【摘要】：目的:為了滿足單克隆抗體藥物N-糖分析的實際需要,建立穩(wěn)定、靈敏、可靠的單克隆抗體藥物N-糖分析的分析方法。方法:采用全新的肼基衍生化試劑對N-糖進行衍生化,并對衍生化后的N-糖進行超高效液相色譜高分辨質(zhì)譜分析。采用與開源數(shù)據(jù)庫比對和多級質(zhì)譜對檢測到的N-糖進行初步定性。結(jié)果:新的肼基衍生化分析方法將單克隆抗體藥物N-糖分析的靈敏度提高了2~3個數(shù)量級,與傳統(tǒng)2-氨基苯甲酰胺(2-AB)衍生化相比,靈敏度也有3倍的提高。新的方法條件溫和,保證N-糖結(jié)構(gòu)的完整性,實現(xiàn)了多種不穩(wěn)定唾液酸修飾N-糖的檢出。二級質(zhì)譜的應用提高了結(jié)構(gòu)分析的效率與針對性。結(jié)論:本文建立了可靠、靈敏、高效的單克隆抗體藥物N-糖分析方法,該方法在實際應用中具有極大的應用前景。
[Abstract]:Objective: to establish a stable, sensitive and reliable method for the analysis of monoclonal antibody drug N-sugar. Methods: N- sugar was derivatized by a novel hydrazinyl derivatization reagent, and the N- sugar was analyzed by high performance liquid chromatography and high resolution mass spectrometry. The detected N- sugar was preliminarily identified by comparison with open source database and multistage mass spectrometry. Results: the sensitivity of the monoclonal antibody N- sugar analysis was improved by 2 ~ 3 orders of magnitude by the new hydrazine derivatization method, which was 3 times higher than that of the traditional 2-aminobenzoamide (2-AB) derivatization. The condition of the new method is mild, and the integrity of N-sugar structure is guaranteed, and many unstable sialic acid modified N-sugar can be detected. The application of secondary mass spectrometry improves the efficiency and pertinence of structure analysis. Conclusion: a reliable, sensitive and effective method for the analysis of N-sugar was established.
【作者單位】： 中國醫(yī)學科學院藥物研究所;
【基金】：國家事業(yè)單位基本科研業(yè)務費(2014CX10) 自科基金項目(81402892)
【分類號】：R917

【共引文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 王承健;王仲孚;;糖鏈的生物質(zhì)譜分析[J];生命科學;2011年06期

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1 王光裕;高凱;王軍志;;以TNF-α為靶點的大分子拮抗藥物及其質(zhì)控方法研究進展[A];2013年中國藥學大會暨第十三屆中國藥師周論文集[C];2013年

2 Henry Shion;Asish Chakraborty;陳熙;宋蘭坤;孫慶龍;賈偉;周春喜;Scott Berger;St.John Skilton;;液質(zhì)聯(lián)用(LC/MS)技術(shù)在單克隆抗體(曲妥珠單抗)結(jié)構(gòu)表征上的應用[A];2012年中國藥學大會暨第十二屆中國藥師周論文集[C];2012年

3 Xiaoxi Zhang;Wei Jia;Udayanath Aich;Ilze Birznieks;Julian Saba;Xiaodong Liu;Rosa Viner;Zhiqi Hao;Gurmil S. Gendeh;Srinivasa Rao;reas Huhmer;Yury Agroskin;Chris Pohl;;Integrated LC/MS Workflow of Labeled and Native N-Glycans Released from Proteins and Antibodies Using a Mixed-Mode Column and a Q Exactive Mass Spectrometer[A];第十屆全國生物醫(yī)藥色譜及相關(guān)技術(shù)學術(shù)交流會論文集[C];2014年

相關(guān)博士學位論文 前5條

1 楊剛龍;肝細胞癌患者血清糖蛋白質(zhì)組及其糖鏈結(jié)構(gòu)研究[D];西北大學;2013年

2 竇鵬;順式二羥基生物分子分析新方法研究[D];南京大學;2011年

3 張偉;基于生物質(zhì)譜的蛋白質(zhì)N-糖基化定性與定量新技術(shù)[D];復旦大學;2012年

4 李歐;Paenibacillus elgii B69胞外多糖結(jié)構(gòu)鑒定及生物合成途徑研究[D];浙江大學;2014年

5 張啟偉;N-聚糖標記物鑒定方法的研究及應用[D];華中科技大學;2014年

相關(guān)碩士學位論文 前9條

1 李倩;葡寡糖的衍生化及吸收研究[D];第四軍醫(yī)大學;2010年

2 何椿鵬;不同TNFR-Fc融合蛋白N-糖基化結(jié)構(gòu)分析及其對蛋白功能影響的初步研究[D];廣西醫(yī)科大學;2013年

3 馬恬然;禽流感病毒神經(jīng)氨酸酶的分離純化及其糖鏈譜研究[D];西北大學;2013年

4 邢偉博;兩種不同來源卵黏蛋白O-及N-糖鏈的電噴霧電離質(zhì)譜（ESI-MS）分析[D];西北大學;2013年

5 王光裕;TNFR:Fc融合蛋白生物類似藥質(zhì)量可比性初步研究&CD22單抗效應子功能的初步探究[D];中國食品藥品檢定研究院;2013年

6 姜寬;兩種不同來源的卵轉(zhuǎn)鐵蛋白N-糖鏈的質(zhì)譜分析與比較[D];西北大學;2014年

7 袁江北;糖蛋白的N-糖鏈的化學法釋放新方法研究[D];西北大學;2014年

8 潘麗英;基于電噴霧電離質(zhì)譜分析的人肝癌細胞HepG2與正常肝細胞L02 N，O-糖鏈的定性定量比較[D];西北大學;2014年

9 匡敏;基于功能化磁性納米材料的糖肽富集與質(zhì)譜鑒定新方法研究[D];復旦大學;2013年

【相似文獻】

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3 何勇虹;李宜成;彭志紅;汪榮泉;;黏蛋白3羧基末端蛋白酶切的阻斷及N-糖基化的抑制對其細胞膜定位的影響[J];解放軍醫(yī)學雜志;2008年07期

4 張慶柱,小宮山忠純;酵母殺手毒素的作用機制及應用研究進展[J];中國藥理學通報;2003年04期

5 ;[J];;年期

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2 張蕾;李雁潔;歐陽浩淼;周慧;金城;;蛋白質(zhì)N-糖基化加工對煙曲霉(Aspergillus fumigatus)極性生長的影響[A];2008年全國糖生物學學術(shù)會議論文摘要[C];2008年

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1 李艷青;辣椒疫霉（Phytophthora capsici）多聚半乳糖醛酸酶功能研究及N-糖基化對其致病性影響[D];山東農(nóng)業(yè)大學;2011年

2 白海紅;基于新材料的N-糖基化蛋白質(zhì)、多肽及糖鏈富集鑒定新方法研究[D];北京理工大學;2015年

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本文編號：2285109