【摘要】：左旋四氫巴馬汀(levo-tetrahydropalmatine,l-THP),藥品名羅通定,是我國科學(xué)家從延胡索屬和千金藤屬植物中提取得到的延胡索乙素左旋體,具有良好的中樞性鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜和安定作用,作為鎮(zhèn)痛藥在我國已有近半個世紀的臨床應(yīng)用歷史。近年來的研究發(fā)現(xiàn),l-THP可有效抑制多種成癮藥物的成癮依賴形成、維持和復(fù)吸,具有良好的治療藥物成癮的臨床應(yīng)用前景。由于l-THP在我國批準進入臨床應(yīng)用的時間較早,早期的藥代動力學(xué)、分布和排泄研究主要應(yīng)用3H標記的dl-THP進行實驗,缺乏非標記藥物在動物和人體代謝處置的系統(tǒng)研究。已有的研究表明,l-THP在動物體內(nèi)廣泛代謝,主要的I相代謝產(chǎn)物是具有藥理活性的單去甲基產(chǎn)物,但原藥和活性產(chǎn)物的代謝處置性質(zhì)以及體內(nèi)暴露水平的相關(guān)性尚不清楚,且缺乏人體代謝的數(shù)據(jù),為此,本課題的目的是研究l-THP及其主要代謝產(chǎn)物的大鼠血漿動力學(xué)、組織分布和排泄,鑒定l-THP在人體的主要代謝產(chǎn)物和消除途徑,并比較大鼠和人的體外代謝性質(zhì)差異。在此基礎(chǔ)上,建立l-THP在人體的基于生理的藥代動力學(xué)模型(PBPK模型),模擬預(yù)測嚴重肝損傷患者等特殊人群的藥代動力學(xué)和基于代謝酶的人體藥-藥相互作用風(fēng)險,為了解l-THP發(fā)揮藥理效應(yīng)的物質(zhì)基礎(chǔ)、指導(dǎo)新適應(yīng)證的臨床研究和安全有效用藥,提供科學(xué)依據(jù)和實驗資料。本課題的研究內(nèi)容和結(jié)果總結(jié)如下:1.應(yīng)用LC-MS/MS技術(shù),建立并全面驗證了定量檢測生物樣品中l(wèi)-THP及其6個去甲基代謝產(chǎn)物(2-DM、3-DM、9-DM、10-DM、2,3-DM和2,10-DM)的方法;在樣品前處理中應(yīng)用特異性酶水解,同時對上述代謝產(chǎn)物的葡糖醛酸結(jié)合物和硫酸結(jié)合物進行間接定量。方法靈敏、快速和可靠,可滿足l-THP及其代謝產(chǎn)物的體內(nèi)外代謝處置研究需求。2.大鼠灌胃給藥l-THP(9 mg·kg-1)的血漿藥代動力學(xué)結(jié)果顯示,原藥的吸收迅速,消除半衰期為6.5 h,口服生物利用度為29.7%;血漿中主要檢測到原藥去甲基產(chǎn)物2-DM、3-DM和10-DM、及其去甲基產(chǎn)物的葡糖醛酸結(jié)合物,其中2-DM-Glu和10-DM分別是暴露水平最高的結(jié)合和游離產(chǎn)物,代謝產(chǎn)物的血漿消除較慢,且存在雙峰現(xiàn)象。3.l-THP灌胃給藥后在組織器官廣泛分布,1 h時大部分組織的原藥濃度達峰,分布濃度由高至低依次為:小腸肝睪丸腎肺腦心脾血;組織中的主要產(chǎn)物為2-DM、3-DM和10-DM及其葡糖醛酸結(jié)合物,分布規(guī)律與原藥相似;l-THP及其去甲基產(chǎn)物易于透過血腦屏障,腦組織中可檢測到較高濃度的3-DM和10-DM及少量的葡糖醛酸結(jié)合物;原藥和去甲基產(chǎn)物與大鼠和人的血漿蛋白結(jié)合率在78%~92%的范圍內(nèi),與腦勻漿的蛋白結(jié)合率大于91%。4.大鼠口服l-THP后,僅有0.22%的原藥經(jīng)尿糞排泄;藥物主要以產(chǎn)物形式經(jīng)腎排泄,72 h的累積尿排泄率為28.5%,主要產(chǎn)物是去甲基的葡糖醛酸和硫酸結(jié)合物;72 h糞累積排泄率為6.12%,主要產(chǎn)物是游離形式的去甲基產(chǎn)物。5.在膽管插管大鼠上,l-THP及其產(chǎn)物48 h的膽汁累積排泄率為灌胃劑量的70.1%,藥物主要以去甲基的葡糖醛酸和硫酸結(jié)合物形式排出,原型的累積排泄率小于0.05%;應(yīng)用配對大鼠模型,確定l-THP去甲基代謝產(chǎn)物存在腸肝循環(huán),主要產(chǎn)物的腸肝循環(huán)系數(shù)在30-66%之間,經(jīng)膽汁排泄的產(chǎn)物可在腸道分解并再次吸收利用,這可能是產(chǎn)物藥時曲線出現(xiàn)雙峰和消除緩慢的原因之一。6.體外肝微粒體孵育實驗結(jié)果表明,去甲基反應(yīng)是l-THP在人和大鼠肝微粒體的主要I相代謝途徑,主要產(chǎn)物是2-DM、3-DM和10-DM;同時采用底物消除法和產(chǎn)物生成法進行酶動力學(xué)研究,發(fā)現(xiàn)人肝微粒體中2-去甲基化反應(yīng)的Km和Vmax值與原藥消除的相當,提示2-去甲基化是l-THP在人肝微粒體的主要代謝途徑;去甲基產(chǎn)物的肝微粒體消除則以II相葡糖醛酸結(jié)合為主。7.應(yīng)用重組人源CYP同工酶和人肝微粒體的代謝表型研究表明,l-THP的I相去甲基代謝由CYP3A4、CYP2D6、CYP1A2、CYP2C9和CYP2C19多酶介導(dǎo),其中CYP3A4是主要的同工酶,貢獻率為54.0%,其次是CYP2D6,貢獻率為11.3%;10-DM和3-DM主要由CYP3A4介導(dǎo)生成,2-DM僅由CYP2D6介導(dǎo)生成,臨床需要關(guān)注CYP3A4和CYP2D6相關(guān)的藥-藥相互作用。8.應(yīng)用LC/UV和UPLC-QTOF-MS/MS技術(shù),研究了l-THP在人肝微粒體、血漿、尿和糞樣品中的代謝產(chǎn)物,共檢測鑒定到20個代謝產(chǎn)物,其中15個是首次鑒定的產(chǎn)物;I相代謝反應(yīng)包括去甲基化、雙去甲基化、三去甲基化、單加氧、脫氫和二氫二醇化反應(yīng)。II相代謝反應(yīng)主要為去甲基產(chǎn)物的葡糖醛酸和硫酸結(jié)合反應(yīng)。9.健康志愿者口服羅通定片(90 mg)后,考察了原藥和代謝產(chǎn)物的血漿暴露水平和排泄途徑,2-DM-Glu、10-DM-Sul和3-DM-Sul是血循環(huán)中主要的藥物相關(guān)成分,暴露水平高于原藥;l-THP及其產(chǎn)物的72 h累積尿和糞排泄率分別為38.0%和8.3%,其中原藥總排泄率僅為0.7%;口服l-THP在人體的主要消除途徑之一是去甲基化的葡糖醛酸和硫酸結(jié)合,隨后結(jié)合產(chǎn)物經(jīng)腎排泄。10.l-THP在人和大鼠的代謝處置存在一定的種屬差異,人血漿中硫酸結(jié)合物的暴露水平較高,而大鼠血漿中主要以去甲基或葡糖醛酸結(jié)合物為主,未檢測到硫酸結(jié)合物;藥物口服后去甲基相關(guān)的產(chǎn)物在人體的累積尿排泄率顯著高于大鼠。11.應(yīng)用Gastro PlusTM的PBPK建模軟件,成功建立并驗證了l-THP在大鼠和健康人體的PBPK模型,將模型用于特殊人群藥代行為和藥物相互作用潛能的預(yù)測,結(jié)果顯示,與正常人群相比,l-THP在嚴重肝損傷人群的代謝消除降低,血漿暴露顯著增高;在CYP2D6超強代謝者,l-THP的代謝清除加快,血藥濃度顯著下降;l-THP與CYP同工酶強抑制劑酮康唑(CYP3A)或奎尼丁(CYP2D6)合用時,原藥的AUC分別提高至單藥組的2.78倍或1.57倍,臨床應(yīng)用時需要關(guān)注上述特殊人群的藥代動力學(xué)行為改變以及基于CYP酶抑制的藥-藥相互作用。本論文有如下新發(fā)現(xiàn)或創(chuàng)新點:1.本研究建立了同時定量分析生物樣品中l(wèi)-THP原藥、去甲基產(chǎn)物和結(jié)合物的LC-MS/MS方法;2.通過l-THP及其產(chǎn)物在大鼠的血漿藥代動力學(xué)和組織分布研究,發(fā)現(xiàn)3-DM和10-DM是血漿和組織中暴露水平較高的活性產(chǎn)物,它們可能對原藥藥理作用有貢獻,這一結(jié)果為認識l-THP藥效學(xué)的分子基礎(chǔ)提供了科學(xué)依據(jù);3.定性和定量分析l-THP在人血循環(huán)和排泄物中的產(chǎn)物發(fā)現(xiàn),2-DM-Glu和10-DM-Sul是人血漿的主要成分,暴露水平高于原藥;去甲基的葡糖醛酸和硫酸結(jié)合物經(jīng)腎臟排泄,是l-THP在人體的主要消除途徑之一;l-THP在人和大鼠的代謝處置存在一定的差異。這些結(jié)果首次揭示了l-THP在人體的代謝清除特征;4.PBPK模型的模擬預(yù)測顯示,嚴重肝損傷將顯著影響l-THP的代謝清除;而在CYP2D6超強代謝人群中,原藥的代謝加快,血漿AUC顯著降低;與CYP3A和2D6的抑制劑合用,存在一定的藥-藥相互作用風(fēng)險;預(yù)測結(jié)果為臨床安全有效用藥提供了指導(dǎo)。
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【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R96

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本文編號：2301169