【摘要】：植物內(nèi)生真菌是指共生或寄生在宿主植物各組織和器官內(nèi),不會引起宿主發(fā)生明顯病變并完成整個(gè)生活周期的一大類微生物。由于長期與宿主共存,會產(chǎn)生與宿主植物相同或相似的活性代謝產(chǎn)物,已成為新藥篩選的重要來源。本次實(shí)驗(yàn)選用二色補(bǔ)血草為植物材料,通過對其內(nèi)生真菌代謝產(chǎn)物進(jìn)行生物活性的篩選研究,為二色補(bǔ)血草內(nèi)生真菌資源的綜合開發(fā)利用提供基礎(chǔ)資料。采用組織塊分離法,從二色補(bǔ)血草全株共分離到內(nèi)生真菌32株。其中葉部6株,莖部11株,根部15株。通過菌落形態(tài)及顯微形態(tài)特征鑒定,初步鑒定出其中21株,分屬2綱3目7科11屬。以PD培養(yǎng)基將真菌進(jìn)行液體發(fā)酵,發(fā)酵物固液分離,發(fā)酵液依次以乙酸乙酯萃取、正丁醇萃取,得到乙酸乙酯萃取物(EAE)及正丁醇萃取物(NBE),菌絲體經(jīng)甲醇提取得甲醇提取物(MME),96個(gè)發(fā)酵產(chǎn)物樣品進(jìn)行生物活性篩選研究。抗氧化活性研究結(jié)果顯示,74個(gè)樣品表現(xiàn)出一定的總還原能力,占樣品總數(shù)的77.08%,Vc當(dāng)量超過100μg/mg共1個(gè),S 102(NBE)總還原力最強(qiáng),VC當(dāng)量為108.20μg/mg;DPPH自由基清除活性研究結(jié)果顯示,94個(gè)樣品表現(xiàn)出DPPH自由基清除活性,占樣品總數(shù)的97.92%,清除率80%以上的共5個(gè),R 301(EAE)活性最強(qiáng),清除率為94.23%;88個(gè)樣品表現(xiàn)出羥基自由基清除活性,占樣品總數(shù)的91.67%,清除率20%以上的共7個(gè),R 201(NBE)活性最強(qiáng),清除率為35.34%。抑菌活性研究結(jié)果表明,75個(gè)樣品對大腸桿菌表現(xiàn)出抑制活性,占樣品總數(shù)的78.13%,抑菌圈直徑在16mm以上的共4個(gè)樣品,S 101(NBE)對其抑制活性最強(qiáng),MIC為0.625mg/mL;77個(gè)樣品對金黃色葡萄球菌表現(xiàn)出抑制活性,占樣品總數(shù)的80.21%,抑菌圈直徑在16mm以上的共2個(gè)樣品,R 403(EAE)對其抑制活性最強(qiáng),MIC為1.250mg/mL;62個(gè)樣品對肺炎克雷伯菌表現(xiàn)出抑制活性,占樣品總數(shù)的64.58%,抑菌圈直徑在16mm以上的共6個(gè)樣品,L 301(EAE)對其抑制活性最強(qiáng),MIC為0.625mg/mL;54個(gè)樣品對地衣芽孢桿菌表現(xiàn)出抑制活性,占樣品總數(shù)的56.25%,抑菌圈直徑在16mm以上的共3個(gè)樣品,R 401(EAE)對其抑制活性最強(qiáng),MIC為0.156mg/mL;55個(gè)樣品對綠膿桿菌表現(xiàn)出抑制活性,占樣品總數(shù)的57.29%,但整體抑制活性較弱,未達(dá)到復(fù)篩的標(biāo)準(zhǔn)。α-糖苷酶抑制活性研究結(jié)果表明,84個(gè)樣品對α-糖苷酶表現(xiàn)出抑制活性,占樣品總數(shù)的87.50%,其中抑制率在80%以上的共11個(gè),占樣品總數(shù)的11.46%,S 303(EAE)抑制活性最高,抑制率為96.38%。抗蟲活性研究結(jié)果表明,8個(gè)樣品對赤擬谷盜表現(xiàn)出一定的觸殺活性,占樣品總數(shù)的8.33%,其中R 302(NBE)活性最強(qiáng),LC50值為24.268mg/mL(陽性對照藥物氰戊菊酯LC50=0.279mg/mL);10個(gè)樣品對煙草甲表現(xiàn)出一定的觸殺活性,占樣品總數(shù)的10.41%,其中S 303(NBE)活性最強(qiáng),LC50值為14.831mg/mL(陽性對照藥物氰戊菊酯LC50=0.140mg/mL)。內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物熏蒸活性整體較弱,5個(gè)樣品表現(xiàn)出熏蒸活性,占樣品總數(shù)的5.01%,其中S 303(EAE)對赤擬谷盜熏蒸活性最強(qiáng),LC50為29.304mg/mL(陽性藥物敵敵畏LC50=0.023mg/mL);L 301(EAE)對煙草甲熏蒸活性最強(qiáng),LC50為43.414mg/mL(陽性藥物敵敵畏LC50=0.141mg/ml)。驅(qū)避活性研究結(jié)果顯示,5個(gè)樣品對赤擬谷盜表現(xiàn)出較強(qiáng)的驅(qū)避活性,占樣品總數(shù)的5.21%;6個(gè)樣品對煙草甲表現(xiàn)出較強(qiáng)的驅(qū)避活性,占樣品總數(shù)的6.25%,其中R 304(NBE)對兩種試蟲的驅(qū)避活性都較強(qiáng),在10000ppm,作用2h,驅(qū)避率分別為94%、84%,驅(qū)避活性等同于同等條件下的陽性物質(zhì)DEET。二色補(bǔ)血草內(nèi)生真菌多糖的提取及抗氧化活性研究結(jié)果顯示,32株內(nèi)生真菌胞內(nèi)及胞外64個(gè)多糖樣品含量各異,其中多糖含量在0.5mg/mL以上的共10個(gè)樣品,占樣品總數(shù)的10.42%,R 202胞外多糖含量最高為0.91mg/mL。多糖抗氧化研究結(jié)果表明,58個(gè)樣品表現(xiàn)出一定的總還原能力,占樣品總數(shù)的90.63%;55個(gè)樣品表現(xiàn)出DPPH清除活性,占樣品總數(shù)的85.94%;54個(gè)樣品表現(xiàn)出羥基自由基清除活性,占樣品總數(shù)的84.37%。本實(shí)驗(yàn)對二色補(bǔ)血草全株進(jìn)行內(nèi)生真菌的分離,闡明了其內(nèi)生真菌的種類及種屬分布情況,并對其內(nèi)生真菌發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行抑菌、抗氧化、α-糖苷酶抑制、抗蟲的活性篩選研究,獲得高活性菌株,為尋找新的天然抗氧化劑、抗菌藥源以及天然殺蟲劑等奠定基礎(chǔ),也為二色補(bǔ)血草內(nèi)生真菌的綜合開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：蘭州理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R915

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2328786