本文選題：琥珀酰明膠注射液 + 佳樂施��； 參考：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究背景siRNA通過抑制靶mRNA轉(zhuǎn)錄而引起特異性基因沉默,它已經(jīng)成為治療基因過表達(dá)引起的疾病的新型治療策略。但是,siRNA在臨床應(yīng)用前還遇到了很多障礙,包括靶向性差、細(xì)胞攝取率低等,通過將siRNA整合到各種靶向性配體中可解決以上問題。整合素是細(xì)胞粘附分子的一種,是連接細(xì)胞核與外環(huán)境的跨膜受體。其中,整合素α v β 3受體在腫瘤血管中有很高表達(dá),但是在正常內(nèi)皮細(xì)胞中幾乎不表達(dá)。環(huán)狀的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(cRGD)是一種整合素配體,可被α vβ 3受體特異性識(shí)別。我們利用這一特點(diǎn),以cRGD為載體,合成介導(dǎo)siRNA聚集在腫瘤的新型腫瘤靶向藥物。然而,我們發(fā)現(xiàn)cRGD-siRNA分子系統(tǒng)給藥會(huì)引發(fā)腎毒性,必須找到可以有效防治cRGD-siRNA腎毒性的藥物。琥珀酰明膠注射液,即佳樂施,是低血容量時(shí)的膠體血漿代用品,研究表明,佳樂施可以將RAFT-RGD的重吸收降低50%以上。本實(shí)驗(yàn)將佳樂施和cRGD-siRNA經(jīng)過尾靜脈混合注射到小鼠體內(nèi),進(jìn)行血液分析、病理切片、TUNEL分析等試驗(yàn),驗(yàn)證佳樂施對(duì)cRGD-siRNA分子導(dǎo)致的腎毒性的減輕作用,為今后cRGD-siRNA的臨床治療掃除障礙、提供支持。方法1.cRGD-siRNA分子的制備和鑒定將環(huán)狀cRGD肽通過巰基與siRNA分子正義鏈的5'端共軛連接,得到cRGD-siRNA分子,用HPLC和質(zhì)譜測定得到的cRGD-siRNA分子的純度和結(jié)構(gòu)。2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組和血清生化指標(biāo)測定將成年雄性昆明小鼠隨機(jī)分成以下三組,每組6只:1)cRGD-siRNA組:尾靜脈注射cRGD-siRNA(5 nmol);2)cRGD-siRNA和佳樂施混合注射組:尾靜脈注射cRGD-siRNA(5 nmol)和佳樂施(4 mg)混合液;3)對(duì)照組:尾靜脈注射生理鹽水(100 μl)。每隔48h給藥一次,共5次,最后一次給藥兩天后,取血分離血清,測定每組血清肌酐和尿素氮的含量。3.組織學(xué)觀察和TUNEL染色處死小鼠,取出腎臟,進(jìn)行常規(guī)HE染色并觀察。切片脫蠟后用蛋白酶k溶液孵育,然后用含有FITC-12-dUTP標(biāo)記混合物的TdT孵育緩沖液孵育,在DAPI中染色,熒光顯微鏡下觀察并計(jì)算TUNEL凋亡指數(shù)。結(jié)果1.cRGD-siRNA分子的制備和鑒定本課題成功制備了如下siRNA序列:sense strand:5'-(mG)(mA)(mG)AACCUCACAUGGU(mA)(mC)(mA)dTdT-3';antisense strand:5'-(mU)(mG)(mU)ACCAUGUGAGGUU(mC)(mU)(mC)dTdT-3'。HPLC 測定cRGD-siRNA分子的純度可達(dá)81%,質(zhì)譜測定其分子質(zhì)量與理論分子質(zhì)量一致。2.血清生化指標(biāo)測定cRGD-siRNA組血清尿素氮和肌酐含量比對(duì)照組明顯升高,而佳樂施共同給藥組血清尿素氮和肌酐明顯比cRGD-siRNA組低(P0.05)。3.組織學(xué)觀察和TUNEL染色HE染色結(jié)果顯示cRGD-siRNA組大量腎小管上皮細(xì)胞水腫、壞死,紅細(xì)胞滲出,部分腎小球萎縮,而佳樂施混合注射組腎損傷明顯減輕。TUNEL結(jié)果表明,佳樂施混合注射組凋亡細(xì)胞較少,cRGD-siRNA組凋亡細(xì)胞明顯增多,兩組的細(xì)胞凋亡指數(shù)有顯著差異(P0.05)。結(jié)論成功合成了 cRGD-siRNA分子并證實(shí)了佳樂施可明顯減輕cRGD-siRNA導(dǎo)致的腎損傷,提示佳樂施在cRGD-siRNA臨床應(yīng)用過程中可能存在潛在的利用價(jià)值,具有較好的臨床研究前景。
[Abstract]:A new type of tumor targeting drug for the treatment of cRGD - siRNA has been prepared and identified . The results showed that the purity of cRGD - siRNA was higher than that of cRGD - siRNA group ( P0.05 ) .
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R965

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2070991