【摘要】：金屬釩配合物具有抗菌、抗糖尿病、抗瘧疾、抗病毒和抗腫瘤等生物活性。其中,氧釩配合物具有較好的抗腫瘤活性已有報道,但作用機制還未明確。課題組前期的實驗提示當分子中存在較大的π共軛平面結(jié)構(gòu)時,釩配合物表現(xiàn)出更好的DNA鍵合、斷裂能力,其體外抗腫瘤活性更好。因此,為進一步探討釩配合物的構(gòu)效關(guān)系,本文通過增大配體的共軛體系并改變配體上不同取代基的電性,合成了系列含鹵素多齒不對稱氧釩配合物。本文的主要工作如下:1.設計以氨基硫脲類偶氮Schiff堿為主配體,1,10-鄰菲Up啉及其衍生物為輔助配體合成了[VO(MAST)(phen)](1),[VO(MAST)(BrPIP)](2),[VO(MAAST)(CF3PIP)](3),[VO(FAST)(phen)](4)和[VO(ClAST)(phen)](5)。采用元素分析,IR,ESI-MS,1H NMR和13C NMR等方法表征配合物的結(jié)構(gòu)。新型配合物與DNA的相互作用情況則使用UV-Vis、穩(wěn)態(tài)熒光淬滅、粘度測試及瓊脂糖凝膠電泳等方法測試。實驗結(jié)果顯示,這些配合物均以插入方式與DNA作用,結(jié)合常數(shù)Kb值大小順序為:23514,其中2和3可明顯斷裂PBR322 DNA。2.以異煙肼類偶氮Schiff堿為主配體,1,10-鄰菲Up啉為輔助配體合成了[VO(MASI)(phen)](6),[VO(FASI)(phen)](7),[VO(ClASI)(phen)](8),[VO(ClASPT)(phen)](9)。運用元素分析,IR、ESI-MS、1H NMR和13C NMR等方法表征配合物結(jié)構(gòu)。通過UV-Vis、熒光光譜滴定、粘度測試及瓊脂糖凝膠電泳法研究了配合物與DNA的相互作用。實驗結(jié)果表明,與第二章所合成的配合物類似,這些配合物與DNA的鍵和模式為插入結(jié)合,Kb值大小順序為:7968。其中,7和8具有更好的斷裂質(zhì)粒DNA的能力。3.以順鉑(Cisplatin)作為陽性對照,采用MTT法對上述配合物的抗Hela和HepG2腫瘤細胞活性進行了篩選。細胞活性實驗的結(jié)果顯示,該類化合物都具有較好的抗腫瘤活性,且[VO(MAST)(BrPIP)](2)和[VO(MAAST)(CF3PIP)](3)對Hela腫瘤細胞的抑制作用強于順鉑,并且這兩種配合物對Hela細胞的抑制更為敏感。根據(jù)篩選實驗,選取[VO(MAST)(BrPIP)](2)和[VO(MAAST)(CF3PIP)](3)運用流式細胞術(shù),對細胞的凋亡率及周期阻滯情況進行了檢測,進一步考察其抗腫瘤的作用機制。實驗表明:化合物2和3都能誘導腫瘤細胞進行凋亡,且這種凋亡具有濃度依賴性;同時發(fā)現(xiàn)[VO(MAST)(BrPIP)](2)和[VO(MAAST)(CF3PIP)](3)阻滯G0/G1期。初步探討了這些氧釩配合物的誘導凋亡及阻滯細胞周期的作用情況。采用western blot的方法,測試了配合物[VO(MAST)(BrPIP)](2)和[VO(MAAST)(CF3PIP)](3)對p53蛋白表達變化的影響。結(jié)果顯示,配合物的存在可使p53表達增加,這在一定程度上說明化合物進入細胞使細胞內(nèi)后p53與DNA的平衡被打破,導致p53表達異常。其次,使用活性氧試劑盒檢測[VO(MAST)(BrPIP)](2)和[VO(MAAST)(CF3PIP)](3)對細胞內(nèi)的ROS的影響。實驗顯示,配合物的加入可使活性氧顯著增高。因為過量的ROS會使線粒體膨大,進而引起線粒體等功能異常,誘導細胞凋亡。因此,本文采用Rh123熒光探針考察了[VO(MAST)(BrPIP)](2)和[VO(MAAST)(CF3PIP)](3)對細胞的線粒體膜電位影響,結(jié)果表明,配合物的加入使線粒體的膜電位產(chǎn)生較大的下降。本文實驗結(jié)果提示,這些新型配合物誘導細胞凋亡的途徑很有可能是先與細胞內(nèi)的DNA相互作用,影響了DNA與p53蛋白的平衡,導致p53的表達增加,胞內(nèi)ROS增加,導致線粒體損傷,跨膜電位崩潰,從而誘導細胞凋亡。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：廣東藥科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R914;R96

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本文編號：2321099