目的變應(yīng)性鼻炎(allergic rhinitis, AR)是耳鼻咽喉-頭頸外科的常見(jiàn)病。鼻腔黏液高分泌是AR氣道慢性炎癥的重要病理生理改變。初步研究表明,苯環(huán)喹溴銨(bencycloquidium bromide, BCQB)作為一種新型的選擇性M1/M3受體拮抗劑,對(duì)AR展示了良好的療效。本研究擬通過(guò)離體和在體兩部分實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探討苯環(huán)喹溴銨對(duì)AR黏液高分泌的作用效果以及具體的調(diào)控機(jī)制。方法第一部分離體實(shí)驗(yàn)中,通過(guò)改良的酶消化法分離細(xì)胞和無(wú)血清培養(yǎng)法進(jìn)行了人鼻黏膜上皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)；給予10-、10-7和10-8mol/L BCQB處理15min后,加入100μmol/L的卡巴可刺激,24h后用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELI SA)方法測(cè)定黏蛋白5 AC (mucin 5AC, MUC5AC)的含量。第二部分在體實(shí)驗(yàn)中,用卵清白蛋白(ovabumin, OVA)致敏Sprague-Dawley (SD)大鼠建立AR動(dòng)物模型。給予BCQB治療后,進(jìn)行大鼠鼻部癥狀的評(píng)估。收集鼻腔灌洗液用ELISA測(cè)定細(xì)胞因子(IL-6, IL-13和TNF-α)的蛋白水平和組胺濃度。提取大鼠鼻黏膜總蛋白用Western-blot方法測(cè)定黏蛋白MUC5AC, p38絲裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase, p38 MAPK),磷酸化p38 MAPK,細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases, ERK)和磷酸化ERK；鼻黏膜胞漿蛋白測(cè)定磷酸化核轉(zhuǎn)錄因子-κB (nuclear factor kappa B, NF-κB)(p65和p50)；鼻黏膜胞核蛋白測(cè)定NF-κB (p65和p50)。用實(shí)時(shí)定量PCR測(cè)定鼻黏膜IL-6、IL-13、TNF-α和MUC5AC的mRNA水平。另外,用甲苯胺藍(lán)染色、蘇木精-伊紅染色、阿利新藍(lán)-過(guò)碘酸雪夫染色和免疫組織化學(xué)染色(MUC5AC,磷酸化p38 MAPK,磷酸化ERK,NF-κB p50和NF-κB p65)觀察AR大鼠組織病理學(xué)的改變。結(jié)果BCQB能明顯抑制卡巴可誘導(dǎo)的人鼻黏膜上皮細(xì)胞黏蛋白MUC5AC的高分泌。在OVA致敏的SD大鼠中,鼻部給予苯環(huán)喹溴銨不僅能緩解鼻部的癥狀：包括鼻漏、鼻癢和噴嚏,而且能夠在蛋白水平和mRNA水平抑制代表炎性分泌的黏液蛋白MUC5AC的過(guò)表達(dá)。苯環(huán)喹溴銨抑制了鼻黏膜組胺的釋放和肥大細(xì)胞的聚集。IL-6、IL-13和TNF-α的蛋白水平和mRNA水平也被BCQB抑制。組織病理學(xué)研究表明了苯環(huán)喹溴銨緩解OVA導(dǎo)致的嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn),鼻黏膜損傷,杯狀細(xì)胞的增生／化生。另外,BCBQ能顯著降低AR大鼠鼻黏膜MAPK (p38 MAPK和ERK)磷酸化總量和磷酸化的比率,抑制NF-κB (p65和p50)核轉(zhuǎn)位和細(xì)胞漿的磷酸化。結(jié)論BCQB能夠緩解AR的黏液高分泌,減少炎性黏蛋白MUC5AC的分泌,此作用可能牽涉到對(duì)細(xì)胞因子(IL-6、IL-13和TNF-α)、組胺、信號(hào)通路MAPK (p38 MAPK和ERK)和NF-κB (p65和p50)的作用。BCQB非神經(jīng)元型的抑制黏液MUC5AC分泌從而緩解AR慢性炎癥的作用,能夠?yàn)橹委烝R新藥的開(kāi)發(fā)研制提供新的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R965

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本文編號(hào)：2123661