本文選題：高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法 + 納米增強免疫比濁法　； 參考：《山東大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的:1.建立簡便、靈敏的高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)測定患者血漿中5-氟尿嘧啶(5-FU)、紫杉醇(PTX)和多西紫杉醇(DTX)的濃度。2.采用免疫比濁法即納米增強免疫比濁法(nanoparticle immunoassay,NPIA)測定患者血漿5-FU、PTX和DTX濃度。3.比較LC-MS/MS和NPIA兩種方法5-FU、PTX和DTX血漿濃度測定結(jié)果的相關(guān)性。方法:1.LC-MS/MS方法:5-FU:色譜條件:色譜柱:DiamonsilC18柱(150 mm × 4.6 mm,5μm);流動相:0.05%氨水:甲醇(2:98,v/v),在線脫氣;流速:0.3 mL/min;柱溫:30℃。血漿樣本經(jīng)液液萃取處理后,進樣體積為10 μL進行分析。PTX和DTX:色譜條件:色譜柱:Diamonsil C18柱(150 mm × 4.6 mm,5 μm);流動相:0.1%甲酸:乙腈(40:60,v/v),在線脫氣;流速:0.6 mL/min;柱溫:30℃。血漿樣本經(jīng)沉淀蛋白處理后,進樣體積10μL進行分析。2.NPIA方法:5-FU、PTX和DTX血漿樣品按一定操作程序(采用專屬試劑盒)處理后,注入CS-600B全自動生化儀進行分析。3.統(tǒng)計學分析:(1)以LC-MS/MS方法測定值為自變量X,以NPIA方法測定值為因變量Y,經(jīng)SPSS.17.0進行線性回歸分析,建立一元線性回歸模型,評價兩者相關(guān)性。(2)對LC-MS/MS方法和NPIA方法測定血漿5-FU、PTX和DTX濃度的結(jié)果進行Bland-Altman數(shù)據(jù)處理,評價兩種方法測定結(jié)果的一致性。結(jié)果:1.本課題建立的LC-MS/MS方法專屬性強,血漿中的雜質(zhì)對5-FU、PTX和DTX的測定無影響。5-FU、PTX和DTX的方法學驗證中,基質(zhì)效應(yīng)平均值分別為104.40%、107.18%和112.57%,絕對回收率的平均值分別為80.61%、99.41%和95.76%,日內(nèi)和日間的準確度與精密度分別為88.2%-109.4%、100.1%-115.7%和 95.1%-100.2%,RSD%為 3.95-13.69、2.49-9.66 和 2.88-11.9,5-FU、PTX 和 DTX 分別在 10-800 ng/mL、10-200 ng/mL 和 10-2000 ng/mL 范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系(R20.99)。5-FU、PTX和DTX的血漿樣本穩(wěn)定性好,符合測定要求。2.LC-MS/MS和NPIA兩種方法測定5-FU、PTX和DTX的線性回歸方程分別為 y=1.019x-8.746(R=0.939,p0.001)、y=0.839x+17.975(R=0.878,p0.001)和y=1.105x+10.003(R=0.965,p0.001),因此可認為兩種方法顯著相關(guān)。3.LC-MS/MS方法測定5-FU、PTX和DTX樣本平均值分別為273.82 ng/mL、43.56 ng/mL 和 378.1 ng/mL,NPIA 方法測定平均值分別為 270.18 ng/mL、54.49 ng/mL和427.7ng/mL,兩種方法的95%的置信區(qū)間分別為-132.5～125.2ng/mL、-11.6～33.4 ng/mL和-231.7～331.1 ng/mL說明兩種檢測方法無顯著性差異,可認為兩種檢測方法測定結(jié)果的一致性良好。結(jié)論:1.本課題分別建立了檢測血漿中5-FU、PTX和DTX濃度的LC-MS/MS方法,此方法高效、靈敏、準確,適用于5-FU、PTX和DTX血漿濃度監(jiān)測。2.NPIA方法測定患者血漿5-FU、PTX和DTX濃度,方法靈敏、高效、簡便、快速、自動化程度高、樣品需求體積量少。適用于5-FU、PTX和DTX血濃度臨床常規(guī)監(jiān)測。3.NPIA方法測定5-FU、PTX和DTX血濃度值和LC-MS/MS方法測定值,二者具有顯著相關(guān)和臨床一致性界限。NPIA作為常規(guī)臨床監(jiān)測方法可以在臨床上推廣應(yīng)用,這可為臨床醫(yī)師診斷患者病情和為患者設(shè)計個體化用藥方案提供一定的理論依據(jù)。
[Abstract]:Purpose 1. A simple and sensitive high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS / MS) was established to determine the concentrations of 5-fluorouracil (5-FU), paclitaxel (PTX) and docetaxel (DTX) in plasma of patients. The plasma concentrations of 5-FU PTX and DTX were measured by nanoparticle immunoturbidimetry (nanoparticle immunoturbidimetry). To compare the correlation between 5-FUUPTX and DTX plasma concentration by LC-MS / MS and NPIA. Methods: 1. LC-MS / MS method: chromatographic condition: column: Diamonsil C18 (150mm 脳 4.6mm ~ 5 渭 m); mobile phase: 0.05% ammonia: methanol (2: 98 v / v), on-line degassing; flow rate: 0.3 mL / min; column temperature: 30 鈩，

本文編號：2054719