發(fā)布時(shí)間：2018-10-25 17:20

【摘要】：背景：目前關(guān)于無(wú)機(jī)納米粒的毒性研究很多,而關(guān)于有機(jī)可降解納米載體的毒性研究很少。殼聚糖納米粒作為載體在腦部疾病治療中應(yīng)用廣泛,并且常用吐溫80修飾用于促進(jìn)腦部遞藥,然而罕有關(guān)于其安全性的研究。本研究對(duì)殼聚糖納米粒、吐溫80修飾殼聚糖納米粒對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的影響進(jìn)行了研究。方法：1.通過離子凝膠化法制備殼聚糖納米粒(CS-NPs)、吐溫80修飾殼聚糖納米粒(TmCS-NPs),并對(duì)其粒徑、電位、形態(tài)進(jìn)行了表征；2.在SD大鼠上評(píng)價(jià)兩種納米粒的神經(jīng)毒性,首先采用羅丹明B異硫氰酸酯(RBITC)對(duì)殼聚糖進(jìn)行熒光標(biāo)記,制備熒光標(biāo)記的CS-NPs、TmCS-NPs,觀察熒光標(biāo)記的納米粒在大鼠腦部分布,而后連續(xù)七天尾靜脈注射高(30mg/kg)、中(10mg/kg)、低(3mg/kg)劑量納米混懸液,并對(duì)主要聚集腦區(qū)的氧化應(yīng)激標(biāo)志物水平、組織病理學(xué)變化及GFAP、NeuN的表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè),此外,還對(duì)大鼠體重變化情況進(jìn)行統(tǒng)計(jì)；3.在斑馬魚胚胎模型上評(píng)價(jià)CS-NPs、TmCS-NPs的發(fā)育神經(jīng)毒性,首先將胚胎暴露于一系列濃度梯度(5mg/L, 10mg/L,20mg/L,30mg/L,40mg/L,50mg/L) CS-NPs、 TmCS-NPs混懸液,統(tǒng)計(jì)各組胚胎死亡率、孵化率及畸形發(fā)生情況,并計(jì)算兩種納米粒的LC50,以1/2 LC50作為暴毒濃度對(duì)CS-NPs、TmCS-NPs暴露后胚胎神經(jīng)行為及相關(guān)機(jī)制進(jìn)行研究,神經(jīng)行為評(píng)價(jià)指標(biāo)包括19～27hpf胚胎自主運(yùn)動(dòng)、72hpf幼魚機(jī)械觸碰逃避反應(yīng)、120hpf幼魚自由游泳活力及光暗周期反應(yīng)活力測(cè)定,機(jī)制研究包括胚胎活性氧檢測(cè)、流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定凋亡、吖啶橙染色評(píng)價(jià)凋亡、蘇木精-伊紅染色、透射電鏡觀察幼魚肌肉形態(tài)、整體胚胎免疫組化染色評(píng)價(jià)初級(jí)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元和次級(jí)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元軸突的發(fā)育。結(jié)果：離子凝膠化法制備的CS-NPs、TmCS-NPs平均粒徑分別為247±20 nm、251±15nm,制備的納米粒粒徑均一,形態(tài)圓整,zeta電位分別為24.4±3.9 mV、26.5±4.2mV。利用RBITC對(duì)殼聚糖進(jìn)行熒光標(biāo)記,本研究觀察了250 nm左右CS-NPs、 TmCS-NPs在大鼠體內(nèi)分布情況,檢測(cè)到TmCS-NPs在腦部的熒光信號(hào),而未檢測(cè)到CS-NPs在腦部的熒光信號(hào),250nm左右TmCS-NPs主要分布在大鼠的大腦皮層和小腦。連續(xù)七天尾靜脈注射TmCS-NPs后,大腦皮層、小腦的氧化應(yīng)激反應(yīng)均不明顯,但與空白對(duì)照組相比,大鼠體重降低明顯,且呈劑量依賴。此外,TmCS-NPs處理后,皮層局部區(qū)域神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)變?yōu)樗笮?且隨著TmCS-NPs注射劑量的增高,神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)變化越明顯。TmCS-NPs暴露還導(dǎo)致小腦GFAP表達(dá)降低。這些現(xiàn)象都表明TmCS-NPs具有潛在神經(jīng)毒性。進(jìn)一步在斑馬魚胚胎模型上對(duì)CS-NPs、TmCS-NPs的發(fā)育神經(jīng)毒性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。斑馬魚胚胎暴露于一系列濃度梯度CS-NPs、TmCS-NPs混懸液后,胚胎死亡率增加、孵化率降低,且呈劑量依賴。CS-NPs、TmCS-NPs在胚胎上的LC50分別為23.26mg/L、25.06mg/L。 CS-NPs、TmCS-NPs暴露后,觀察到幼魚發(fā)生游囊關(guān)閉及脊椎彎曲,隨著濃度的升高,畸形發(fā)生率增加。在相對(duì)安全的濃度(1/2 LC50)下,納米粒暴露可引起胚胎運(yùn)動(dòng)行為的紊亂：TmCS-NPs暴露降低了20hpf、21hpf時(shí)胚胎的自主運(yùn)動(dòng)頻率；CS-NPs、TmCS-NPs暴露降低了72hpf時(shí)幼魚的機(jī)械觸碰逃避反應(yīng)；CS-NPs暴露增加了120hpf時(shí)光周期試驗(yàn)中黑暗周期幼魚的運(yùn)動(dòng)活力。機(jī)制研究結(jié)果顯示,CS-NPs、TmCS-NPs暴露導(dǎo)致胚胎ROS水平升高,但凋亡末見明顯變化,納米粒暴露還導(dǎo)致幼魚的肌肉肌束溶解、肌細(xì)胞核皺縮及線粒體腫脹,抑制幼魚初級(jí)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元、次級(jí)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元軸突的發(fā)育。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R96

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 孫皎;丁婷婷;;兩種納米陶瓷顆粒對(duì)細(xì)胞DNA損傷反應(yīng)的研究[J];口腔材料器械雜志;2010年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前1條

1 Chunhui LAI;Xia YU;Yuan XIE;Jian HE;Yi PENG;Sufang ZHOU;Xiaoxun XIE;Guorong LUO;Nuo ZHOU;Yongxiang ZHAO;Xiaoling LU;;Anti-tumor Immune Response of Folate-Conjugated Chitosan Nanoparticles Containing the IP-10 Gene in Mice with Hepatocellular Carcinoma[A];第十六屆中國(guó)科協(xié)年會(huì)——分13感染、免疫和疫苗論壇論文集[C];2014年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前4條

1 楊克琴;碳納米管/殼聚糖納米粒子復(fù)合物的制備、表征及其蛋白質(zhì)固載性能研究[D];湖南師范大學(xué);2011年

2 錢麗紅;幾種天然保鮮劑的抑菌機(jī)理[D];上海海洋大學(xué);2010年

3 桂凱;一種遞送基因的非病毒載體納米顆粒的研制[D];中南大學(xué);2007年

4 張敬迎;稀土摻雜NaYF_4上轉(zhuǎn)換納米材料的合成及表征[D];海南大學(xué);2013年

，

本文編號(hào)：2294309