【摘要】：社會(huì)的飛速發(fā)展帶給人們飲食和生活方式巨大改善的同時(shí)，心腦血管疾病的發(fā)生率也越來(lái)越高。缺血性心臟病是嚴(yán)重危害人類健康的常見(jiàn)病與多發(fā)病，心力衰竭是其主要死因。及時(shí)恢復(fù)冠脈血流是挽救急性缺血心肌的根本措施，但心肌在恢復(fù)血流的同時(shí)也會(huì)導(dǎo)致再灌注損傷，即心肌缺血/再灌注損傷，如何有效減輕這種損傷，使再灌注治療最大獲益，成為了缺血性心臟病治療的最大挑戰(zhàn)。 肺動(dòng)脈高壓是以肺血管阻力和肺動(dòng)脈壓力升高為特點(diǎn)的一組病理生理綜合征，也是臨床上一種嚴(yán)重且難治的疾病。其病理特征包括肺小動(dòng)脈的血管痙攣、內(nèi)膜增生和重構(gòu)以及由此導(dǎo)致的肺動(dòng)脈阻力進(jìn)行性升高，最終伴發(fā)右心室肥厚和終末期心臟衰竭。目前，肺動(dòng)脈高壓的治療缺乏高效特性的治療方法，預(yù)后差，致死致殘率高，尚無(wú)特效藥物。 基礎(chǔ)和臨床研究證明：心肌缺血/再灌注和肺動(dòng)脈高壓的病理過(guò)程都存在氧自由基損傷和內(nèi)源性NO合成量減少的問(wèn)題。單硝酸異山梨醇酯是對(duì)心肌缺血/再灌注損傷與缺氧性肺動(dòng)脈高壓有效的NO供體藥物，但自身沒(méi)有抗氧化作用，且長(zhǎng)期使用會(huì)產(chǎn)生耐藥性。天然產(chǎn)物阿魏酸和白藜蘆醇都是自由基清除劑，對(duì)心肌缺血/再灌注損傷與肺動(dòng)脈高壓有一定療效。 近年來(lái)，人們?yōu)榱嗽黾铀幬锏幕钚�，已�?jīng)開(kāi)始趨向于把NO供體結(jié)構(gòu)引入到已知藥物分子中去，因此，本課題基于前藥設(shè)計(jì)策略，將具有清除自由基作用的阿魏酸和白藜蘆醇（或與其母核結(jié)構(gòu)類似的衍生物）作為先導(dǎo)化合物，與NO供體單硝酸異山梨醇酯通過(guò)橋連基偶合，合成具有雙功能的治療缺血/再灌注損傷和防治肺動(dòng)脈高壓的NO供體型衍生物AcFA-201和BZ-1，并對(duì)其藥效學(xué)進(jìn)行了初步研究。 本課題主要進(jìn)行了兩部分實(shí)驗(yàn)的研究： 第一部分： 1.化合物AcFA-201的合成 采用官能團(tuán)改構(gòu)的方法將單硝酸異山梨醇酯的羥基轉(zhuǎn)變?yōu)榘被�，再將其與乙酰阿魏酸相連，經(jīng)純化后得到了結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的化合物AcFA-201。對(duì)AcFA-201的合成方法進(jìn)行了優(yōu)化，，確定混合酸酐法為最優(yōu)方法。通過(guò)質(zhì)譜、紅外、核磁氫譜等方法對(duì)化合物AcFA-201進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征，并對(duì)其理化性質(zhì)進(jìn)行了研究。 2. AcFA-201抗大鼠心肌缺血/再灌注損傷的初步藥效學(xué)研究 建立大鼠心肌缺血/再灌注模型，缺血0.5h，再灌注3h。將48只SD大鼠隨機(jī)分為6組：①假手術(shù)（SHAM）組；②心肌缺血/再灌注（MI/R）組；③MI/R+阿魏酸鈉（SF）治療組；④MI/R+單硝酸異山梨醇酯（IM）治療組；⑤MI/R+AFI治療組；⑥MI/R+AcFA-201治療組。SF、IM治療組于大鼠手術(shù)前15min，腹腔注射對(duì)應(yīng)藥物40mg/kg， AFI及AcFA-201治療組于大鼠手術(shù)前2h，腹腔注射對(duì)應(yīng)藥物10mg/kg。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，對(duì)三方面的指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)：1)大鼠心功能檢測(cè)（包括左室發(fā)展壓LVDP、左室等容收縮/舒張期壓力上升或下降最大速率±dp/dtmax）；2)使用NO試劑盒進(jìn)行血清NO水平檢測(cè)；3)采用比色法進(jìn)行血清中CK、LDH、 SOD活性和H2O2、MDA含量的檢測(cè)。 檢測(cè)結(jié)果表明，與假手術(shù)組相比，MI/R組的LVDP、±dp/dtmax、血清中NO含量、SOD活性均顯著降低（P0.05），血清中CK、LDH活性和H2O2、MDA含量均顯著升高（P0.05）。與MI/R組相比，四組治療組的各項(xiàng)指標(biāo)均有了顯著改善（P0.05或P0.01）。與阿魏酸鈉組、單硝酸異山梨醇酯組相比，AcFA-201治療組左室發(fā)展壓、左室等容收縮/舒張期壓力上升或下降最大速率（±dp/dtmax）明顯提高（P0.05），血清中CK、LDH的活性和H2O2、MDA的含量降低而SOD活性和NO含量顯著升高（P0.05或P0.01）；與AFI組相比，AcFA-201組各項(xiàng)指標(biāo)均無(wú)顯著性差異（P0.05）。 3. AcFA-201與AFI在模擬胃腸液中的穩(wěn)定性比較 采用體外孵育的方法，將具有酰胺鍵結(jié)構(gòu)的AcFA-201與具有酯鍵結(jié)構(gòu)的AFI在模擬胃腸液中的穩(wěn)定性進(jìn)行比較。結(jié)果顯示，酰胺鍵結(jié)構(gòu)比酯鍵結(jié)構(gòu)在模擬胃腸液中更為穩(wěn)定，表明AcFA-201更適合開(kāi)發(fā)為口服藥物。 第二部分： 1.化合物BZ-1的合成 采用柏琴反應(yīng)合成甲基化異白藜蘆醇中間體，再與單硝酸異山梨醇酯相連，得到了新的目標(biāo)化合物BZ-1。對(duì)BZ-1的合成方法進(jìn)行了優(yōu)化，研究了3種合成方法，結(jié)果證實(shí)縮合法反應(yīng)條件最為適宜，產(chǎn)率較高。并對(duì)BZ-1進(jìn)行了理化性質(zhì)研究和質(zhì)譜、紅外、核磁氫譜等結(jié)構(gòu)表征。 2. BZ-1的小鼠體內(nèi)NO釋放實(shí)驗(yàn) 以單硝酸異山梨醇酯為對(duì)照，對(duì)BZ-1的小鼠體內(nèi)NO釋放進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，BZ-1可在小鼠體內(nèi)穩(wěn)定地釋放NO，其釋放量隨時(shí)間延長(zhǎng)而增加，但總體上弱于單硝酸異山梨醇酯。 3. BZ-1的耐缺氧實(shí)驗(yàn) 以單硝酸異山梨醇酯為對(duì)照，進(jìn)行了小鼠耐缺氧實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)果表明，BZ-1高劑量組可顯著延長(zhǎng)小鼠缺氧下的存活時(shí)間，而單硝酸異山梨醇酯不具有此作用。 4. BZ-1對(duì)肺動(dòng)脈高壓模型大鼠的初步藥效學(xué)研究 采用一次性注射MCT法建立大鼠肺動(dòng)脈高壓模型，將50只SD大鼠隨機(jī)分為5組：正常對(duì)照組；模型組；BZ-1低劑量組；BZ-1中劑量組；BZ-1高劑量組。注射MCT次日低、中、高劑量組分別腹腔注射BZ-15、15、25mg/kg，正常對(duì)照組及模型組腹腔注射等體積溶劑（吐溫80：生理鹽水=1:40，體積比），每天一次，持續(xù)4周。實(shí)驗(yàn)完成后，進(jìn)行以下指標(biāo)的檢測(cè)：1)平均肺動(dòng)脈壓及右心肥大指數(shù)檢測(cè)；2)全血粘度值及紅細(xì)胞聚集指數(shù)檢測(cè)；3)使用試劑盒進(jìn)行血清和肺組織勻漿NO含量及NOS活力檢測(cè)；4) HE染色法制作肺組織病理切片，觀察肺部病理改變并測(cè)定肺部小動(dòng)脈血管壁厚度與血管外徑的百分比（WT%）以及血管壁面積與血管總面積的百分比（WA%）。 結(jié)果表明，與正常對(duì)照組相比，模型組大鼠的平均肺動(dòng)脈壓、右心肥大指數(shù)、全血粘度值、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、肺部病理切片中的WT%以及WA%值均顯著升高（P0.05），血清和肺組織勻漿NO含量及NOS活力均顯著降低（P0.05）。與模型組相比，BZ-1中、高劑量組的平均肺動(dòng)脈壓、右心肥大指數(shù)、全血粘度值、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、WT%以及WA%值均顯著降低（P0.05或P0.01），血清及肺組織勻漿的NO含量和NOS活力顯著升高（P0.05或P0.01）。低劑量組與模型組比較無(wú)顯著性差異（P0.05）。 本課題基于前藥設(shè)計(jì)策略，設(shè)計(jì)合成了兩種新的雙功能NO供體型衍生物AcFA-201與BZ-1，通過(guò)對(duì)這兩種化合物的合成方法進(jìn)行優(yōu)化，確定了各自的最佳合成路線并分別對(duì)目標(biāo)化合物進(jìn)行了結(jié)構(gòu)表征。同時(shí)對(duì)這兩種化合物進(jìn)行了初步藥效評(píng)價(jià)，其中AcFA-201抗大鼠心肌缺血/再灌注損傷的初步藥效學(xué)研究表明，AcFA-201可有效改善缺血/再灌注心臟功能，減輕心肌損傷，其作用機(jī)制可能是通過(guò)上調(diào)心肌組織NO含量，擴(kuò)張血管，并減輕缺血/再灌注大鼠心肌的氧化應(yīng)激損傷，從而起到保護(hù)心肌的作用。該化合物所具有的酰胺鍵結(jié)構(gòu)在模擬胃腸液中代謝穩(wěn)定，提示其具有開(kāi)發(fā)為口服藥物的優(yōu)勢(shì)。BZ-1對(duì)野百合堿所致大鼠肺動(dòng)脈高壓模型的初步藥效學(xué)研究表明，BZ-1可有效改善肺動(dòng)脈高壓模型大鼠的肺血管收縮性，增加肺組織中NO含量和NOS的活性，改善血液流變，從而降低肺動(dòng)脈高壓，并顯著減輕肺小血管管壁增厚及管腔狹窄程度，從而改善了肺組織的病理性重構(gòu)，BZ-1還可在小鼠體內(nèi)穩(wěn)定釋放NO并延長(zhǎng)小鼠缺氧下的存活時(shí)間，其作用機(jī)制可能與其增加NO含量，改善血液流變性和抗缺氧有關(guān)，因此，BZ-1有望開(kāi)發(fā)為防治肺動(dòng)脈高壓的新型藥物。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R914.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2277076