【摘要】：一、研究背景與目的 百草枯(paraquat, PQ)中毒是繼有機磷農(nóng)藥中毒之后最常見的農(nóng)藥中毒,其中毒后最嚴(yán)重的損害為急性肺損傷和隨后的進(jìn)行性肺纖維化,死亡率達(dá)80%,當(dāng)前無特效治療方法。氟非尼酮(fluorofenidone, AKF)是一種潛在治療PQ致急性肺損傷的化合物,但其口服或注射給藥后在體內(nèi)分布廣泛,無靶向性,將AKF蓄積在肺組織,針對性地緩解PQ中毒引起的肺部損傷,可更好地發(fā)揮AKF治療作用。本課題以乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)為載體材料,采用乳化溶劑揮發(fā)法制備肺靶向載AKF微球(microspheres, MS),考察其經(jīng)尾靜脈注射后在大鼠肺組織的靶向性,并初步探討其對PQ致大鼠急性肺損傷的治療作用。 二、方法與結(jié)果 1. AKF-PLGA-MS的制備及制劑特性評價 以PLGA為載體材料,采用乳化溶劑揮發(fā)法制備AKF-PLGA-MS。以包封率(EE%)和載藥量(DL%)為評價指標(biāo),單因素考察了PVA濃度(%)、藥載比(w/w)、有機相與水相體積比(v/v)、攪拌速度(rpm)等處方、工藝因素對微球制劑特征的影響,再通過正交設(shè)計確定處方,并對制備的微球外觀形態(tài)、粒徑分布、包封率和載藥量、穩(wěn)定性、體外釋放等進(jìn)行評價。 AKF-PLGA-MS優(yōu)化處方為：二氯甲烷與PVA(2%)溶液體積比1：10,AKF與PLGA質(zhì)量比1.5：5,攪拌速度1500rpm；優(yōu)化處方制得的微球平均粒徑為18.1μm,跨距為1.5,粒徑7-30μm的微球占80%左右；包封率及載藥量分別為80.2±2.5%、8.2±1.9%;該微球在25℃及4℃下儲存15天,其外觀形態(tài)、包封率和載藥量無明顯變化,穩(wěn)定性良好。同法制備了平均粒徑為3.9μm,跨距為1.6的微球,用于對照。 AKF-PLGA-MS在體外6h內(nèi)累積釋藥約20%,96h累計釋藥67%；體外釋藥曲線符Korsmeyer-Peppas模型,Q=11.141·t0.292292(R2=0.9797),提示AKF-PLGA-MS在PBS (pH7.4)中釋藥機制為Fick's擴散。 2. AKF-PLGA-MS在PQ致急性肺損傷大鼠體內(nèi)分布及靶向性評價 以雄性SD大鼠為研究對象,HPLC法測定血漿及組織中AKF濃度,考察AKF注射液、AKF-PLGA-MS (3.9μm)、AKF-PLGA-MS (18.1μm)體內(nèi)分布情況,并以相對攝取率、靶向效率、峰濃度比等評價其靶向性。 結(jié)果發(fā)現(xiàn),在給藥后的全部取樣時間點,AKF-PLGA-MS (18.1μm)組肺組織中AKF濃度均高于注射液組和AKF-PLGA-MS (3.9μm)組,且第12、24、48h時差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；同時,AKF-PLGA-MS (18.1μm)組肺組織中AKF濃度顯著高于同組大鼠血漿、心、肝、脾、腎組織中濃度；在24、48h時,注射液組AKF濃度低于檢測限,而AKF-PLGA-MS (18.1μm)組大鼠肺組織的濃度為2.7±1.2、1.5±0.8μg·mL-1,表明AKF-PLGA-MS (18.1μm)較注射液有緩釋性。 與注射液相比,AKF-PLGA-MS (18.1μm)肺相對攝取率(Rel)為19.9,與AKF-PLGA-MS (3.9μm)相比,肺相對攝取率(Re2)為8.7。AKF-PLGA-MS (18.1μm)肺組織相對其他組織或血液的靶向效率Te(心、肝、脾、腎的靶向效率分別為83.9、21.5、27.1、29.4、44.8)均遠(yuǎn)大于1。AKF-PLGA-MS (18.1μm)、AKF-PLGA-MS (3.9μm)及AKF注射液肺總靶向系數(shù)(TCe)分別為86.8%、18.9%、13.6%。AKF-PLGA-MS (18.1μm)和AKF-PLGA-MS (3.9μm)肺峰濃度比(Ce)分別為5.7、1.2,表明AKF-PLGA-MS (18.1μm)明顯提高了藥物在肺中的濃度。 3.AKF對PQ致大鼠急性肺損傷的治療作用 為評價AKF對PQ致大鼠急性肺損傷的治療作用,設(shè)置以下動物組(SD雄性大鼠)：空白對照組；陰性對照組；AKF注射液治療組;AKF-PLGA-MS (3.9μm)治療組；AKF-PLGA-MS (18.1μm)治療組。除空白組(注射生理鹽水)外,其余各組大鼠經(jīng)腹腔注射PQ溶液(30mg/kg)建立急性肺損傷模型,0.5h后,分別尾靜脈注射給藥(劑量相當(dāng)于30mg/kg AKF)。給藥后0.5、6、12、24、48h時間點處死大鼠,取肺組織,觀察肺部病理變化并測定肺組織中TNF-α、IL-1β和NF-κB的表達(dá)水平。 結(jié)果表明：與空白組相比,陰性對照組各時間點肺TNF-α、IL-1β和NF-κB顯著升高(除0.5h, TNF-a P0.05外,各時間點P0.05)；各治療組TNF-α、IL-1β和NF-κB亦顯著升高(P0.05),但均低于陰性對照組。與陰性對照組相比,在第0.5和24h時AKF-PLGA-MS(18.1μm)和AKF-PLGA-MS(3.9μm)組肺IL-1p顯著降低(P0.05)；第48h時AKF-PLGA-MS (18.1μm)組肺內(nèi)TNF-α、IL-1β、NF-κB明顯下降(P0.05),表明AKF-PLGA-MS (18.1μm)可抑制TNF-α、 IL-1β、NF-κB的表達(dá)(P0.05)；第48h時,AKF-PLGA-MS (3.9μm)組肺內(nèi)IL-1β、NF-κB顯著下降(P0.05),對TNF-α的作用不明顯(P0.05)；第48h時注射液組IL-1p顯著下降(P0.05),對TNF-α, NF-κB作用不明顯(P0.05),表明AKF能有效控制部分炎癥因子的表達(dá)。且第48h時AKF-PLGA-MS (18.1μm)治療組肺IL-1β、NF-κB和注射液治療組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。 病理結(jié)果顯示,陰性對照組大鼠6h后出現(xiàn)典型的急性肺損傷,肺毛細(xì)管血管擴張,炎性細(xì)胞浸潤,24h和48h時肺泡結(jié)構(gòu)破壞明顯,肺泡間隔增厚；各治療組24和48h也出現(xiàn)了病理改變,但程度上較陰性對照組輕,部分肺泡腔內(nèi)可見少量滲出、出血。 三、結(jié)論 以PLGA為載體,采用乳化溶劑揮發(fā)法可制備包封率及載藥量較高、穩(wěn)定性好的AKF-PLGA-MS。與AKF注射液和粒徑為3.9μm的AKF-PLGA-MS相比,粒徑為18.1μm的AKF-PLGA-MS有顯著的靶向性,可明顯提高肺組織中AKF濃度,對PQ致大鼠急性肺損傷有更好的治療效果；AKF減輕大鼠PQ中毒所致急性肺損傷,可能與抑制TNF-α、IL-1β和NF-κB的激活有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R943;R965

【參考文獻(xiàn)】

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1 曹鈺,曾智,余海放;急性百草枯中毒所致肺損傷的機制[J];華西醫(yī)學(xué);2005年02期

2 邱海波,楊毅,周韶霞,許紅陽,劉少華,鄭瑞強,黃英姿;核因子-κB在小鼠急性肺損傷中的作用[J];中華急診醫(yī)學(xué)雜志;2003年01期

3 薛維亮;胡峰;杜莉;;百草枯中毒機制與臨床治療的研究進(jìn)展[J];實用醫(yī)藥雜志;2010年02期

4 田偉;張晨;楊新玲;;綠茶多酚及灸百會穴對百草枯損傷C57小鼠的保護(hù)性研究[J];中國熱帶醫(yī)學(xué);2008年05期

5 朱桂林;楊佩鋼;陳衛(wèi)平;施惠平;李毅敏;陳三風(fēng);史軍;陸志義;種影影;高建波;;甘草制劑治療百草枯中毒的動物實驗觀察[J];中國工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志;2008年05期

6 田英平;邱澤武;;百草枯中毒的救治[J];中國實用內(nèi)科雜志;2007年15期

7 劉艷;毛毅敏;孫瑜霞;;百草枯染毒急性肺損傷大鼠肺組織NO、ET和TNF-α的含量及莖葉人參皂苷的干預(yù)研究[J];時珍國醫(yī)國藥;2010年03期

8 曹鈺;鄭志潔;姚堯;胡海;余海放;周毅武;;依地酸鈣鈉干預(yù)急性百草枯中毒大鼠肺損傷的實驗[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2005年12期

9 韓國強;邱俏檬;盧中秋;賀曉燕;洪廣亮;何飛;梁歡;;二巰丙磺鈉對百草枯急性中毒大鼠肺組織基質(zhì)金屬蛋白酶-9 mRNA及其金屬蛋白酶組織抑制劑-1 mRNA表達(dá)的影響[J];中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志;2010年01期

10 曾國云;陳吉萍;;關(guān)于靶向給藥的研究[J];中國社區(qū)醫(yī)師(醫(yī)學(xué)專業(yè));2010年26期

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本文編號：2278970