【摘要】：T淋巴細(xì)胞過度活化和凋亡不足與許多自身免疫疾病息息相關(guān)。與能量代謝相關(guān)的分子很可能在免疫性疾病的病理過程中發(fā)揮重要的作用,但是其具體機(jī)制還不清楚。我們在研究中發(fā)現(xiàn)格列苯脲的一種新的藥理作用機(jī)制,即它選擇性誘導(dǎo)活化T細(xì)胞凋亡,進(jìn)而抑制T細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。在給予Con A,anti-CD3/anti-CD28或者PMA等刺激時,T細(xì)胞會啟動它的活化和增殖。格列苯脲對靜息狀態(tài)的T淋巴細(xì)胞幾乎無影響,但對T細(xì)胞活化增殖72小時后的細(xì)胞數(shù)呈現(xiàn)劑量依賴式的抑制。對T細(xì)胞活化過程檢測發(fā)現(xiàn),格列苯脲對T細(xì)胞活化marker無影響,活化24小時產(chǎn)生的細(xì)胞因子水平無影響,但CFSE染色結(jié)果顯示增殖后的細(xì)胞數(shù)減少。說明格列苯脲選擇性地作用于活化后的T淋巴細(xì)胞。我們發(fā)現(xiàn),格列苯脲能誘導(dǎo)活化T淋巴細(xì)胞凋亡,表現(xiàn)為上調(diào)cleaved-caspases、cleaved-PARP等;增加Fas的表達(dá)、下調(diào)細(xì)胞型FLICE抑制蛋白的表達(dá);引起活化的T細(xì)胞的細(xì)胞周期阻滯。機(jī)制研究發(fā)現(xiàn),格列苯脲對誘導(dǎo)活化T細(xì)胞的凋亡的機(jī)制與其經(jīng)典作—抑制ATP敏感性K+通道沒有關(guān)系,而是通過抑制另一個細(xì)胞內(nèi)重要能量平衡分子—ATP依賴的蛋白激酶(Adenosine 5'-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK)的磷酸化。最后,我們利用T細(xì)胞相關(guān)動物實(shí)驗(yàn),三硝基氯苯(picryl chloride,PCl)誘發(fā)的接觸性皮炎小鼠模型,證實(shí)了格列苯脲具有治療免疫性疾病的功能。因此,本論文說明格列苯脲能夠選擇性地誘導(dǎo)活化T淋巴細(xì)胞凋亡并且治療自身免疫性疾病,同時也提示了抑制細(xì)胞內(nèi)AMPK磷酸化水平可作為自身免疫性疾病的治療策略。
[Abstract]:Over-activation and insufficient apoptosis of T lymphocytes are closely related to many autoimmune diseases. The molecules related to energy metabolism may play an important role in the pathological process of immune diseases, but its mechanism is not clear. We have found a new pharmacological mechanism of glibenclamide which selectively induces apoptosis of activated T cells and thus inhibits the inflammatory response mediated by T cells. The T cells activated and proliferated after stimulation of Con anti-CD3 / anti-CD28 or PMA. Glibenclamide had little effect on resting T lymphocytes, but showed a dose-dependent inhibition on the number of T lymphocytes after 72 hours of activation and proliferation. The results of T cell activation showed that glibenclamide had no effect on T cell activation marker, and had no effect on cytokines produced after 24 hours of activation, but CFSE staining showed that the number of proliferated cells decreased. The results suggest that glibenclamide selectively acts on activated T lymphocytes. We found that glibenclamide could induce apoptosis of activated T lymphocytes, such as up-regulating cleaved-caspases,cleaved-PARP, increasing the expression of Fas, down-regulating the expression of cell-type FLICE inhibitor protein, and inducing the cell cycle arrest of activated T cells. The mechanism of glibenclamide induced apoptosis of activated T cells was not related to its classic inhibition of ATP sensitive K channels. Instead, it inhibits the phosphorylation of Adenosine 5'-monophosphate (AMP)-activated protein kinase,AMPK, an important energy balance molecule in another cell. Finally, we demonstrated that glibenclamide has the ability to treat immune diseases in contact dermatitis mouse model induced by trinitrochlorobenzene (picryl chloride,PCl). Therefore, this paper suggests that glibenclamide can selectively induce apoptosis of activated T lymphocytes and treat autoimmune diseases. It also suggests that inhibition of intracellular AMPK phosphorylation can be used as a therapeutic strategy for autoimmune diseases.
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R96

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本文編號：2218536