【摘要】：為了解決新型雙功能融合蛋白GAD復(fù)性困難、具有免疫原性等問題,采用PEG-馬來酰亞胺修飾變性后的GAD包涵體。通過圓二色譜、色氨酸熒光分析等方法對比修飾前后GAD構(gòu)象變化,并采用OGTT、脂清除實驗驗證其生物學(xué)活性。研究結(jié)果表明,PEG-馬來酰亞胺能夠完成變性條件下GAD的定點修飾,提高其復(fù)性效率,且修飾產(chǎn)物二、三級結(jié)構(gòu)與修飾前一致;PEG-GAD的免疫原性降低(P0.01),具有顯著的降糖降脂作用(P0.001),且體內(nèi)藥效時間延長。此方法可為強疏水性多肽類藥物的開發(fā)提供有效策略。
[Abstract]:In order to solve the problem of GAD renaturation and immunogenicity, PEG- maleimide was used to modify the GAD inclusion body after denaturation. The conformation changes of GAD before and after modification were compared by circular dichroism chromatography and tryptophan fluorescence analysis, and their biological activity was verified by OGTT, lipid scavenging experiment. The results showed that PEG- Maleimide could complete the fixed-point modification of GAD under denaturation conditions and improve its renaturation efficiency. The second and third order structure of the modified product was the same as that before modification. The immunogenicity of PEG-GAD was decreased (P0.01), the effect of glucose and lipid was significantly decreased (P0.001), and the time of drug effect in vivo was prolonged. This method can provide an effective strategy for the development of strong hydrophobic polypeptide drugs.
【作者單位】： 中國藥科大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(No.81172974)~~
【分類號】：R914

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本文編號：2417536