本文選題：琺菲亞 + 氨基酸測定��； 參考：《山東中醫(yī)藥大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的:建立包含琺菲亞水分、總灰分、浸出物、氨基酸、蛻皮甾酮含量及指紋圖譜的質量標準體系,同時探索琺菲亞對睡眠的改善作用及其作用機制。方法:(1)采用柱前衍生RP-HPLC法同時測定琺菲亞中14種水解氨基酸,衍生化試劑為異硫氰酸苯酯,HPLC-PDA法測其蛻皮甾酮的含量及其指紋圖譜的建立,色譜條件:色譜柱為waters Xbridge RP18柱(4.6mm×250mm,5μm),流動相組成為乙腈和水,梯度洗脫,流速為:0.8m L/min,檢測波長為265nm,柱25℃。(2)采用腹腔注射閾劑量和閾下劑量戊巴比妥鈉的協(xié)同睡眠實驗,觀察統(tǒng)計小鼠睡眠潛伏期、睡眠時間和睡眠發(fā)生率,研究琺菲亞對睡眠的改善作用,同時采用ELISA法測定小鼠皮質、海馬和下丘腦中DA、NE、5-HT、GIU、NO、NOS的含量研究其改善睡眠作用的機制。結果:(1)4批次琺菲亞中平均水分、總灰分、浸出物的含量分別在8.32%~8.48%、3.93%~4.12%、14.72%~15.47%和12.12%~13.07%范圍以內;被測定的14種氨基酸在一定濃度范圍內具有良好的線性關系,線性相關系數(shù)r值均大于0.9990,加樣回收率(n=6)為90.2%~105.1%之間,在24小時內氨基酸衍生溶液穩(wěn)定性較好;琺菲亞中蛻皮甾酮的含量在279ng/m L~1023ng/m L范圍內呈現(xiàn)良好的線性關系(R2=0.9992),標準曲線為Y=53364X+23088,加樣回收率(n=6)為99.54%(RSD=1.35%)�，m菲亞中蛻皮甾酮的平均含量為8.904mg/g;建立了琺菲亞的HPLC-PDA指紋圖譜,獲得了以蛻皮甾酮為參照物在內的10個共有峰,對10個批次樣品進行色譜指紋圖譜分析,建立琺菲亞的共有模式,以夾角余弦計算樣品與共有模式之間的相似度,結果相似度均大于0.97。(2)琺菲亞對閾上劑量戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠時間影響的研究表明:與空白對照組相比較,地西泮組能顯著縮短小鼠的睡眠潛伏期并延長戊巴比妥鈉所致小鼠的睡眠時長(P0.01),表明該實驗方法可靠。與空白對照組相比較,琺菲亞水提物組較其他各組對縮短小鼠睡眠潛伏期和延長睡眠時間效果更顯著(P0.05)。(3)琺菲亞對閾下劑量戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠發(fā)生率影響的研究表明:與空白對照組相比較,地西泮組能明顯增高小鼠的睡眠發(fā)生率(P0.01),表明該實驗方法可靠。與空白對照組相比較,琺菲亞水提組較其他各組對增加小鼠睡眠發(fā)生率效果更顯著(P0.05)(4)琺菲亞有效部位(水提物)改善睡眠的作用在一定劑量范圍內呈現(xiàn)一定的量效關系,隨著給藥量增加,其改善睡眠的作用增強,主要表現(xiàn)為延長戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠時間(P0.05)和縮短其睡眠潛伏期(P0.05),其起效劑量為12g生藥/kg體重,最佳有效劑量為16g生藥/kg體重。(5)琺菲亞有效部位(水提物)改善睡眠的作用在一定時間范圍內呈現(xiàn)一定的時效關系,隨著給藥時間的增加,其改善睡眠的作用增強。主要表現(xiàn)為延長戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠時間(P0.05)和縮短其睡眠潛伏期(P0.05),其起效給藥時間為10天,最佳給藥時間為14天。(6)琺菲亞水提物(16g生藥/kg體重),連續(xù)給藥14天,與空白組比較,能顯著降低小鼠海馬中DA、NE(P0.05)和5-HT(P0.05)的含量,明顯增加小鼠海馬中NO(P0.05)和NOS的含量;能顯著降低小鼠皮質中DA、GLU的含量(P0.01),有降低小鼠皮質中NE、5-HT的趨勢,顯著增加小鼠皮質中NOS的含量(P0.05);能顯著降低小鼠下丘腦中GLU的含量(P0.05),有增加小鼠下丘腦中NO含量的趨勢。結論:建立了琺菲亞質量標準體系,可以對不同產(chǎn)地琺菲亞中化學成分的含量進行差異比較,為琺菲亞的質量控制與評價提供一定的科學依據(jù)�，m菲亞改善睡眠作用的有效部位為水提部位,最佳給藥量為16g生藥/kg體重,最佳給藥時間為14天;琺菲亞改善睡眠作用的機制為減少DA、NE、GLU等中樞性神經(jīng)遞質在腦中的分泌、釋放,促進NOS的合成、分泌,提高NO在腦內的含量,并抑制5-羥色胺能神經(jīng)元,降低5-羥色胺的分泌實現(xiàn)改善睡眠的作用。初步推斷琺菲亞改善睡眠作用的有效物質為蛻皮甾酮。
[Abstract]:Objective : To establish a quality standard system containing water , total ash , extract , amino acid , ecdysterone and fingerprint of F . fafiya , and to explore the effect and mechanism of F . fafiya on sleep . Methods : ( 1 ) The HPLC - PDA method was used to determine the content of ecdysterone and its fingerprint . The chromatographic conditions were as follows : ( 1 ) The chromatographic column was Waters Xbridge RP18 column ( 4.6mm 脳 250mm , 5渭m ) . The mobile phase consisted of acetonitrile and water . The flow rate was 0.8 m L / min , the detection wavelength was 265 nm , and the column was 25 鈩，

本文編號：2040027