【摘要】：目的探討雷公藤甲素誘導(dǎo)人急性T淋巴細(xì)胞白血病Jurkat細(xì)胞凋亡分子機(jī)制。方法 MTT檢測(cè)雷公藤甲素對(duì)Jurkat細(xì)胞的增殖抑制作用,然后用Origin Pro8計(jì)算出IC50。按照0、2、4、8、16 nmol/L濃度雷公藤甲素處理Jurkat細(xì)胞48 h,然后用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡變化。用半定量RT-PCR法檢測(cè)加藥處理后各組Np9基因m RNA的表達(dá)水平變化并用Kodak 1D 3.6軟件對(duì)條帶進(jìn)行定量分析。采用統(tǒng)計(jì)軟件分析Np9轉(zhuǎn)錄抑制與細(xì)胞凋亡的相關(guān)性。Western Blotting檢測(cè)Np9下游信號(hào)分子c-myc,β-catenin,ERK,AKT和Notch1蛋白的變化。結(jié)果雷公藤甲素呈劑量依賴(lài)性抑制Jurkat細(xì)胞的增殖,其IC50為12.7 nmol/L。雷公藤甲素呈劑量依賴(lài)誘導(dǎo)Jurkat細(xì)胞凋亡。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示,雷公藤甲素呈劑量依賴(lài)方式抑制Jurkat細(xì)胞中Np9基因的m RNA的轉(zhuǎn)錄水平。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)Np9轉(zhuǎn)錄抑制與細(xì)胞凋亡之間具有顯著的相關(guān)性(R2=0.907)。Western Blotting方法結(jié)果發(fā)現(xiàn)雷公藤甲素在抑制Np9 m RNA轉(zhuǎn)錄同時(shí)伴有其下游信號(hào)分子c-myc,β-catenin,ERK,AKT和Notch1蛋白表達(dá)水平降低。結(jié)論下調(diào)HERV-K Np9 m RNA及其下游信號(hào)分子c-myc,β-catenin,ERK,AKT和Notch1蛋白水平是雷公藤甲素誘導(dǎo)人急性T淋巴細(xì)胞白血病Jurkat細(xì)胞凋亡的重要分子機(jī)制之一。
[Abstract]:Objective to investigate the molecular mechanism of triptolide induced apoptosis in human acute T lymphocyte leukemia (Jurkat) cells. Methods MTT was used to detect the inhibitory effect of triptolide on the proliferation of Jurkat cells, and then IC50. was calculated by Origin Pro8. The Jurkat cells were treated with triptolide for 48 h according to the concentration of triptolide 816 nmol/L, and then apoptosis was detected by flow cytometry. The expression level of m RNA of Np9 gene in each group was detected by semi-quantitative RT-PCR method. The band was quantitatively analyzed by Kodak 1D3.6 software. The changes of c-myc, 尾 -catenin,ERK,AKT and Notch1 proteins in the downstream signal molecules of Np9 were detected by. Western Blotting analysis of the correlation between Np9 transcription suppression and apoptosis by statistical software. Results triptolide inhibited the proliferation of Jurkat cells in a dose-dependent manner, and its IC50 was 12.7 nmol/L.. Triptolide induced apoptosis of Jurkat cells in a dose-dependent manner. Further experimental results showed that triptolide inhibited the transcription of m RNA of Np9 gene in Jurkat cells in a dose-dependent manner. Statistical analysis showed that there was a significant correlation between Np9 transcription inhibition and apoptosis (R2O0.907). Western Blotting method). The results showed that triptolide inhibited the transcription of Np9 m RNA with its downstream signaling molecules c-myc, 尾-catenin,ERK,. The expression of AKT and Notch1 protein decreased. Conclusion the down-regulation of HERV-K Np9 m RNA and its downstream signaling molecules c-myc, 尾-catenin,ERK,AKT and Notch1 proteins is one of the important molecular mechanisms of triptolide inducing apoptosis in Jurkat cells of human acute T lymphocyte leukemia.
【作者單位】： 浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院血液科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81270601,81470306)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R96

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2300145