基礎(chǔ)上,分別加入0.125、0.25、0.5、1、2μM LXR激動劑,采用細胞免疫熒光法測定TH的表達;采用細胞免疫熒光法測定Nestin、Neun、Tuj1和TH的表達,CCK-8法檢測各組細胞生長速率。3.將大鼠BMSCs分為對照組、GF組和GF+LXR(0.5μM)同時加入并誘導(dǎo)作用6天組,采用細胞免疫熒光法測定LXRα和LXRβ的蛋白表達,采用定量PCR測定LXRα、LXRβ、ABCA1、TH、DAT、Nurr1、Pitx3、En1和Lmx1b的m RNA表達。結(jié)果:1.全骨髓貼壁法分離、純化和培養(yǎng)的大鼠BMSCs為長梭形,核大,核仁清晰可見,呈漩渦狀生長。該細胞具有向成脂、成骨分化的潛能;流式細胞檢測發(fā)現(xiàn),表面標記物CD29、CD90、CD44呈陽性表達,CD45、CD11b呈陰性表達。2.對照組和LXR組中,細胞呈典型的BMSCs形態(tài),即長梭形;細胞生長速率隨培養(yǎng)時間延長逐漸增加,兩組無顯著差異;LXR組細胞幾乎無Nestin、Neun、Tuj1和TH表達,這表明單獨使用LXR激動劑處理BMSCs對其增殖和分化沒有明顯影響。在GF加入的基礎(chǔ)上,Tuj1和TH的表達在LXR激動劑與GF同時加入(Day0)最顯著,并隨著LXR激動劑加入時間的延遲,Tuj1和TH的表達逐漸減少。LXR激動劑與GF同時加入,Tuj1和TH的表達隨LXR激動劑與GF誘導(dǎo)時程增加而增加,6天達到峰值,細胞呈典型的神經(jīng)元形態(tài),同時細胞均有Nestin和Neun表達;6天后,Tuj1和TH的表達降低。不同濃度的LXR激動劑聯(lián)合GF同時加入并誘導(dǎo)作用6天,細胞均呈現(xiàn)出胞體聚攏并有細長突起,TH表達顯著;隨LXR激動劑濃度增加,TH表達先升高后降低,在LXR激動劑的濃度為0.5μM時,TH的表達達峰值。與對照組相比,GF作用12天,其誘導(dǎo)分化率為62.61±2.334%。與單純GF處理相比,LXR(0.5μM)+GF同時加入并誘導(dǎo)6天,其分化率為87.42±7.573%。3.與對照組相比,GF組LXRα、ABCA1、TH、DAT、Nurr1和Pitx3 m RNA表達顯著升高,En1和Lmx1b m RNA表達顯著降低。與GF組相比,LXR+GF組LXRα和β蛋白以及m RNA表達顯著升高,ABCA1、TH、DAT、Nurr1和Pitx3的m RNA表達顯著升高,En1和Lmx1b m RNA表達顯著降低。結(jié)論:1.單獨使用LXR激動劑不能顯著誘導(dǎo)大鼠BMSCs向DA神經(jīng)元分化。2.LXR激活可提高大鼠BMSCs向DA神經(jīng)元分化的效率并縮短誘導(dǎo)時間;LXR激動劑與GF聯(lián)合誘導(dǎo)的最佳方案為LXR(0.5μM)與GF同時加入并誘導(dǎo)作用6天。3.LXR激動劑促進大鼠BMSCs向DA神經(jīng)元分化的機制可能涉及激動LXR,調(diào)節(jié)ABCA1和DA神經(jīng)元發(fā)育相關(guān)基因的表達。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R96

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 李琳;謝友紅;;TNF-α對SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞成脂分化的影響及其相關(guān)分子機制的探討[J];重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2016年10期

2 李曉峰;趙勁民;蘇偉;崔向榮;羅世興;馬愛國;;大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)與鑒定[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2011年10期

3 ;Differentiation of Mesenchymal Stem Cells Into Dopaminergic Neuron-like Cells in vitro[J];Biomedical and Environmental Sciences;2005年01期

，

本文編號：2417884